周 津　羅格蓮　王代芳　何文勝

摘 要：維生素是機(jī)體維持正常生活必需的一類營養(yǎng)素，攝入不足或過量均可導(dǎo)致機(jī)體運(yùn)動(dòng)功能障礙，分析和評價(jià)食品中的維生素含量將對指導(dǎo)人群科學(xué)攝入維生素具有重要參考價(jià)值。高效液相色譜法（HPLC）是目前測定維生素最普遍的方法，具有應(yīng)用范圍廣、靈敏度高、樣品前處理簡單、同時(shí)分析多種維生素的優(yōu)點(diǎn)。本文對近年來國內(nèi)食品中水溶性維生素的HPLC檢測技術(shù)進(jìn)行了綜述，以期為相關(guān)工作提供參考。

關(guān)鍵詞：水溶性維生素;檢測技術(shù);食品

中圖分類號(hào)：O657.72 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1003-5168（2019）35-0134-03

Review of HPLC Detection of Water-soluble Vitamins in Food

ZHOU Jin LUO Gelian WANG Daifang HE Wensheng

（Fujian Vocational College of Bio-engineering，F(xiàn)uzhou Fujian 350002）

Abstract： Vitamin is the body to maintain a normal life necessary for a class of nutrients， inadequate intake or excessive can lead to body movement dysfunction， analysis and evaluation of vitamin content in food will guide the scientific intake of vitamins have an important reference value. High performance liquid chromatography （HPLC） is the most commonly used method for the determination of vitamins， which has the advantages of wide application range， high sensitivity， simple sample preparation and simple analysis of multiple vitamins. This paper reviewed the HPLC detection technology of water-soluble vitamins in domestic food in recent years， with a view to providing reference for related work.

Keywords： water-soluble vitamin;detection technology;food

維生素是維持身體健康所必需的一類有機(jī)物，在物質(zhì)代謝中起重要作用。由于人體不能合成維生素或合成量很少，人們只能從食品中攝取維生素。作為營養(yǎng)強(qiáng)化劑的一種[1]，它常被添加到各類食品中以增加營養(yǎng)價(jià)值。維生素?cái)z入不足會(huì)導(dǎo)致人體代謝紊亂，以致發(fā)生維生素缺乏癥;攝入過量會(huì)導(dǎo)致機(jī)體運(yùn)動(dòng)功能障礙。因此，分析和評價(jià)食品中的維生素含量將對指導(dǎo)人群科學(xué)攝入維生素具有重要參考價(jià)值。

維生素的種類很多，化學(xué)結(jié)構(gòu)各異，通常，其根據(jù)溶解性可以分為脂溶性（A、D、K、E等）和水溶性（B族維生素和Vc）兩大類。依據(jù)目前我國國家標(biāo)準(zhǔn)，維生素分析方法有微生物法、熒光分光光度法和高效液相色譜法[2-11]，如表1所示。方法較單一，一種方法只能檢測一種或幾種維生素，而當(dāng)前復(fù)合維生素強(qiáng)化食品眾多，對其逐一檢測較為煩瑣，所以急需開發(fā)出一種準(zhǔn)確可靠的可以同時(shí)測定多種維生素的方法。接下來，本文將對HPLC法檢測水溶性維生素的方法進(jìn)行概述，以供研究參考。

表1 水溶性維生素在食品中的使用量和國標(biāo)中的檢測方法

高效液相色譜法 B5 泛酸、泛酸鈣 1.1～80mg/kg 微生物法、高效液相色譜法 B6 吡哆胺、吡哆醛、吡哆醇 0.4～25mg/kg 高效液相色譜法;微生物法 B7 生物素 38～76μg/kg 微生物法 B9 葉酸 50～8 200μg/kg 微生物法 B12 鈷胺素 0.6～70μg/kg 高效液相色譜法 Vc 抗壞血酸 50～13 000mg/kg 熒光分光光度法 ]

1 維生素HPLC檢測技術(shù)

