金青浩，侯晉軍，張建青,2，周 晶，吳婉瑩＊＊，果德安＊＊

（1.中國科學(xué)院上海藥物研究所中藥標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)國家工程實(shí)驗(yàn)室 上海 201203;2.沈陽藥科大學(xué)藥學(xué)院 本溪 117004）

中藥澤瀉具有利水滲濕，泄熱，化濁降脂等功效，常用于治療小便不利，水腫脹滿，泄瀉尿少，痰飲眩暈，熱淋澀痛等癥，為中醫(yī)臨床常用中藥；僅在2015版《中國藥典》中，就有58個(gè)中成藥含有澤瀉[1,2]。澤瀉在《中國藥典》中收載的來源為澤瀉科植物澤瀉Alisma orientale(Sam.)Juzep.的干燥塊莖，其質(zhì)量控制成分為三萜類成分23-乙酰澤瀉醇B。但我們在研究中發(fā)現(xiàn)市場流通的澤瀉依然存在指紋差別大、基原混亂而難以鑒別的實(shí)際問題。為了更好的認(rèn)知中藥澤瀉的質(zhì)量差異性，本文將在對澤瀉藥效物質(zhì)基礎(chǔ)、藥理活性全面認(rèn)識(shí)的基礎(chǔ)上，深入思考澤瀉藥材質(zhì)量差異性產(chǎn)生的各種影響因素，并探討應(yīng)對這些影響因素的對策。

1 澤瀉化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)研究概況

澤瀉中研究報(bào)道與藥效相關(guān)最多的成分主要為原萜烷型四環(huán)三萜類成分。上世紀(jì)60年代，日本學(xué)者T.Murata[3]對澤瀉的化學(xué)成分進(jìn)行研究，首次從澤瀉中分離得到原萜烷型四環(huán)三萜醇澤瀉醇A乙酸酯乙酸酯和澤瀉醇B 乙酸酯。80 年代，Oshima,Y.[4]學(xué)者首次從澤瀉中分離得到愈創(chuàng)木烷型倍半萜alismol 和lismoxide。至今為止，從澤瀉中共分離得到超過180多個(gè)化合物，其中主要包括115 個(gè)三萜和52 個(gè)倍半萜，以及4 個(gè)二萜。而黃酮、生物堿、多糖、揮發(fā)油等成分則少見報(bào)道。

1.1 三萜

澤瀉中主要生物活性成分為原萜烷型四環(huán)三萜類。原萜烷型四環(huán)三萜是四環(huán)三萜達(dá)瑪烷的立體異構(gòu)體，A-B、B-C和C-D環(huán)駢合方式為，椅-船-椅-船構(gòu)象式展開，并規(guī)定了8α-CH3，9β-CH3，13α-H和14β-CH3的立體異構(gòu)[5]。原萜烷型四環(huán)三萜僅大量分布于澤瀉屬澤瀉科澤瀉和東方澤瀉中，為澤瀉的特征性化學(xué)成分，也是澤瀉發(fā)揮利尿、降血糖、降血脂、抗脂肪肝及保肝藥效的主要藥效物質(zhì)基礎(chǔ)。原萜烷型三萜類成分在其他種屬中也見少量分布，如Lobelia chinensis Lour.(Lobeliaceae)，Garcinia speciosa Wall.(Guttiferae)和Leucas cephalotes(Roth)Spreng.(Labiatae)[5]。

目前共分離得到的115個(gè)三萜，其中113個(gè)為原萜烷型，僅Qiang[6]報(bào)道過1 個(gè)烏蘇烷型五環(huán)三萜arnidiol和1 個(gè)環(huán)阿屯型四環(huán)三萜3β-hydroxycycloart-23-ene 25-methyl ether（表1，圖1）。根據(jù)其結(jié)構(gòu)類型可將澤瀉原萜烷型三萜分為四環(huán)三萜、五環(huán)三萜和降三萜，其中四環(huán)三萜根據(jù)結(jié)構(gòu)特點(diǎn)可分為澤瀉醇A(E)類、澤瀉醇B類、澤瀉醇C類；五環(huán)三萜根據(jù)成環(huán)類型可以分為澤瀉醇F衍生物、螺甾烷型衍生物等（圖2）。

澤瀉醇類化合物中23-乙酰澤瀉醇B 的含量在各產(chǎn)地、各基原澤瀉中均含量較高，但23-乙酰澤瀉醇B具有熱不穩(wěn)定性和酸不穩(wěn)定性，在加熱或酸性條件下，易開醚環(huán)，生成24-乙酰澤瀉醇A。而24-乙酰澤瀉醇A同樣不穩(wěn)定，在溶液中易發(fā)生乙酰基遷移現(xiàn)象，生成23-乙酰澤瀉醇A，最終二者比例約為1∶1 時(shí)達(dá)到動(dòng)態(tài)平衡。澤瀉中三萜類化合物大多為澤瀉醇A或澤瀉醇B 的衍生物，這些衍生物同樣具有原型化合物的結(jié)構(gòu)不穩(wěn)定性質(zhì)。這種不穩(wěn)定性也給澤瀉質(zhì)量控制帶來困擾。

