吉沐祥 王曉琳 黃潔雪 吳祥 陳宏州 楊敬輝 莊義慶

摘要：為明確生防菌株JX-13的分類地位，評(píng)價(jià)其對(duì)草莓枯萎病的生防效果，依據(jù)JX-13菌株形態(tài)、生理生化特性、16S rRNA和gyrB基因堿基序列同源性對(duì)其進(jìn)行分析鑒定，采用菌絲生長(zhǎng)速率法和田間試驗(yàn)評(píng)價(jià)其對(duì)草莓的促生作用和枯萎病生防效果。結(jié)果表明，JX-13菌株的形態(tài)特征和生理生化特性均與芽孢桿菌很接近，16S rRNA和gyrB基因堿基序列分析發(fā)現(xiàn)，JX-13菌株在系統(tǒng)發(fā)育樹中與Paenibacillus polymyxa strain IIF5SW-B3屬于一個(gè)類群，相似性高達(dá)99.00%。發(fā)酵加工的lxl0CFU/g JX-13可濕性粉劑（WP）和lxl0CFU/g枯草芽孢桿菌WP對(duì)草莓枯萎病菌菌絲生長(zhǎng)的抑制中質(zhì)量濃度（EC50）分別為19. 977μg/ml和41. 409μg/ml。對(duì)草莓繁苗田進(jìn)行2次灌根處理，JX-13 WP 500倍液處理對(duì)草莓植株有明顯促生作用，對(duì)草莓枯萎病的防治效果達(dá)96.03%。定植當(dāng)天和第7d對(duì)定植田進(jìn)行2次灌根處理，藥后50 d、80 d分別進(jìn)行田間調(diào)查，JX-13 WP 500倍液對(duì)草莓枯萎病防治效果分別為100.00%和68.94%。菌株JX-13被鑒定為多黏類芽孢桿菌Paenibacillus polymyxa，其發(fā)酵液加工的lx 10CFU/g WP在草莓繁苗田和定植田中具有防治枯萎病和促生的作用。

關(guān)鍵詞：草莓枯萎病;拮抗細(xì)菌JX-13菌株;促生作用;生防效果

中圖分類號(hào)：S668.4

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)： 1000-4440（2019）03-0586-08

草莓（Fragaria ananassa Duch.）是一種高價(jià)值經(jīng)濟(jì)作物，在中國(guó)種植廣泛[1-2]，已成為許多地區(qū)的支柱產(chǎn)業(yè)。2017年，中國(guó)的草莓種植總面積達(dá)到1.5x10 hm2，總產(chǎn)量約4.Ox10 t，總產(chǎn)值已超過(guò)6.Ox10元。在草莓生產(chǎn)中，由于耕地有限，通常采取連年種植的栽培方式，但隨著種植茬口的增加，土壤出現(xiàn)鹽漬化、酸化和土壤微生態(tài)失衡等問(wèn)題[3]。草莓對(duì)土生真菌，如疫霉菌屬（Phytophthora spp.）、腐霉屬（Pythium spp.）、絲核菌屬（Rhizoctonia spp.）、鐮刀菌屬（Fusarium spp.）、輪枝菌屬（Verticillium spp.）等多種病原菌敏感[4]，而連作會(huì)使病害加重，造成草莓生長(zhǎng)發(fā)育遲緩，匍匐莖減少，結(jié)果減少，果實(shí)膨大受阻，品質(zhì)下降，甚至全株枯死等危害[5]。有研究結(jié)果表明，草莓連作種植時(shí)，第二年重茬草莓發(fā)病率達(dá)55.0% - 91. 6%[6]，草莓的連年種植模式嚴(yán)重制約了草莓產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展[7]。