HPLC法是目前測定維生素最普遍的方法，具有應(yīng)用范圍廣、靈敏度高、檢測成本低及分析效率高的特點(diǎn)。需要指出的是，水溶性維生素的同時(shí)檢出方法受到提取方法、色譜條件和檢測等因素影響較大，如下所述。

1.1 提取方法

提取方法能夠影響HPLC法檢測的靈敏度和準(zhǔn)確度。由于水溶性維生素極性較大，所以可以采用水或者其他極性較大的試劑同時(shí)提取多種水溶性維生素。超聲處理屬于物理前處理方法，在高頻聲波作用下，在液體中可強(qiáng)化傳質(zhì)、空氣以及發(fā)熱等多種效應(yīng)，不僅有助于樣品分散，更有助于樣品中的水溶性維生素進(jìn)入提取液。目前，超聲處理的方法已經(jīng)廣泛應(yīng)用于藥物檢測，并列入《中國藥典》中作為VC、VB1以及VB2的前處理方法[12]。

此外，由于維生素在強(qiáng)光的照射下會(huì)分解，提取時(shí)應(yīng)盡可能避光。將儲(chǔ)備液放置于冰箱中，有助于防止其降解。

1.2 色譜條件

目前報(bào)道的水溶性維生素液相色譜分析方法有3種：化學(xué)鍵合相色譜、離子交換色譜和親水作用色譜。其中，化學(xué)鍵合相色譜是較為常見的方法，多采用C18鍵合固定相色譜分析。這類方法常選擇有機(jī)試劑（如甲醇、乙腈等）和緩沖劑（如乙酸、磷酸二氫鉀等）為流動(dòng)相，梯度洗脫，其重復(fù)性好。而離子交換色譜分析水溶性維生素的關(guān)鍵在于調(diào)節(jié)流動(dòng)相pH，存在一定難度，該方法并不普及。

1.3 檢測器

根據(jù)水溶性維生素的結(jié)構(gòu)特征，目前，液相色譜采用的檢測器主要包括紫外檢測器、二極管陣列檢測器、熒光檢測器和質(zhì)譜檢測器。由于多種水溶性維生素具有生色團(tuán)，因此紫外檢測器適宜處理大部分水溶性維生素。紫外檢測器分析成本低，操作簡單，是目前應(yīng)用最廣泛的檢測器。采用二極管陣列檢測器，還可獲得色譜峰的紫外-可見光譜，因此可通過色譜峰保留時(shí)間和光譜圖實(shí)現(xiàn)雙參數(shù)定性，使結(jié)果更可靠，避免假陽性。

2 HPLC同時(shí)檢測多種水溶性維生素

隨著國家對食品尤其是特殊膳食中營養(yǎng)成分的監(jiān)管不斷加強(qiáng)，數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確性要求不斷提高，監(jiān)測范圍及樣本量擴(kuò)大，建立一套準(zhǔn)確可靠的多種維生素同時(shí)分析的方法，是維生素分析領(lǐng)域的研究重點(diǎn)，高通量、多組分同時(shí)測定是維生素分析領(lǐng)域的發(fā)展趨勢。近年來，科研人員使用HPLC法進(jìn)行了一些研究[13-20]，如表2所示。

3 結(jié)論

相較于傳統(tǒng)的微生物法、分光光度法，HPLC法在檢測單一或多種水溶性維生素時(shí)更加快捷、靈敏、準(zhǔn)確，國內(nèi)外食品藥品檢測標(biāo)準(zhǔn)都傾向于選擇HPLC法。除了涉及單一水溶性維生素的檢出，近年來聯(lián)用檢測方法也不斷涌現(xiàn)，建立準(zhǔn)確、快速的水溶性維生素聯(lián)用檢測技術(shù)，加快制定多種維生素同時(shí)檢測的國家標(biāo)準(zhǔn)，不僅有助于評價(jià)相關(guān)食品保健品的營養(yǎng)指標(biāo)，也與日益發(fā)展的食品藥品加工技術(shù)相配套，為科學(xué)、合理地使用維生素制品提供參考。

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