1.2 倍半萜

倍半萜是澤瀉中僅次于三萜的第二大類化學(xué)成分，主要包含3 個(gè)異戊二烯單位。澤瀉倍半萜的分離最早始于1983年，Oshima,Y.[4]等首次從澤瀉中分離得到2個(gè)倍半萜，即alismol和alismoxide,這2個(gè)化合物也是澤瀉中最具有代表性的愈創(chuàng)木烷型倍半萜。據(jù)統(tǒng)計(jì)，截止2018年1月，從澤瀉和東方澤瀉中共分離得到52個(gè)倍半萜（表2），除了愈創(chuàng)木烷型倍半萜，還有少量的吉馬烷型、桉葉烷型倍半萜和Oplopanane 型。雖然從澤瀉中分離得到大量倍半萜，但是相對于三萜，倍半萜的豐度低，結(jié)構(gòu)規(guī)律性差，難于檢測發(fā)現(xiàn)。因此，關(guān)于澤瀉倍半萜的研究鮮少報(bào)道。另外值得注意的是，在上世紀(jì)90 年代曾有報(bào)道過少量磺化倍半萜[53,54]，而近年來卻未見報(bào)道。此類成分被報(bào)道的時(shí)間為中藥材行業(yè)濫用硫磺熏制工藝的時(shí)間，故推測澤瀉中磺化倍半萜類成分為硫磺熏制過程中產(chǎn)生的人工產(chǎn)物，而非澤瀉原生二次代謝產(chǎn)物。

表1 澤瀉中分離得到的原萜烷型三萜類成分

續(xù)表1

No.Name MS M.F.CAS Reference 28 Alisol U 470.34 C30H46O4 176045-53-7[7]29 11-Deoxyalisol D 472.36 C30H48O4 228095-10-1[23]30 Alisol G 472.36 C30H48O4 155521-46-3[15]31 Alisol B 472.36 C30H48O4 18649-93-9[15]32 11-Deoxyalisol F 472.36 C30H48O4-[24]33 Alismanol F 474.33 C29H46O5 1812866-95-7[9]34 11-Deoxyalisol A 474.37 C30H50O4 155800-98-9[23]35 Alismanol A 484.32 C30H44O5 1812866-91-3[9]36 155800-95-6 486.33 C30H46O5 155800-95-6[21]37 16-oxo-11-Anhydroalisol A 486.33 C30H46O5 156338-93-1[18]38 Alisol C 486.33 C30H46O5 30489-27-1[21]39 Alisol O 488.35 C30H48O5 1005191-18-3[10]40 Alisol F 488.35 C30H48O5 155521-45-2[25]41 13β,17β-Epoxyalisol B 488.35 C30H48O5 156707-41-4[21]42 15,16-Dihydroalisol A 488.35 C30H48O5 1810003-39-4[9]43 neoalisol 488.35 C30H48O5 176045-52-6[26]44 16-oxo-11-deoxy-Alisol A 488.35 C30H48O5 2014345-22-1[27]45 16-oxo-23-deoxy-Alisol A 488.35 C30H48O5 156338-94-2[18]46 11-deoxy-13β,17β-Epoxyalisol A 490.37 C30H50O5 155800-99-0[21]47 Alisol E 490.37 C30H50O5 19865-73-7[28]48 Alisol A 490.37 C30H50O5 19885-10-0[29]49 11-Deoxyalisol B 23-acetate 498.37 C32H50O4 155073-74-8[17]50 3-oxo-16-oxo-11-4-Anhydroalisol A 500.31 C30H44O6 1810003-35-0[9]51 20-Hydroxyalisol C 502.33 C30H46O6 1810003-36-1[9]52 Alismanin A 502.37 C34H46O3 2144869-14-5[13]53 Alismanol O 502.33 C30H46O6 2172835-24-2[22]54 25-Methoxyalisol F 502.37 C31H50O5 2221029-53-2[7]55 16β-Methoxyalisol B 502.37 C31H50O5 2221029-57-6[7]56 Alisol T 502.37 C31H50O5 2221029-61-2P[7]57 Alisol V 502.37 C31H50O5 176045-54-8[7]58 11,24-Dihydroxy-alisol H 502.33 C30H46O6 228095-12-3[30]59 16-Oxoalisol A 504.35 C30H48O6 124515-98-6[28]60 Alismanol M 504.35 C30H48O6 2172835-22-0[22]61 23-O-Methylalisol A 504.38 C31H52O5 26575-97-3[21]62 25-O-Methylalisol A 504.38 C31H52O5 155801-00-6[21]63 16β-Hydroperoxyalisol B 504.35 C30H48O6 2221029-56-5[7]64 13β,17β-Epoxyalisol A 506.36 C30H50O6 142808-08-0[7]65 Alisol L 23-acetate 510.33 C32H46O5 29042-14-6[29]66 Alisol O 512.35 C32H48O5 928148-51-0[31]67 11-Deoxyalisol C 23-acetate 512.35 C32H48O5 119157-55-0[28]68 11-deoxy-13β,17β-Epoxyalisol B 23-acetate 514.37 C32H50O5 155800-94-5[21]69 Alisol B 11-monoacetate 514.37 C32H50O5 29081-17-2[32]70 25-Anhydroalisol A 11-acetate 514.37 C32H50O5 561055-03-6[26]71 Alisol B 23-acetate 514.37 C32H50O5 26575-95-1[29]

