周燕麗 余永華 馬佳麗 顧超群 謝明華

中圖分類號 R927.2；O657.72 文獻(xiàn)標(biāo)志碼 A 文章編號 1001-0408（2019）05-0627-05

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2019.05.10

摘 要 目的：建立測定鹽酸特拉唑嗪片中有關(guān)物質(zhì)含量的方法。方法：采用高效液相色譜加校正因子的主成分自身對照法。色譜柱為Agilent Zorbax Eclipse XDB C18，流動相為乙腈-高氯酸溶液（20 ∶ 80，V/V），流速為1.0 mL/min，檢測波長為246 nm，進(jìn)樣量為20 μL，柱溫為50 ℃；繪制鹽酸特拉唑嗪和雜質(zhì)A、B、C的線性方程，以斜率計(jì)算各雜質(zhì)相對于鹽酸特拉唑嗪的校正因子，用相對保留時間確定各雜質(zhì)位置，測定3批鹽酸特拉唑嗪片中雜質(zhì)A、B、C的含量，并與雜質(zhì)對照品法測得的結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果：鹽酸特拉唑嗪雜質(zhì)A、B、C的相對保留時間分別為0.39、0.74、2.77，檢測質(zhì)量濃度線性范圍均為0.25～3.0 μg/mL，校正因子分別為0.75、1.09、0.84，檢測限分別為0.35、0.51、0.43 ng，定量限分別為0.70、1.02、0.86 ng。3批鹽酸特拉唑嗪片中雜質(zhì)A、B、C的含量分別為0.11%～0.13%、0.03%、0.09%～0.12%，雜質(zhì)B未檢出；與雜質(zhì)對照品法測定結(jié)果一致。結(jié)論：該方法簡便快速，可準(zhǔn)確測定鹽酸特拉唑嗪片中有關(guān)物質(zhì)的含量。

關(guān)鍵詞 鹽酸特拉唑嗪片；有關(guān)物質(zhì)；高效液相色譜法；校正因子

Determination of Related Substance in Terazosin Hydrochloride Tablets by HPLC and Principal Component Self-control with Correction Factor

ZHOU Yanli1，YU Yonghua2，MA Jiali3，GU Chaoqun3，XIE Minghua1（1.Dept. of Pharmacy， Hangzhou Yuhang District First People’s Hospital， Hangzhou 311100， China；2.Hangzhou SINOVO Pharmaceutical Co.， Ltd.， Hangzhou 310015， China；3.College of Pharmacy， Zhejiang College of TCM， Hangzhou 310403， China）

ABSTRACT OBJECTIVE： To establish the method for the content determination of related substance in Terazosin hydrochloride tablets. METHODS： HPLC and principal component self-control with correction factor were adopted. The determination was performed on Agilent Zorbax Eclipse XDB C18 column with mobile phase consisted of acetonitrile-perchloric acid solution （20 ∶ 80， V/V） at the flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was set at 246 nm， and sample size was 20 μL. The column temperature was 50 ℃. The linear equations of terazosin hydrochloride， impurity A， B， C were drawn. The correction factors of each impurity related to terazosin hydrochloride were calculated by slope， and relative retention time was used to determine the position of impurities. The contents of impurity A， B and C in 3 batches of Terazosin hydrochloride tablets were determined and compared with the results of impurity control method. RESULTS： The relative retention time of impurity A， B， C was 0.39， 0.74， 2.77， respectively； the linear range of them were 0.25-3.0 μg/mL， respectively. The correction factors were 0.75， 1.09， 0.84， respectively. The detection limits were 0.35， 0.51， 0.43 ng， and the limits of quantification were 0.70， 1.02， 0.86 ng， respectively. The contents of impurity A， B and C in 3 batches of Terazosin hydrochloride tablets were 0.11%-0.13%， 0.03% and 0.09%-0.12%； impurity B did not detected. The results are consistent with the determination of impurity control method. CONCLUSIONS： The method is simple， rapid and accurate for the content determination of related substances A， B， C in Terazosin hydrochloride tablets.

