賈靜文，趙麗娟，羅維巍，呂琳琳，夏 凡，周 游

(鞍山師范學(xué)院 化學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院，遼寧 鞍山 114005)

牡蠣(OstreaGigasThunberg)又名蠣蛤、古賁、左顧牡蠣、牡蛤、蠣房、蠔莆等。牡蠣隸屬軟體動(dòng)物門，瓣鰓綱，牡蠣目，牡蠣科。性味咸澀、涼[1]。生長(zhǎng)在溫帶、熱帶海洋中，以法國(guó)沿海所產(chǎn)最有名,我國(guó)主產(chǎn)江蘇、福建、廣東、浙江、河北、遼寧及山東等沿海一帶。牡蠣肉肥爽滑、味道鮮美、營(yíng)養(yǎng)豐富，素有"海底牛奶"之美稱，其外殼還可作為中藥[2]。牡蠣含多種氨基酸、維生素、牛磺酸，還富含鈣、磷、鐵、鋅、硒等營(yíng)養(yǎng)成分。牡蠣雜食性，主要以浮游動(dòng)植物為食[3]。

脂肪酸是由碳，氫，氧三種元素組成的一類化合物，包括飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸。脂肪酸參與人體的許多生理活動(dòng)，它與維生素，氨基酸是人體最重要的營(yíng)養(yǎng)素之一，一定量的多不飽和脂肪酸促進(jìn)人體膽固醇代謝，降低血清中總膽固醇含量，軟化血管，防止脂質(zhì)在肝臟和動(dòng)脈壁沉積，預(yù)防心腦血管疾病[4]。脂肪酸也是重要的化工原料，主要用于化工，塑料，醫(yī)藥，洗滌劑等工業(yè)，用途非常廣泛[5]。

抗氧化劑是能延緩易氧化物氧化速度的物質(zhì)，是通過(guò)阻礙自動(dòng)氧化的一步或多步反應(yīng)而起作用的，是抑制自由基的一種物質(zhì)，和自由基是一對(duì)矛盾體，天然產(chǎn)物獲取的抗氧化劑可以通過(guò)消滅自由基來(lái)抵抗它們的氧化作用，達(dá)到預(yù)防對(duì)我們身體的破壞作用。

牡蠣脂肪酸的研究有過(guò)相關(guān)的報(bào)道[6-8]，但采用索氏提取法對(duì)產(chǎn)自大連地區(qū)的牡蠣進(jìn)行脂肪酸提取、不同甲酯化方法比較分析，并對(duì)脂肪酸進(jìn)行抗氧化性研究尚未見報(bào)道。

1 儀器、試劑、材料與方法

1.1 主要儀器

202-OAB 電熱恒溫干燥箱(天津泰斯特儀器有限公司)，HP6890/HP5973 氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀(美國(guó)惠普公司)，RE-52A型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)，DK-98-11A電熱恒溫水浴鍋(天津泰斯特儀器有限公司)，SHB-Ⅲ循環(huán)水式多用真空泵(鄭州長(zhǎng)城科工貿(mào)有限公司)。

1.2 試劑

石油醚(沸程60～90℃，分析純)，氫氧化鉀(分析純)，甲醇(分析純)均來(lái)自天津光復(fù)科技發(fā)展有限公司；三(羥甲基)氨基甲烷(Tris)(分析純)，乙二胺四乙酸二鈉(分析純)均來(lái)自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；濃硫酸(分析純，國(guó)藥集團(tuán)化工試劑有限公司)，連苯三酚(分析純，上海麥克林生化科技有限公司)，三氯甲烷(氯仿) (分析純，天津市光復(fù)精細(xì)化工研究所)，正己烷 (分析純，天津博迪化工股份有限公司)，鹽酸(分析純，沈陽(yáng)化學(xué)試劑廠)。