續(xù)表1

No.Name MS M.F.CAS Reference 72 25-Dehydroalisol A 24-acetate 514.37 C32H50O5 561055-04-7[29]73 25-O-Ethylalisol A 518.40 C32H54O5 1810003-37-2[9]74 Alismanol P 518.32 C30H46O7 2172835-25-3[22]75 Alisol P 520.34 C30H48O7 1005191-19-4[10]76 16β-Methoxyalisol E 520.38 C31H52O6 2221029-58-7[7]77 5β,29-Dihydroxy alisol A 522.36 C30H50O7 2170098-63-0[33]78 16β-Hydroperoxyalisol E 522.36 C30H50O7 2221029-60-1[7]79 Alisol J 23-acetate 526.33 C32H46O6 228095-16-7[23]80 Alisol K-23-acetate 526.33 C32H46O6 228095-18-9[23]81 Alismaketone-C 23-acetate 528.35 C32H48O6 253337-70-1[15]82 Alisol Q 23-acetate 528.35 C32H48O6 1415932-52-3[34]83 Alismanol C 528.35 C32H48O6 1810003-34-9[9]84 16-oxo-11-Anhydroalisol A 24-acetate 528.35 C32H48O6 2012601-72-6[6]85 Alisol C 23-acetate 528.35 C32H48O6 26575-93-9[28]86 16β-Hydroxyalisol B 23-acetate 530.36 C32H50O6 115346-25-3[21]87 Alizexol A 530.36 C32H50O6 170384-74-4[35]88 Alisol N 23-acetate 530.36 C32H50O6 228095-22-5[23]89 Alisol F 24-acetate 530.36 C32H50O6 443683-76-9[36]90 Alismaketone-A 23-acetate 530.36 C32H50O6 190323-46-7[37]91 Aismaketone-B 23-acetate 530.36 C32H50O6 253337-69-8[15]92 Alisol D 530.36 C32H50O6 119188-55-5[20]93 16β-acetoxy Alisol B 530.36 C32H50O6 2226238-13-5[38]94 16α-acetoxy Alisol B 530.36 C32H50O6 2226238-14-6[38]95 Alisol S 23-acetate 530.36 C32H50O6 2221029-55-4[7]96 Alisol E 23-acetate 532.38 C32H52O6 155301-58-9[28]97 Alisol A 24-acetate 532.38 C32H52O6 18674-16-3[3]98 Alisol A 23-acetate 532.38 C32H52O6 19865-75-9[29]99 Alisol E 24-acetate 532.38 C32H52O6 725240-79-9[39]100 16β,25-Dimethoxyalisol E 534.39 C32H54O6 2221029-59-8[7]101 Alismalactone 23-acetate 544.34 C32H48O7 190323-45-6[37]102 Alisol M 23-acetate 544.34 C32H48O7 228095-20-3[23]103 16β-methoxyalisol B 23-acetate 544.38 C33H52O6 115333-90-9[40]104 16-oxoalisol A 23-acetate 546.36 C32H50O7 124516-00-3[28]105 16-oxoalisol A 24-acetate 546.36 C32H50O7 124516-01-4[28]106 25-O-butyl alisol A 546.83 C34H58O5-[8]107 16β-hydroperoxyalisol B 23-acetate 546.36 C32H50O7 2221029-54-3[7]108 13,17-epoxyalisol A 24-acetate 548.37 C32H52O7 725240-80-2[39]109 13,17-epoxyalisol A 23-acetate 548.37 C32H52O7-[39]110 16β-ethoxy Alisol B 23-acetate 558.39 C34H54O6-[8]111 3-methylalismalactone 23-acetate 558.36 C33H50O7 190274-90-9[15]112 Alisol D acetate 572.37 C34H52O7 119157-54-9[20]113 120409-41-8 586.39 C35H54O7 120409-41-8[28]114 120409-07-6 614.38 C36H54O8 120409-07-6[28]115 Alismanin C 528.35 C32H48O6 2144869-16-7[13]