草莓枯萎病是由半知菌亞門瘤座菌科尖孢鐮刀菌草莓?；虵usarium oxysporum±.sp. fragariae引起的重要土傳病害，病原菌從根部侵染引起維管束病變，導(dǎo)致草莓品質(zhì)降低，甚至全株枯死[8]。目前，對(duì)該病害的防治仍以化學(xué)防治為主，常在根部施用惡霉靈、代森錳鋅、多菌靈和甲基托布津等殺菌劑[9]。楊煥青等[10]的研究結(jié)果表明，草莓枯萎病菌對(duì)三唑類殺菌劑烯唑醇、戊唑醇、腈菌唑和苯醚甲環(huán)唑十分敏感。單一化學(xué)藥劑長(zhǎng)期使用導(dǎo)致病原菌抗藥性增強(qiáng)，農(nóng)藥殘留超標(biāo)，環(huán)境污染[11-12]。由于生防菌具有成本低和對(duì)環(huán)境友好的特點(diǎn)[13-19]，利用生防菌防治植物的土傳病害已成為國(guó)內(nèi)外科研工作者的研究熱點(diǎn)。項(xiàng)目組前期從句容地區(qū)石楠根部篩選了1株具有廣譜抑菌效果的生防株菌JX-13，本研究擬根據(jù)其菌體形態(tài)特征、生理生化特征、16S rRNA和gyrB基因序列對(duì)其進(jìn)行鑒定，并對(duì)菌液進(jìn)行加工，以期為草莓枯萎病的防治提供理論參考。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 供試菌株 草莓枯萎病菌（Fusariumoxysporum f.sp. fragariae）由江蘇丘陵地區(qū)鎮(zhèn)江農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所提供。生防菌株JX-13從句容地區(qū)石楠根部分離獲得。

1.1.2 培養(yǎng)基Luria-Bertani培養(yǎng)基用于生防菌株JX-13的分離、鑒定、保存和培養(yǎng)‘20]，馬鈴薯培養(yǎng)基（PDA）用于草莓枯萎病菌的培養(yǎng)和毒力測(cè)定[21]。

1.2 方法

1.2.1 生防菌株JX-13的形態(tài)學(xué)鑒定 革蘭氏染色、菌體形態(tài)和菌落形態(tài)的觀察參照杜秉海[22]的方法進(jìn)行。菌株生理生化反應(yīng)參照《常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)》[23]進(jìn)行。

1.2.2 生防菌株JX-13的分子鑒定在液體馬鈴薯培養(yǎng)基中，30℃下振蕩培養(yǎng)JX-13菌株至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，10 000 r/min離心10 min，收集菌體。細(xì)菌基因組DNA提取參照Ausubel等[24]的方法，采用細(xì)菌通用引物（27F：5 '-AGAGTTI'GATCCTGGCTCAG-3’;1492R：5 '_GGrITACCTTGrITACGACTT_3'）進(jìn)行PCR擴(kuò)增。以細(xì)菌基因組DNA為模板，對(duì)gyrB基因堿基序列進(jìn)行PCR擴(kuò)增，引物序列為UP-1S：5’一GAAGTCATCATGACCGrITCTGCA_3'， UP-2Sr：5 '-AG-CAGGGTACGGATGTGCGAGCC-3’，PCR產(chǎn)物由生工生物工程（上海）股份有限公司進(jìn)行測(cè)序。將16SrRNA基因堿基序列和gyrB基因堿基序列結(jié)果提交至美國(guó)國(guó)立生物技術(shù)信息中心（NCBI），通過(guò)BLAST進(jìn)行同源性比對(duì)，利用MEGA 7.0軟件構(gòu)建JX-13菌株系統(tǒng)進(jìn)化樹（ Bootstrap=1 000）。

1.2.3 JX-13茵劑的加工

1.2.3.1 菌液的獲得用無(wú)菌牙簽挑取事先在PDA固體培養(yǎng)基上劃線培養(yǎng)好的JX-13菌株單菌落，接種于裝有5 ml PDA液體培養(yǎng)基的容積為20 ml的三角瓶中，于30℃、200 r/min條件下振蕩培養(yǎng)16h，將所得5 ml培養(yǎng)液全部接種于裝有400 ml PDA培養(yǎng)液的容積為1 000 ml的三角瓶中，200 r/min、30 cC條件下振蕩培養(yǎng)16 h。將所得的400 ml培養(yǎng)液接種于裝有20 L培養(yǎng)液的容積為30 L的發(fā)酵罐（產(chǎn)品型號(hào)：GUS-30，鎮(zhèn)江東方生物工程設(shè)備技術(shù)有

限責(zé)任公司產(chǎn)品）中，20 L發(fā)酵培養(yǎng)液中固容物含量為：豆粕100 g、馬鈴薯淀粉200g、蔗糖25 g、酵母粉25g、CaC03 20g、MnS041g，設(shè)置發(fā)酵條件為：溶氧100%，攪拌速度350 r/min，發(fā)酵溫度30℃，發(fā)酵時(shí)間36 h，pH 7.0-7.2。