1.3 材料

牡蠣(大連地區(qū))。

1.4 方法

1.4.1 牡蠣脂肪酸的提取

將牡蠣洗凈、烘干、粉碎，準(zhǔn)確稱取10g，放入索氏提取器中，加入240mL石油醚，水浴回流6h，冷卻后，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀回收石油醚得淡黃色油脂，用分析天平稱質(zhì)量，計(jì)算提取率。

1.4.2 脂肪酸甲酯的制備

1.4.2.1 濃硫酸-甲醇法

0.5mL油樣與2.0mL濃硫酸-甲醇[V(濃硫酸)∶V(甲醇)= 1∶10]混合液在55℃反應(yīng)6h，加去離子水5mL，再加入2mL氯仿，震蕩2min，靜置，取氯仿層，進(jìn)行GC/MS分析。

1.4.2.2 氫氧化鉀-甲醇法

0.5 mL油樣加入5.0mL正己烷溶解后，再加入2.0mL 氫氧化鉀甲醇液(0.5mol/L)，振蕩2min,30℃恒溫水浴30min,加去離子水5mL，分液漏斗振蕩,靜置分層,取上層清液，加無(wú)水硫酸鈉干燥過(guò)夜,做GC-MC分析。

1.4.3 成分分析

1.4.3.1 GC/MS條件

色譜條件：色譜柱為HP-5(25.0m×200μm×0.33μm)彈性石英毛細(xì)管柱；分流比20∶1；升溫程序：100℃→280℃(升溫速度10℃/min)；載氣為氦氣，流量1mL/min；進(jìn)樣口溫度300℃；進(jìn)樣量0.2μL。

質(zhì)譜條件：離子源(EI)溫度230℃；接口溫度230℃；電離電壓230eV；電子倍增器電壓2012V；發(fā)射電流34.6μA；掃描范圍m/z 20-500amu；溶劑延遲3min。

1.4.3.2 定性分析

取0.2μL樣品，用氣相色譜-質(zhì)譜-計(jì)算機(jī)聯(lián)用儀進(jìn)行分析鑒定，通過(guò)G1701BA化學(xué)工作站數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，檢索NIST98標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)譜圖庫(kù)并核對(duì)有關(guān)文獻(xiàn)，確定其各化學(xué)成分。

1.4.3.3 定量分析

通過(guò)G1701BA化學(xué)工作站數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，采用峰面積歸一化法進(jìn)行定量分析，得出各化學(xué)成分在各樣品中的相對(duì)百分含量。

1.4.4 脂肪酸對(duì)超氧陰離子自由基的抑制作用

取4只試管，編號(hào)，各加入3mL Tris-HCl緩沖液，25℃恒溫20min，一只加入0μL脂肪酸，另三只分別加入10μL脂肪酸，最后都加入4.8μL連苯三酚，在波長(zhǎng)325nm處以時(shí)間模式記錄4min之內(nèi)，每隔1分鐘吸光度的變化，記作A1、A2、A3、A4。抑制率按下式進(jìn)行計(jì)算：

式中：△A0為連苯三酚的自氧化隨時(shí)間的變化率，△Ax為加入脂肪酸后的連苯三酚的自氧化隨時(shí)間的平均變化率。

2 結(jié)果與分析

2.1 牡蠣脂肪酸的提取率

提取牡蠣脂肪酸2.17g，提取率為21.70%。

2.2 GC/MS研究脂肪酸組成

按前述實(shí)驗(yàn)步驟，由化學(xué)工作站給出牡蠣脂肪酸組成的GC/MS總離子流圖。見圖1、圖2。

圖1 牡蠣脂肪酸甲酯的總離子流圖( 氫氧化鉀-甲醇法 )Fig.1 Tic of fatty acid methylester compounds in ostrea gigas thunberg oil from Dalian city(potassium hydroxide-methyl alcohol)

圖2 大連牡蠣脂肪酸甲酯的總離子流圖( 濃硫酸-甲醇法 )Fig.2 Tic of fatty acid methylester compounds in ostrea gigas thunberg oil from Dalian city(dense sulfuric acid-methyl alcohol)