圖1 澤瀉中三萜類化合物結(jié)構(gòu)式

圖2 以23-乙酰澤瀉醇B為源頭的澤瀉原萜烷型三萜衍生路線圖

圖3 澤瀉中倍半萜萜類化合物結(jié)構(gòu)式

2 澤瀉藥理活性研究概況

2.1 利尿作用

澤瀉具有利水、滲濕，泄熱的功效，據(jù)《醫(yī)學(xué)啟源》、《綱目》等記載，澤瀉主要用于治療小便不利，水腫脹滿。大量的現(xiàn)代藥理學(xué)研究確定了澤瀉的利尿活性，F(xiàn)eng等[55]的研究表明澤瀉發(fā)揮利尿活性的部位是乙醇提取層，而伍小燕[56]的研究表明單次和連續(xù)給予澤瀉水提物均可以發(fā)揮利尿活性。值得關(guān)注的是，F(xiàn)eng等[55]的研究表明澤瀉醇提物在大劑量時(shí)（20，40 和80 mg·kg-1）反而表現(xiàn)出抗利尿的作用，這提醒我們需要關(guān)注澤瀉臨床用藥的劑量。關(guān)于澤瀉利尿機(jī)制的研究較少，前期研究表明澤瀉利尿的物質(zhì)基礎(chǔ)是澤瀉中的主要化學(xué)成分alisol A 23 acetate 和alisol B 23 acetate，通過促進(jìn)電解質(zhì)（Na+和K+）的排出而發(fā)揮利尿作用[57]。早期研究表明，澤瀉的利尿活性和螺內(nèi)酯一致，主要作用于腎小管，競爭性的結(jié)合醛固酮受體，近來伍小燕研究表明給予澤瀉提取物后大鼠腎臟髓質(zhì)AQP2 mRNA的水平降低，推測其利尿活性可能與降低腎臟髓質(zhì)AQP2作用有關(guān)[56]。

表2 澤瀉中分離得到的倍半萜類成

2.2 抗非酒精性脂肪肝作用

1960年，Kobavashi等人發(fā)現(xiàn)了澤瀉的抗脂肪肝作用，隨著非酒精性脂肪肝在人群中的發(fā)病率顯著提高，澤瀉的肝保護(hù)活性逐漸成為當(dāng)今國內(nèi)外學(xué)者的研究熱點(diǎn)，對其肝保護(hù)作用機(jī)制的探討在眾多病癥的研究中也最為深入。早期文獻(xiàn)大量報(bào)道了澤瀉對于非酒精性脂肪肝的治療效果研究，近年來則主要集中于對澤瀉發(fā)揮抗脂肪肝的機(jī)制研究。龔杰[58]等報(bào)道了澤瀉提取物對SD大鼠非酒精性脂肪肝的保護(hù)作用，并檢測到與肝硬化密切相關(guān)的I 相代謝酶CYP2E1 和CYP2A5 基因下調(diào)，同時(shí)HepG2 細(xì)胞實(shí)驗(yàn)表明，脂肪變性與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通路中JNK1、p-JNK1、CRP78、CHOP、XBP-1下調(diào)，STAT3上調(diào)有關(guān)。Jang 等[59]研究表明，澤瀉塊莖甲醇提取物（MEAO）也可以通過抑制肝細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激（CRP78、CHOP、slice XBP-1）從而阻止肝細(xì)胞脂肪變性，除此之外，澤瀉甲醇提取物還可以通過抑制肝脂肪生成基因（FAS、ACC1和DGA7）和VLDLR 等基因的表達(dá)，增加ApoB 的分泌，從而阻止肝細(xì)胞病理性肝脂肪變性?？傊瑵蔀a發(fā)揮抗脂肪肝活性很可能是通過降低內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激，而內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激與包括糖尿病在內(nèi)的多種疾病有關(guān)，因此可以推測澤瀉對糖尿病可能也會(huì)有一定的治療效果。同時(shí)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激通過調(diào)節(jié)脂質(zhì)生成基因和載脂蛋白的表達(dá)，從而改善胰島素抵抗，進(jìn)而調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝，說明澤瀉可能對高血脂癥有治療效果。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激還可以激活Nrf2,JNK,和NFκ-B 通路，這些通路在炎癥進(jìn)程中發(fā)揮重要的作用，說明澤瀉可能有一定的抗炎活性。

2.3 抗肝損傷和抗膽汁淤積

除了在抑制非酒精性脂肪肝中發(fā)揮重要作用外，澤瀉提取物及其單體在肝損傷和肝臟膽汁淤積也顯示了顯著的保護(hù)作用。Huo等[60]人研究表明澤瀉提取物通過激活FXR，下調(diào)膽汁酸攝取相關(guān)基因slc10al 和膽汁酸合成酶CYP7a1，上調(diào)膽汁酸代謝相關(guān)基因UGT1a1 和SULT2a1，最終縮小膽汁酸池，降低血清中AST，ALT，TBIL 和肝臟中TBA 的水平，并改善肝臟的病理學(xué)變化，從而逆轉(zhuǎn)α-萘基異硫氰酸酯（ANIT）誘導(dǎo)的大鼠膽汁淤積。而Meng 等[61]研究同樣表明alisol B 23 acetate 通過激活FXR 通路，逆轉(zhuǎn)α-雌炔醇誘導(dǎo)的大鼠肝臟損傷及膽汁淤積，但具體機(jī)制略有不同，相對于提取物，alisol B 23 acetate 同樣下調(diào)CYP7a1 并上調(diào)Sult2a1，但對Ugt1a1 沒有影響。除此之外，alisol B 23 acetate 還可上調(diào)膽鹽輸出泵BSEP 和多藥耐藥基因MRP2，增加膽汁酸從肝臟中的排出。并且alisol B 23 acetate 還可抑制NTCP 蛋白和肝臟對膽汁酸的吸收，下調(diào)CYP7a1的上游基因SHP 和FGF15，上調(diào)I相代謝酶CYP3a11，從而減少肝臟中膽汁的量。綜上所述，對于抗肝損傷和抗膽汁淤積癥，澤瀉主要通過作用于FXR通路發(fā)揮作用。