1.2.3.2 菌劑加工工藝 將方法1.2.3.1中的菌液離心（8 000 r/min），用玉米淀粉吸干，測(cè)定活芽孢含量，根據(jù)測(cè)定結(jié)果用白炭黑和高嶺土（1：1，質(zhì)量比）調(diào)節(jié)活芽孢含量，調(diào)節(jié)至多黏類芽孢桿菌芽孢含量為1.OXlOCFU/g。將上述調(diào)節(jié)好的粉劑攪拌均勻，然后經(jīng)氣流粉碎機(jī)粉碎，獲得成品可濕性粉劑（WP）含量為l.Oxl0 CFU/g。

1.2.4 JX-13 WP對(duì)草莓枯萎病菌抑菌活性的測(cè)定

分別稱取1g JX-13 WP（1.OXlOCFU/g，自配）和枯草芽孢桿菌WP（l.Oxl010 CFU/g，武漢科諾生物科技股份有限公司產(chǎn)品）菌粉，用無(wú)菌水稀釋1 000倍，配制成1 000 μg/ml母液（l.Oxl0 CFU/ml）備用。各藥劑單劑在含藥PDA中的質(zhì)量濃度設(shè)計(jì)為400.000μg/ml、200.000μg/ml、100.000 μg/ml，50.000μg/ml、25.000 μg/ml、12.500μg/ml、6.250μg/ml和3.125 μg/ml。藥劑母液和所有試驗(yàn)藥劑系列質(zhì)量濃度的藥液均為現(xiàn)配現(xiàn)用。

采用菌絲生長(zhǎng)速率法進(jìn)行毒力測(cè)定，將草莓枯萎病菌轉(zhuǎn)接到PDA平皿中，在25℃下活化96 h，然后在近菌落邊緣用打孔器制取直徑為5 mm的菌餅，并轉(zhuǎn)接到含藥PDA系列平皿中，設(shè)空白對(duì)照，各處理重復(fù)4次。25℃培養(yǎng)120 h，待對(duì)照中菌落長(zhǎng)至約平皿直徑的4/5時(shí)，采用十字交叉法量取菌落直徑。

計(jì)算菌落直徑均值，并按照下列公式計(jì)算菌絲生長(zhǎng)平均抑制率：菌絲生長(zhǎng)平均抑制率=[（對(duì)照菌落直徑均值一處理菌落直徑均值）/（對(duì)照菌落直徑均值一接種菌餅直徑）] xl00%。采用DPS 13.0專業(yè)版數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，計(jì)算藥劑對(duì)草莓枯萎病菌菌絲生長(zhǎng)抑制的回歸方程、抑制中質(zhì)量濃度（ EC50）及其95%置信區(qū)間。

1.2.5 JX-13 WP草莓繁苗田灌根處理的促生作用和預(yù)防效果試驗(yàn)在句容市華陽(yáng)鎮(zhèn)一農(nóng)戶草莓繁苗田進(jìn)行，品種為紅頰，上茬為水稻田，4月13日母株苗定植，1 hm21.8x104株，除試驗(yàn)藥劑處理不同外，其他管理措施均一致。

試驗(yàn)設(shè)3個(gè)處理，處理1采用l.Oxl0CFU/gJX-13 WP 500倍液（江蘇丘陵地區(qū)鎮(zhèn)江農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所植保研究室配制），處理2采用l.Oxl0CFU/g枯草芽孢桿菌WP 500倍液（武漢科諾生物科技股份有限公司產(chǎn)品），處理3采用每1g含有I.OX10個(gè)孢子的寡雄腐霉WP 2 500倍液（捷克生物制劑有限公司產(chǎn)品），另設(shè)清水對(duì)照。每個(gè)處理20株，3次重復(fù)，每株灌根200 ml，于定植當(dāng)天和第15 d灌根處理2次，第2次用藥后50 d調(diào)查草莓植株性狀、匍匐莖數(shù)以及對(duì)枯萎病的預(yù)防效果。

1.2.6 JX-13 WP藥劑灌根處理對(duì)草莓定植田的防病效果和促生作用 試驗(yàn)設(shè)在句容市石獅鎮(zhèn)鄔平章草莓3號(hào)棚，此棚連作6年以上，棚內(nèi)枯萎病發(fā)病較重。草莓品種為紅頰，除試驗(yàn)藥劑不同外，其他管理措施均一致。

試驗(yàn)設(shè)3個(gè)處理，處理1采用1.0XlOCFU/g JX-13 WP 500倍液，處理2采用l.Oxl010 CFU/g枯草芽孢桿菌WP 500倍液，處理3采用每lg含l.Ox106個(gè)孢子的寡雄腐霉WP 2 500倍液，另設(shè)清水對(duì)照。每個(gè)處理20株，3次重復(fù)，2014年9月16日移栽，9月17日灌根，每株200 ml，隔7d再灌1次，共計(jì)2次。第2次用藥后50 d和80 d調(diào)查各處理對(duì)草莓植株土傳病害枯萎病的防治效果，第2次用藥后50 d調(diào)查各處理草莓植株性狀。