將分析確認(rèn)牡蠣脂肪酸中的化學(xué)成分及在脂肪酸中的相對(duì)百分含量列入表1～表2。

表1 大連牡蠣中脂肪酸組成及相對(duì)含量(氫氧化鉀-甲醇法)Table1 Compositions of fatty in ostrea gigas thunberg oil from Dalian city and their relative contents(potassium hydroxide -methyl alcohol)

表2 大連牡蠣中脂肪酸組成及相對(duì)含量(濃硫酸-甲醇法)Table2 Compositions of fatty in ostrea gigas thunberg.oil from Dalian city and their relative contents(dense sulfuric acid-methyl alcohol)

2.3 脂肪酸抗氧化分析

脂肪酸對(duì)超氧陰離子自由基的抑制作用列入表3。

表3 大連牡蠣中脂肪酸對(duì)的抑制率Table 3 Inhibitory rate of essential oil in ostrea gigas thunberg From Dalian city against superoxide anion free radicals

3 結(jié)論

結(jié)果顯示：大連牡蠣牡蠣不飽和脂肪酸含量較高，具有很高的利用價(jià)值，主要含有4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸(C22∶6，即DHA)、5,8,11,14,17-二十碳五烯酸(C20∶5，即EPA)、9-十八碳烯酸(油酸)、十六烷酸(棕櫚酸),(Z，Z)1，3-環(huán)辛二烯等，其中DHA和EPA它們都屬于功能性物質(zhì)，DHA有很好的健腦功能，對(duì)老年性癡呆癥、異位性皮炎、高脂血癥有療效；EPA能使血小板凝聚能力降低、出血后血液凝固時(shí)間變長(zhǎng)、心肌梗死發(fā)病率降低等，EPA還可降低血液黏度、提高高密度膽固醇(優(yōu)質(zhì)膽固醇)的濃度、降低低密度膽固醇(劣質(zhì)膽固醇)的濃度，因此EPA被認(rèn)為可能對(duì)心血管疾病有良好的預(yù)防效果[12]；油酸能降低有害膽固醇(低密度脂蛋白)，保持有益膽固醇(高密度脂蛋白)的水平，從而減緩動(dòng)脈粥樣硬化，預(yù)防冠心病等心血管疾病的發(fā)生[13]；棕櫚酸用于制取蠟燭、肥皂、潤(rùn)滑劑、合成洗滌劑、軟化劑等，同時(shí)廣泛用于化妝制品、塑料耐寒增塑劑、脫模劑、穩(wěn)定劑、橡膠硫化促進(jìn)劑、防水劑、拋光劑、金屬礦物浮選劑、軟化劑、醫(yī)藥品及其他有機(jī)化學(xué)品，還可用作油溶性顏料的溶劑、蠟筆調(diào)滑劑、蠟紙打光劑等[14]；(Z，Z)1，3-環(huán)辛二烯是很好的化工中間體。

人體因?yàn)榕c外界的持續(xù)接觸，包括 呼吸(氧化反應(yīng))、外界污染、放射線照射等因素不斷的在人體體內(nèi)產(chǎn)生自由基?？茖W(xué)研究表明，癌癥、衰老或其它疾病大都與過(guò)量自由基的產(chǎn)生有關(guān)聯(lián)。本實(shí)驗(yàn)表明牡蠣中脂肪酸對(duì)超氧陰離子有很好的清除作用，體現(xiàn)出很好的抗氧化性，這對(duì)于由自由基引起的疾病,如炎癥、輻射損傷腫瘤、衰老等有一定的意義[15]，它作為天然保健食品的開發(fā)有一定價(jià)值。

由于牡蠣已大規(guī)模養(yǎng)殖,產(chǎn)量大,價(jià)格低,因此是提取不飽和脂肪酸的好原料。本文為充分利用和開發(fā)牡蠣的使用價(jià)值,提供了科學(xué)依據(jù)。