2.4 降血脂作用

前期研究表明澤瀉提取物可以降低人體和大鼠的TC、TG、LDL-G 的含量，并通過降低HMGCR，影響SREBF2和CYP7a1的表達(dá)，從而降低HFD昆明小鼠肝臟血清中膽固醇含量，降低甘油三脂含量，升高高密度脂蛋白[49]。近年來對澤瀉發(fā)揮降脂作用的機(jī)制研究較少，僅局限于細(xì)胞層面的機(jī)制探討。樓海霞[82]研究表明alisol A 24 acetate 通過激活PKA-HSL ERKPPARγ-Perilipin A 和AMPK-Perilipin 通路調(diào)控3T3-L1成熟脂肪細(xì)胞的脂質(zhì)分解，降低脂肪細(xì)胞的脂質(zhì)積累。alisol A 24 acetate 通過激活A(yù)MPK-ACC 和PPARα-CPT1A 通路抑制油酸鈉誘導(dǎo)的HL7702 肝細(xì)胞脂肪變性。Park等[62]報(bào)道了澤瀉乙醇提取物可以通過下調(diào)C/EBPβ，PPARγ和C/EBPα，進(jìn)而下調(diào)脂肪分解直接相關(guān)的基因aP2、FAS、HSL、LPL，最終抑制OP9細(xì)胞的脂肪分化。由此可見，在細(xì)胞層面，AMPK 和PPARγ 均是澤瀉發(fā)揮降血脂作用的關(guān)鍵通路蛋白。侯惠民等報(bào)道澤瀉提取物中澤瀉醇A與24-乙酰澤瀉醇A 的重量比例為1：0.4 時(shí)具有最強(qiáng)治療動(dòng)脈粥樣硬化效果[63]。許飛等報(bào)道澤瀉提取物中24-乙酰澤瀉醇A與23-乙酰澤瀉醇B的重量比為1：3時(shí)，對脂代謝關(guān)鍵酶HMG-CoA 還原酶具抑制作用，具有最好的降血脂活性[64]。

2.5 抗炎作用

澤瀉抗炎活性的研究，早期主要通過細(xì)胞模型抑制NO生成進(jìn)行簡單評價(jià)，近幾年來，對澤瀉對于炎癥動(dòng)物模型的治療效果研究報(bào)道越來越多，且較為深入。Shin[65]研究了澤瀉提取物對卵清蛋白誘導(dǎo)的BALB/c小鼠哮喘模型氣道炎癥的治療效果，結(jié)果表明，澤瀉提取物通過抑制NF-κB 蛋白的水平，進(jìn)而下調(diào)NF-κB p65和iNOS mRNA 的表達(dá)，從而減少呼吸道高反應(yīng)性，緩解呼吸道上皮增厚，最終達(dá)到抗哮喘的作用。同樣的Han[66]等研究了澤瀉乙醇提取物對C57 小鼠肺炎的治療效果，結(jié)果表明，其抗炎機(jī)制也與NF-κB通路有關(guān)。在LPS誘導(dǎo)的急性肺炎和LPS誘導(dǎo)的RAW 264.7細(xì)胞株模型中，高低劑量的澤瀉提取物均可以促進(jìn)Nrf2的活性，這通過Nrf2 相關(guān)的靶基因NQO-1,HO-1 和GCLC 得到驗(yàn)證，同時(shí)澤瀉提取物可以抑制NF-κB 及其相關(guān)促炎因子IL-1b 和促炎酶COX-2 和iNOS 的表達(dá)。上述結(jié)果表明，澤瀉提取物有顯著的抗炎活性，其作用機(jī)制可能和NF-κB相關(guān)炎癥通路相關(guān)。