2 結(jié)果與分析

2.1 JX-13菌株的鑒定

2.1.1 形態(tài)特征及生理生化特性 PDA上的菌落呈灰白色，半球狀隆起，黏稠狀，表面濕潤(rùn)且光滑，邊緣整齊，革蘭氏染色陽(yáng)性，菌體為桿狀，有圓形芽孢，菌體大小為[（ 2.2-9.4）μmX（ 0.8-2.4） νm]（圖1、圖2）。菌株的生理生化特性如表1顯示。根據(jù)以上的形態(tài)特征及生理生化特性，初步鑒定菌株JX-13為芽孢桿菌。

2.1.2 /6S rRNA和gyrB基因堿基序列分析菌株JX-13經(jīng)PCR擴(kuò)增的16S rRNA基因片段序列長(zhǎng)度為655 bp（GenBank登錄號(hào)MH603871.1）。將測(cè)序結(jié)果提交至NCBI進(jìn)行序列相似性比對(duì)，采用鄰近歸并法構(gòu)建菌株JX-13系統(tǒng)進(jìn)化樹。結(jié)果（圖3）顯示，JX-13菌株與多黏類芽孢桿菌Paenibacillus poly-myxa strain IIF5SW-B3（GenBank登錄號(hào)KY218873.1）處在同一個(gè)分支，且相似性高達(dá)99%。

菌株JX-13經(jīng)PCR擴(kuò)增的gyrB基因堿基序列長(zhǎng)度為1 062 bp（GenBank登錄號(hào)CP009909.1）。將測(cè)序結(jié)果提交至NCBI進(jìn)行序列相似性比對(duì)，構(gòu)建JX-13菌株gyrB基因堿基序列系統(tǒng)進(jìn)化樹，結(jié)果（圖4）顯示，JX-13菌株與多黏類芽孢桿菌Paenibacilluspolymyxa SQR-21（GenBank登錄號(hào)CP006872.1）和Paenibacillus polymyxa strain CF05（GenBank登錄號(hào)CP009909.1）處在同一個(gè)分支，且相似性均高達(dá)99%。結(jié)合JX-13菌株的菌體形態(tài)、生理生化特性、16S rRNA和gyrB基因的鑒定結(jié)果，將JX-13菌株鑒定為多黏類芽孢桿菌。

2.2 JX-13 WP對(duì)草莓枯萎病菌的抑菌活性

室內(nèi)生物活性測(cè)定結(jié)果（表2）表明，l.Ox 1010CFU/g JX-13 WP和l.Oxl010 CFU/g枯草芽孢桿菌WP對(duì)草莓枯萎病菌菌絲生長(zhǎng)的ECso分別為19. 977μg/ml和41. 409μg/ml，EC90分別為228. 981μg/ml和355. 461 μg/ml。l.Oxl0 CFU/g JX-13 WP對(duì)草莓枯萎病菌的毒力高于l.Oxl010 CFU/g枯草芽孢桿菌WP，可見JX-13抑菌活性高于枯草芽孢桿菌。

2.3 JX-13 WP對(duì)草莓繁苗田植株的促生作用和防病效果

草莓繁苗田2次灌根處理，藥后50 d調(diào)查結(jié)果（表3）表明，參試藥劑對(duì)草莓植株生長(zhǎng)均有促進(jìn)作用，株高增加，匍匐莖數(shù)增加，長(zhǎng)勢(shì)較好，其中JX-13 WP 500倍液處理的效果最好，其次為寡雄腐霉WP 2 500倍液處理，枯草芽孢桿菌WP 500倍液處理也有一定促生作用，3種微生物菌劑對(duì)枯萎病的預(yù)防效果均在90%以上。

2.4 JX-13 WP對(duì)草莓定植田枯萎病的田間防治效果和促生作用

JX-13 WP 500倍液定植后灌根處理，藥后50d、80 d分別進(jìn)行田間調(diào)查，對(duì)照組發(fā)病率為7.19%和18. 13%，不同藥劑處理均有較好防治效果，其中JX-13 WP 500倍液處理的2次調(diào)查結(jié)果分別為100. 00%和68. 94%，均顯著高于其他處理（表4）。

藥后50 d調(diào)查各處理區(qū)草莓的生長(zhǎng)情況，結(jié)果（表5）表明，與對(duì)照相比，JX-13 WP 500倍液、枯草芽孢桿菌WP 500倍液、寡雄腐霉WP 2 500倍液均有促進(jìn)生長(zhǎng)的作用，表現(xiàn)為株高增加，最大葉增大，其中，JX-13 WP 500倍液處理促進(jìn)生長(zhǎng)的效果與寡雄腐霉WP 2 500倍液處理相當(dāng)，均較高，明顯高于枯草芽孢桿菌WP 500倍液處理。

3 討論

同源性很高的一些細(xì)菌種群很難通過(guò)形態(tài)特性和生理生化特性進(jìn)行鑒定，近年來(lái)發(fā)現(xiàn)以編碼蛋白質(zhì)的基因gyrA和gyrB作為系統(tǒng)發(fā)育鑒定標(biāo)記，可以彌補(bǔ)16S rRNA序列的不足[25-26]。有研究發(fā)現(xiàn)，從健康番茄植株的根際土中篩選出拮抗菌株WXC-DD105，經(jīng)形態(tài)特性、16S DNA和gyrB鑒定為枯草芽孢桿菌[27]。本研究采用的生防菌株JX-13，分離自江蘇句容地區(qū)石楠的根部，經(jīng)形態(tài)特征、生理生化特性、16S rRNA和gyrB基因鑒定為多黏類芽孢桿菌Paenibacillus polymyxa。許彥等[28]測(cè)定了殺菌劑對(duì)西瓜枯萎病菌的室內(nèi)毒力，結(jié)果表明，多黏類芽孢桿菌和低毒化學(xué)藥劑甲基托布津的抑制效果最好且相當(dāng)。Rybakova等[29]研究發(fā)現(xiàn)，多黏類芽孢桿菌Sb3-l可以抑制長(zhǎng)孢輪枝菌生長(zhǎng)，能夠促進(jìn)被黃萎病菌侵染的油菜幼苗生長(zhǎng)。本研究將菌株JX-13配制加工成l.Oxl0 CFU/g JX-13 WP，該菌劑對(duì)草莓枯萎病菌的毒力高于l.Oxl0CFU/g枯草芽孢桿菌WP。