2.6 抗腫瘤作用

澤瀉在抗癌方面的研究主要通過細(xì)胞模型試驗(yàn)。前期研究試驗(yàn)表明澤瀉提取物和alisol B 23 acetate 均可以逆轉(zhuǎn)腫瘤的多藥耐藥，alisol B 可以通過CaMKKAMPK-mTOR 途徑，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激及UPR 途徑誘導(dǎo)癌細(xì)胞死亡。Alisol B 23 acetate 通過上調(diào)BAX 和核易位，激活caspase-8,caspase-9 和caspase-3，使人類激素抵抗前列腺癌PC-3 癌細(xì)胞發(fā)生凋亡，通過線粒體和PI3K/Akt信號(hào)通路誘導(dǎo)人胃癌細(xì)胞系SGC7901凋亡[49]；Zhang[67]等對alisol B的抗乳腺癌活性進(jìn)行了研究，結(jié)果表明，alisol B對乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231具有顯著的抑制作用，其機(jī)制與alisol B 誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，阻滯細(xì)胞周期于G0/G1期，使線粒體膜電位消失，激活caspase-3/-9 和p38 MAPK 信號(hào)通路，抑制MTOR/NF-κB 信號(hào)通路，誘導(dǎo)ROS 產(chǎn)生等因素有關(guān)。Zhang 等[68]對alisol B 23 acetate 的抗卵巢癌活性進(jìn)行了研究，結(jié)果表明，alisol B 23 acetate 通過下調(diào)CDK4,CDK6 和cyclin D1將細(xì)胞周期阻滯于G1期，上調(diào)PARP和Bax/Bcl-2比例誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激IRE1信號(hào)通路發(fā)揮抗癌活性，下調(diào)金屬蛋白酶MMP-2 和MMP-9 的水平來影響細(xì)胞遷移，最終發(fā)揮其對癌癥細(xì)胞的抗細(xì)胞增殖，抗遷移和抗侵襲作用。

3 影響澤瀉藥材質(zhì)量因素

通過對澤瀉化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)和藥理活性相關(guān)文獻(xiàn)梳理，可以發(fā)現(xiàn)澤瀉藥效物質(zhì)基礎(chǔ)具有以下兩個(gè)特點(diǎn)：①其藥效相關(guān)成分具有熱不穩(wěn)定性，以主成分23-乙酰澤瀉醇B為代表的生物活性成分受熱后易降解為其他三萜類成分，其降解轉(zhuǎn)化率和新生成化合物數(shù)量與溫度、受熱時(shí)間等有密切關(guān)系。②藥理活性不僅與指標(biāo)成分含量有關(guān)，還與各成分之間含量比例有關(guān)。

為進(jìn)一步明確市場上澤瀉質(zhì)量差異大的原因，我們從澤瀉藥材基原、產(chǎn)地、種植技術(shù)、原產(chǎn)地加工等藥材生產(chǎn)環(huán)節(jié)進(jìn)行探討：

3.1 藥材原植物基原對藥材質(zhì)量的影響

經(jīng)李麗霞等在對澤瀉進(jìn)行本草考證發(fā)現(xiàn)，古籍記載了6種澤瀉植物，可考的有5種，1種非澤瀉屬植物，其余4種屬于澤瀉科澤瀉屬植物。根據(jù)古籍對澤瀉形態(tài)描述對這四種澤瀉進(jìn)行鑒定，其中2 種鑒定為東方澤瀉Alisma orientale(Sam.)Juzep.，另外2 種分別是小澤瀉Alisma nanum D.F.Cui 和窄葉澤瀉Alisma canaliculatum A.Braun et Bouche.[69]。

目前，市場上流通的商品澤瀉基原的主要有兩個(gè)，一種為2015 版《中國藥典》收錄種A.orientale(Sam.)Juz，該種主要分布于福建、江西兩省，市場上稱為“建澤瀉”。另一種為A.plantago-aquatica L.，該種主要分布于四川、云南、貴州等省，市場上稱為“川澤瀉”[70]。

然而，馬曉沖，宋經(jīng)元等研究發(fā)現(xiàn)澤瀉A.plantagoaquatica Linn.與東方澤瀉A.orientale(Sam.)Juzep.二者在外部形態(tài)特征區(qū)別不明顯，通過經(jīng)典鑒定方法難以準(zhǔn)確鑒定基原。對市售28 種標(biāo)注東方澤瀉的飲片采用DNA 條形碼SNP 進(jìn)行鑒別，結(jié)果顯示僅有2種飲片為東方澤瀉，其余26種為澤瀉。有研究認(rèn)為東方澤瀉為“建澤瀉”，而澤瀉為“川澤瀉”[70]。同時(shí)有報(bào)道[71]稱川澤瀉為市場流通主要品種年產(chǎn)量約占全國產(chǎn)量的70%，“建澤瀉”產(chǎn)量逐年萎縮已經(jīng)不足全國產(chǎn)量的5%，與澤瀉產(chǎn)量變化呈鮮明對比的是有關(guān)澤瀉的研究論文主要以“建澤瀉”A.orientale 為主，極少見“川澤瀉”A.plantago-aquatica.根據(jù)這一反?，F(xiàn)象可以推測，不僅僅是市場上澤瀉的基原是混亂的，研究澤瀉的科研人員對澤瀉的基原認(rèn)識(shí)也有可能是模糊的。另有研究，將采自福建、江西被鑒定為“建澤瀉”A.orientale 種子和采自四川彭山鑒定為“川澤瀉”A.plantagoaquatica種子，引種到福建建甌，經(jīng)過三年連續(xù)實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，“建澤瀉”與“川澤瀉”藥材品質(zhì)仍有顯著性差異，基本保持其在原產(chǎn)地特點(diǎn)[72]。研究結(jié)果提示，澤瀉基原對藥材品質(zhì)有極大的影響。