隨著化學(xué)藥物防治局限性的顯現(xiàn)，引入有益微生物對(duì)連作障礙進(jìn)行修復(fù)已逐步成為生物防治領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)[30]。生物防治的防治時(shí)間較長(zhǎng)，不會(huì)造成環(huán)境污染，安全性較高，且不易產(chǎn)生抗性[31]。多黏類芽孢桿菌是一種能防治多種病原真菌病害的生物防治細(xì)菌，其生物防治機(jī)制多樣，既能通過(guò)分泌抗菌多肽、蛋白質(zhì)等起作用，又可以通過(guò)菌體與病原菌在生態(tài)位進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)和空間位點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)起作用，也可以通過(guò)與植物相互作用引起植物體內(nèi)的生理生化變化，從而使植物對(duì)病原菌產(chǎn)生抗性等起作用[32]。多黏類芽孢桿菌可以產(chǎn)生多種生物活性物質(zhì)，如植物激素、抗菌物質(zhì)、絮凝劑抗生素等[33]。有研究發(fā)現(xiàn)，多黏類芽孢桿菌A26通過(guò)Sfp-型磷酸泛酰巰基乙胺基轉(zhuǎn)移酶形成的脂肽類抗生素以及形成生物膜的能力是其對(duì)鐮刀菌產(chǎn)生拮抗作用的關(guān)鍵[34]。從商用多黏類芽孢桿菌HY96-2中分離到一種抗真菌活性組分，即環(huán)狀縮酚酞類化合物6B，經(jīng)鑒定為鐮刀菌素A，對(duì)包括尖孢鐮刀菌的15株植物病原真菌和1株革蘭氏陽(yáng)性植物病原細(xì)菌均具有較強(qiáng)的抑制作用[35]。多黏類芽孢桿菌CF05拮抗尖孢鐮刀菌，能有效防治番茄枯萎病，并促進(jìn)番茄生長(zhǎng)，這可能是因?yàn)镃F05產(chǎn)生生長(zhǎng)素（吲哚-3-乙酸）從而刺激作物生長(zhǎng)，并誘導(dǎo)植物產(chǎn)生防御酶，積累H202、苯酚等防御物質(zhì)，增強(qiáng)作物防御能力[36]。馬夙靜[37]發(fā)現(xiàn)，多黏類芽孢桿菌ZYPP18對(duì)小麥有促生作用，這可能是因?yàn)樗梢援a(chǎn)生植物激素吲哚乙酸。從醋糟基質(zhì)中分離到的多黏類芽孢桿菌NSY50能夠拮抗黃瓜根際鐮刀菌的生長(zhǎng)，使枯萎病發(fā)病率降低至對(duì)照的56.4%，這是通過(guò)改變土壤理化性質(zhì)并調(diào)節(jié)根際微生物群落，誘導(dǎo)黃瓜對(duì)鐮刀菌進(jìn)行防御實(shí)現(xiàn)的[38-39]。本研究中，多黏類芽孢桿菌JX-13防治草莓枯萎病的效果與多黏類芽孢桿菌NSY50防治黃瓜枯萎病的效果類似。陳雪麗等40]研究發(fā)現(xiàn)，多黏類芽孢桿菌BRF-I生防細(xì)菌菌液及其無(wú)菌代謝物對(duì)番茄和黃瓜枯萎病不僅有較好的防治效果，而且具有明顯的促生作用。通過(guò)分根水培和液相色譜一質(zhì)譜（ LC-MS）分析西瓜接種促生抗病多黏菌SQR-21后根系蛋白質(zhì)的差異，發(fā)現(xiàn)SQR-21能夠促進(jìn)植物生長(zhǎng)是因?yàn)樗軌蛘T導(dǎo)西瓜中參與生長(zhǎng)、光合作用等代謝生理活動(dòng)的多種蛋白質(zhì)表達(dá)[41]。多黏類芽孢桿菌用于防治植物土傳病害的例子很多，一些芽孢桿菌不僅有防病作用，而且有明顯的促生作用[42-44]。本研究對(duì)草莓繁苗田進(jìn)行2次灌根處理，藥后50 d的調(diào)查結(jié)果表明，參試藥劑對(duì)草莓植株生長(zhǎng)均有促進(jìn)作用，其中多黏類芽孢桿菌JX-13可濕性粉劑500倍液處理的效果最好，其次為寡雄腐霉可濕性粉劑2 500倍液處理，枯草芽孢桿菌可濕性粉劑500倍液也有一定促生作用。植物根際中不僅存在大量對(duì)植物病原菌具有抑制作用的拮抗細(xì)菌，還有許多促進(jìn)植物生長(zhǎng)的根際促生細(xì)菌（ PGPR） [45-46]。本試驗(yàn)選用自主篩選出的JX-13菌株及其菌液加工的制劑，能有效抑制草莓枯萎病菌，在田間試驗(yàn)中也表現(xiàn)出較好的促生防病作用，值得進(jìn)一步研究并加快開發(fā)，其防治病害和促生的機(jī)理有待深入研究。

參考文獻(xiàn)：

[l]吉沐祥，楊勇，彭燕瓊，等，江蘇草莓生產(chǎn)現(xiàn)狀與消費(fèi)需求調(diào)查分析及其發(fā)展建議[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，45（ 16）：336-340.

[2] 周游，李海梅，趙金山，等，乳酸菌對(duì)草莓生長(zhǎng)和品質(zhì)性狀的影響[J].江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2017，33（5）：1124-1128.

[3] 閔紅，陳磊，呼世斌，等，大棚果蔬連作土壤肥力限制性因子研究[J].西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2010，38（8）：160-166.

[4]吉沐祥，陳宏州，莊義慶，等，設(shè)施草莓土傳病害無(wú)害化綜合防治技術(shù)[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2015.43（2）：126-127.

[5]劉奇志，李星月，劉艷斌，等，國(guó)內(nèi)外草莓連作障礙與綜合治理研究進(jìn)展[J].中國(guó)果樹，2012 （6）：58-62.

[6]劉喜更.草莓重茬土壤病害防治技術(shù)研究取得新突破[J].北京農(nóng)業(yè)，1998（8）：33.

[7] 申光輝.草莓連作根腐病發(fā)生機(jī)制與微生物及化學(xué)修復(fù)研究[D].楊凌：西北農(nóng)林科技大學(xué)，2012.

[8]顧春波，姜莉莉，王開運(yùn)，等，抗戊唑醇草莓枯萎病菌ZY-W的誘導(dǎo)及其生物學(xué)特性[J].中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，43（ 14）：2897-2904.

[9]伊海靜，陳艷，劉正坪，等，草莓枯萎病菌的分離鑒定及防治藥劑篩選[J].西北農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2016，25（4）：626-635.