3.2 藥材產(chǎn)地對澤瀉藥材質(zhì)量的影響

據(jù)中藥材天地網(wǎng)的一份調(diào)查顯示，原有“建”、“川”、“江”的格局已經(jīng)悄然變?yōu)椤按ā?、“廣”、“鄂”、“建+江”。傳統(tǒng)澤瀉主產(chǎn)區(qū)中除四川仍是澤瀉主產(chǎn)地，福建、江西兩地澤瀉種植面積逐年萎縮。從澤瀉藥材各地產(chǎn)量上來看，市場主流澤瀉品種為“川澤瀉”，僅四川一地產(chǎn)量就占全國總量的70%（約6000 t）。位居第二位的是廣西產(chǎn)“廣澤瀉”，產(chǎn)量約為全國總量的20%。傳統(tǒng)道地產(chǎn)區(qū)福建、江西的產(chǎn)量逐年下降，“建澤瀉”的產(chǎn)量已經(jīng)不足全國總產(chǎn)量的5%。湖北洪湖作為新興澤瀉產(chǎn)區(qū)，自2016 年起引種澤瀉，保持3000 畝的種植規(guī)模，每年為市場提供約600 t澤瀉[71]。

有研究表明，澤瀉有效成分含量受環(huán)境影響較大，在四川不同氣候區(qū)域產(chǎn)地的澤瀉在外觀形態(tài)、產(chǎn)量、主要有效成分上存在顯著性差異[73]。林月貞等對購于福建、四川、安徽、湖北、江西、陜西、甘肅等7省9家企業(yè)的12批次澤瀉（A.orientale）飲片進(jìn)行特征指紋圖譜和23-乙酰澤瀉醇B的含量分析，發(fā)現(xiàn)產(chǎn)地不同澤瀉的外觀、內(nèi)在質(zhì)量都有明顯區(qū)別[74]。羅尚華等采用1HNMR代謝組學(xué)方法，對不同產(chǎn)地的澤瀉進(jìn)行藥材整體代謝產(chǎn)物差異和質(zhì)量評價(jià)。結(jié)果顯示以23-乙酰澤瀉醇B 為評價(jià)指標(biāo)，四川產(chǎn)地最優(yōu)，顯著高于福建產(chǎn)地。并分析鑒定不同產(chǎn)地澤瀉的4 個(gè)主要差異代謝產(chǎn)物，經(jīng)PLS-DA 分析可將福建、四川、貴州、廣西等四個(gè)產(chǎn)地澤瀉藥材明顯區(qū)分開來[75]。趙萬里等采用RPHPLC-DAD技術(shù)同時(shí)測定“建”、“川”共25批澤瀉中11個(gè)三萜成分，并用DPS 14.50數(shù)據(jù)處理軟件分析被測樣品，以11 種指標(biāo)成分量為變量，結(jié)果顯示該方法能夠很好的區(qū)分“閩產(chǎn)澤瀉”和“川產(chǎn)澤瀉”[76]。邰艷妮等利用UPLC-MS-MS 法在MRM 模式下對福建、江西和四川三個(gè)產(chǎn)地24 批澤瀉中16 種三萜類成分進(jìn)行含量測定。結(jié)果顯示，福建和江西澤瀉中含量最高的是23-乙酰澤瀉醇B，其次是澤瀉醇B。而四川澤瀉中含量最高的是澤瀉醇B，其次是23-乙酰澤瀉醇B。另外，有明確腎毒性報(bào)道的澤瀉醇C[77]，在四川澤瀉中遠(yuǎn)高于江西和福建澤瀉。通過PCA 主成分聚類分析結(jié)果可以看出，四川澤瀉明顯區(qū)別于福建和江西，福建和江西則較為接近，無法區(qū)分[78]。

通過上述文獻(xiàn)可以看出，四川、福建、江西等地澤瀉在成分種類上并無明顯差異，但是在含量比例上具有顯著性差異。另外，廣西、湖北等新興產(chǎn)地藥材相關(guān)研究還較少，除廣西澤瀉有少量報(bào)道外，湖北澤瀉至今未見質(zhì)量分析報(bào)道。以上情況應(yīng)當(dāng)引起研究人員注意。

3.3 產(chǎn)地加工對藥材質(zhì)量的影響

澤瀉產(chǎn)地加工主要是采挖、洗凈、烘培、脫毛、烘干等工藝流程，各產(chǎn)地大體相似。但在最重要的兩次烘干工藝處理上卻大相徑庭，主要表現(xiàn)為每次烘培的溫度及時(shí)間。現(xiàn)有研究表明，澤瀉主要指標(biāo)性成分23-乙酰澤瀉醇B 為熱不穩(wěn)定成分，受熱后易發(fā)生醚環(huán)開環(huán)，生成24-乙酰澤瀉醇A，隨著受熱時(shí)間延長24-乙酰澤瀉醇A會(huì)向23-乙酰澤瀉醇A轉(zhuǎn)變，亦或是脫掉乙酰基生成澤瀉醇A[79]。由此可見，不同的產(chǎn)地加工工藝勢必導(dǎo)致不同產(chǎn)地藥材主成分比例差異。因此，應(yīng)當(dāng)重視原產(chǎn)地加工工藝對藥材中主成分變化的影響，結(jié)合現(xiàn)代藥理學(xué)、毒理學(xué)研究最新成果優(yōu)化產(chǎn)地加工工藝，以達(dá)到藥效顯著、質(zhì)量穩(wěn)定可控的目的。

3.4 其他影響因素

國家藥監(jiān)局在《中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（征求意見稿）中指出，種質(zhì)是中藥材安全、有效和質(zhì)量控制的物質(zhì)基礎(chǔ)，應(yīng)當(dāng)進(jìn)行嚴(yán)格限定。對人工誘變種和生物技術(shù)選育品種等，應(yīng)通過試驗(yàn)數(shù)據(jù)，充分評估風(fēng)險(xiǎn)。然而，現(xiàn)代農(nóng)業(yè)增產(chǎn)技術(shù)對中藥材質(zhì)量影響也不容忽視。如施肥、去薹、去花等一些傳統(tǒng)農(nóng)業(yè)技術(shù)手段[80]，甚至是生物技術(shù)干預(yù)植物正常生長狀態(tài)，從而提高藥材產(chǎn)量或是提高指標(biāo)成分含量。有研究表明，栽培藥材與野生藥材在活性成分含量、構(gòu)成比例上具有顯著性差異，現(xiàn)代農(nóng)業(yè)技術(shù)正悄然加大種植藥材與野生藥材的差異。這種差異變化，應(yīng)當(dāng)引起管理機(jī)構(gòu)、生產(chǎn)機(jī)構(gòu)、研究機(jī)構(gòu)的重視，以確保藥材質(zhì)量安全。

4 討論

本文從澤瀉的化學(xué)成分、藥理活性，以及澤瀉藥材質(zhì)量影響因素等方面，論述了目前澤瀉研究質(zhì)量研究的基本概況。綜述發(fā)現(xiàn)，澤瀉活性成分相對單一，且容易受到藥材基原、產(chǎn)地、種植技術(shù)、產(chǎn)地加工工藝等因素影響，引起藥材活性成分在含量和組成上的巨大差異。這些影響因素目前還是中藥監(jiān)管體系的盲區(qū)?？v觀我國中藥監(jiān)管體系始于對中藥飲片加工企業(yè)的GMP認(rèn)證，在此后的藥材飲片倉儲(chǔ)、加工（炮制）、制劑等環(huán)節(jié)都有嚴(yán)格的法律、法規(guī)進(jìn)行監(jiān)管，這些措施可極大的減少藥材在生產(chǎn)過程中因各種因素導(dǎo)致的質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)。

近期國家藥監(jiān)局發(fā)布《中藥材生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范》（征求意見稿）中提出“六個(gè)統(tǒng)一”，這一法規(guī)的頒布將為從源頭控制中藥材質(zhì)量提供政策依據(jù)。并將與飲片企業(yè)GMP認(rèn)證等一系列監(jiān)管措施一道，形成全產(chǎn)業(yè)鏈的封閉監(jiān)管體系。

有了監(jiān)管規(guī)范，還應(yīng)當(dāng)有監(jiān)管的具體手段。近年來隨著中藥分析技術(shù)的不斷提升，檢測精度也隨之日益精進(jìn)。本實(shí)驗(yàn)室多年一直秉承著“深入研究，淺出標(biāo)準(zhǔn)”的研究策略，構(gòu)建多維色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)框架體系，將新技術(shù)、新方法應(yīng)用于中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究與建立中，提高了定性、定量分析的整體性、專屬性。通過深入研究中藥材物質(zhì)基礎(chǔ)、生物活性，通過構(gòu)建對照圖譜-薄層圖譜、特征圖譜與指紋圖譜，將中藥標(biāo)準(zhǔn)以直觀生動(dòng)的形式，簡單清晰的展現(xiàn)出來[81]。將上述技術(shù)應(yīng)用于不同基原、不同產(chǎn)地、不同加工工藝等條件下生產(chǎn)的中藥材（澤瀉）質(zhì)量控制，形成種子（種苗）標(biāo)準(zhǔn)圖譜、原藥材標(biāo)準(zhǔn)圖譜、商品藥材標(biāo)準(zhǔn)圖譜等系列質(zhì)量控制指紋圖譜，就可能有效的控制市場流通的澤瀉質(zhì)量。