[10]楊煥青，王開運(yùn)，范昆，等，草莓枯萎病的生物學(xué)特性及7種殺菌劑及其抑制作用[J].植物保護(hù)學(xué)報(bào)，2008，35（2）： 169-174.

[11]顧春波，史曉斌，姜莉莉，等，草莓枯萎病菌對(duì)多菌靈的抗性及其抗性菌株生物學(xué)特性[J].植物保護(hù)學(xué)報(bào)，2010，37（3）： 266-272.

[12]LIU S，CHE Z，CHEN G. Multiple-fungicide resistance to carben-dazim， diethofencarb， procymidone， and pyrimethanil in field iso-lates of BotrYtis cinerea from tomato in Henan province， China[J].Crop Protection， 2016， 84： 56-61.

[13]段海明，余利，黃偉東，等，不同溫度下6種化學(xué)殺菌劑對(duì)玉米莖腐病菌的抑制活性及與生防菌發(fā)酵上清液的混配[J].江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2018，34（1）：41-49.

[14]高旭利，李永騰，劉文寶，等，利用生防細(xì)菌防治黃瓜根結(jié)線蟲病研究[J].山東農(nóng)業(yè)科學(xué)，2018，50（8）：116-119.

[15] LUO Y， CHENC Y. YI J， et al- Complete genome sequence of in-dustrial biocontrol strain Paenibacillus polymyxa HY96-2 andfurther analvsis of its biocontrol mechanism[J].Frontiers in Micro-biology， 2018，9：1-14.

[16] WESELOWSKI B. NATHOO N. EASTMAN A W， et al.Isolation. identification and characterization of Paenibacillus poly-myxa CRI with potentials for biopesticide， biofertilization，biomass degradation and biofuel production [J]. BMCMicrobiology. 2016， 16（1）：244.

[17]余小蘭，鄒立飛，鄒雨坤，等.甜瓜枯萎病拮抗菌的篩選及鑒定[J].南方農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2018 .49（6）：1118-1124.

[18]王 波，周澗楠，黃忠勤，等.一株多牯類芽孢桿菌Paenibacillus polymyxa對(duì)甘薯黑斑病的生物防治效果及作用機(jī)理初探[J].江西農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2017，29（10）：40-43.

[19]曹遠(yuǎn)銀，王婉琳，申璐嵐，等.小麥白粉病生防菌擬諾卡氏菌屬TMG-8菌株的篩選研究[J].江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2017，45（1）： 95-99.

[20]周京龍.一株棉花內(nèi)生蠟狀芽孢桿菌對(duì)棉花黃、枯萎病的防治作用及機(jī)理[D].荊州：長(zhǎng)江大學(xué)，2017.

[21]吳祥，姚克兵，吉沐祥，等.句容地區(qū)草莓枯萎病病原菌的分離鑒定及田間防治[J].江蘇農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2015. 31（4）： 764-770.

[22]杜秉海.微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)[M].北京：北京農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社.1994.

[23]東秀珠，蔡妙英，常見細(xì)菌系統(tǒng)鑒定手冊(cè)[M].北京：科學(xué)m版社，2001.

[24] AUSUBEL F M. BRENT R， KINGSTON R E， et al-Short proto-cols in molecular biology[M]. 3rd ed. Chichester： JohnWiley&Sons， 1995.

[25] LA DUCM T，SATOMI M， AGATA N. et al-gyrB as a phyloge-netic discriminator for members of the Bacillus anthracis-cereus-thuringiensis group[J].Journal of Microbiological Methods， 2004，56（3）：383-394.

[26]KUPFER M， KUHNERT P，KORCZAK B M. et aI-Cenetic rela-tionships of Aeromorzas strains inferred from /65 rRNA，gyrB andrpoB gene sequences-J].International Journal of Systematic andEvolutionary Microbiology. 2006， 56（ 12）： 2743-2751.

[27]WANC H. SHI Y， WANG D. et al-A biocontrol strain of Bacillussubtilis WXCDD105 used to control tomato Botrytis cinerea andCladosporiumfulvum Cooke and promote the growth of seedlings[J]. International Joumal of Molecular Sciences. 2018. 19（5）：1371.

[28]許彥，羅豐，楊禮哲，等.幾種殺菌劑對(duì)西瓜枯萎病的室內(nèi)毒力測(cè)定[J].熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010， 30（ 10）：18-19， 26.

[29] RYBAKOVA D. RACK-WETZLINGER U. CERNAVA T，et aI.Aerial warfare：a volatile dialogue between the plant pathogen Ver-ticillium longisporum and its antagonist Paenibacillus polymyxa[J]Frontiers in Plant Science， 2017，8：1294.

[30]鄭雪芳，劉波，朱育菁，等，設(shè)施番茄連作障礙土壤修復(fù)及其對(duì)青枯病害的防治效果[J].中國(guó)生物防治學(xué)報(bào)，2018， 34（1）：117-123.

[31]喬俊卿，陳志誼，梁雪杰，等.枯草芽孢桿菌Bs916防治番茄青枯病[J].中國(guó)生物防治學(xué)報(bào)，2016， 32（2）：229-234.

[32]王劉慶，王秋影，廖美德，多粘類芽孢桿菌生物特性及其機(jī)理研究進(jìn)展[J]。中國(guó)農(nóng)學(xué)通報(bào)，2013，29（11）：158-163.

[33] DUKSTERHUIS J， SANDERS M. CORRIS L G M. et al.Antibi-osis plays a role in the context of direct interaction during antago-nism of Paenibacillus polymyxa towards Fusarium oxysporum[J].Joumal of Applied Microbiology. 1999， 86（1）：13-21.

[34]ABD EL DAIM I A. HACGBLOM P，KARLSSON M. et al. Paeni-bacillus polyrnyxa A26 Sfp-type PPTase inactivation limits bacterialantagonism against Fusarium grarrunearum but not of F culmorumin kernel assay[J].Frontiers in Plant Science. 2015，6：368.

[35]范磊，張道敬，劉振華，等.多粘類芽孢桿菌HY96-2產(chǎn)脂肽類抗真菌物質(zhì)的研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2012（ 24）： 729-735.

[36] MEI L，LIANC Y， ZHANC L，et al.Induced svstemic resistanceand growth promotion in tomato bv an indole-3-acetic acid- producing strain of Paenibacillus polymyxa[J].Annals of AppliedBiology. 2014， 165（2）：270-279.

[37]馬夙靜.多粘類芽孢桿菌ZYPP18的分離鑒定與促生防病效果鑒定[D].濟(jì)南：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，2018.

[38] SHI L，DU N. SHU S，et al.Paenibacillus polymyxa NSY50 sup-presses Fusarium wilt in cucumbers by regulating the thizosphericmicrobial community[J].Scientific Reporrs， 2017，7：41234.

[39] DU N， SHI L，YUAN Y， et al-Isolation of a potential biocontrolagent Paenibacillus polymyxa NSY50 from vinegar waste compostand its induction of host defense responses against Fusarium wilt ofcucumber[J].Microbiological Research， 2017， 202， 1-10.

[40]陳雪麗，王光華，金劍，等.多粘類芽孢桿菌BRF-I和枯草芽孢桿菌BRF-2對(duì)黃瓜和番茄枯萎病的防治效果[J].中國(guó)生態(tài)農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào)，2008， 16（2）：446-450.

[41] YAO Y E，YUAN J， YANG F，et al-PC.PR strain Paenibacilluspolymyxa SQR-21 potentially benefits watermelon growth by re-sha-ping root protein expression[J].AMB Express， 2017，7：104.

[42]朱金英.微生物菌劑在設(shè)施黃瓜和番茄上的應(yīng)用效果研究[D].濟(jì)南：山東農(nóng)業(yè)大學(xué)，2014.

[43]PADDA K P，PURI A. CHANWAY C P.Effect of GFP tagging ofPaenibacillus polymyxa P2b-2R on its ability to promote growth ofcanola and tomato seedlings[J].Biology and Ferlility of Soils，2016， 52（3）：377-387.

[44]LI J，LIU W，LUO L，et al-Expression of Paenibacillus polymyxaβ-l. 3-1， 4-glucanase in Streptomyces lydicus AOI improves itsbiocontrol effect against Botrytis cinerea[J].Biological Control，2015. 90：141-147.

[45]劉丹丹，李敏，劉潤(rùn)進(jìn)，我國(guó)植物根圍促生細(xì)菌研究進(jìn)展[J].生態(tài)學(xué)雜志，2016. 35（3）：815-824.

[46] ABBASI M K. SHARIF S，KAZMI M， et aI.Isolation of plantgrowth promoting thizobacteria from wheat thizosphere and theireffect on improving growth， yield and nutrient uptake of plants[J].Plant Biosvstems， 2011， 145（1）：159-168.

（責(zé)任編輯：王妮）