KEYWORDS Terazosin hydrochloride tablets； Related substances； HPLC； Correction factor

特拉唑嗪是一種α-腎上腺受體拮抗藥，臨床上可用于治療輕度或中度高血壓，還適用于良性前列腺增生（BPH）和男性下尿路癥狀（LUTS）[1]。2015年版《中國藥典》（二部）中收載了鹽酸特拉唑嗪片[2]，采用高效液相色譜（HPLC）法檢測其有關(guān)物質(zhì)，但只對未知單雜和總雜質(zhì)進(jìn)行了限定，未對已知雜質(zhì)進(jìn)行控制；而在英國藥典 [3]和美國藥典[4]中，其有關(guān)物質(zhì)的檢測對已知雜質(zhì)A[化學(xué)名為1-（4-氨基-6，7-二甲氧基-2-喹唑啉基）哌嗪二鹽酸鹽]、雜質(zhì)B（化學(xué)名為2-氯-4-氨基-6，7-二甲氧基喹唑啉）、雜質(zhì)C[化學(xué)名1，4-二（4-氨基-6，7-二甲氧基-2-喹唑啉基）哌嗪二鹽酸鹽]的含量進(jìn)行了規(guī)定且在計(jì)算上更加嚴(yán)格。

有研究表明，鹽酸特拉唑嗪片可在光、酸或堿條件下水解產(chǎn)生雜質(zhì)A，在生產(chǎn)過程中可產(chǎn)生副產(chǎn)物雜質(zhì)B、C[5]。目前檢測藥品中有關(guān)物質(zhì)的方法有內(nèi)標(biāo)法、雜質(zhì)對照品法、面積歸一化法、無校正因子自身對照法、加校正因子的主成分自身對照法[6-12]，鑒于特拉唑嗪的雜質(zhì)對照品較難獲得且價格較貴，以及現(xiàn)行2015年版《中國藥典》檢測方法存在的不足，筆者參考美國藥典等鹽酸特拉唑嗪片中有關(guān)物質(zhì)的檢測方法[4，9]，采用HPLC加校正因子的主成分自身對照法測定鹽酸特拉唑嗪片中有關(guān)物質(zhì)的含量，為更準(zhǔn)確、有效地控制鹽酸特拉唑嗪片的質(zhì)量提供依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

1260高效液相色譜儀（美國Agilent公司）；XS 205DU千分之一電子分析天平、AL 204萬分之一電子分析天平、FE20 pH計(jì)均購自梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司。

1.2 藥品與試劑

鹽酸特拉唑嗪對照品（批號：100375-201103，純度：92.3%）、雜質(zhì)A對照品（批號：F0C245，純度：85%）、雜質(zhì)B對照品（批號：Y0000622，純度：100%）、雜質(zhì)C對照品（批號：G0H361，純度：92%）均購自中國食品藥品檢定研究院；鹽酸特拉唑嗪片（上海雅培制藥有限公司，批號：6001414、6028590、6011419，規(guī)格：每片2 mg）；高氯酸、三乙胺為分析純，乙腈為色譜純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱為Agilent Zorbax Eclipse XDB C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為乙腈-高氯酸溶液（20 ∶ 80，V/V）：流速為1.0 mL/min；檢測波長為246 nm；柱溫為50 ℃；進(jìn)樣量為20 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 鹽酸特拉唑嗪對照品溶液 取鹽酸特拉唑嗪對照品適量，精密稱定后，加溶劑[乙腈-水-鹽酸溶液（200 ∶ 800 ∶ 0.9，V/V/V），下同]溶解，制成質(zhì)量濃度為625 μg/mL的鹽酸特拉唑嗪對照品溶液。

2.2.2 單一雜質(zhì)對照品溶液 分別取雜質(zhì)A、B、C對照品適量，置于不同量瓶中，加入溶劑溶解，制成質(zhì)量濃度均為500 μg/mL的單一雜質(zhì)對照品溶液。

2.2.3 混合雜質(zhì)對照品溶液 分別取“2.2.2”項(xiàng)下單一雜質(zhì)對照品溶液，置于同一量瓶中，用溶劑稀釋制成每1 mL中含雜質(zhì)A、B、C各2 μg的混合雜質(zhì)對照品溶液。

2.2.4 供試品溶液 將鹽酸特拉唑嗪片研磨成細(xì)粉，稱取細(xì)粉適量（約相當(dāng)于特拉唑嗪12.5 mg），置于25 mL量瓶中，加溶劑適量溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.2.5 自身對照溶液 精密量取供試品溶液適量，用溶劑稀釋400倍后，即得。

2.2.6 空白輔料溶液 取空白輔料適量，照“2.2.4”項(xiàng)下方法制備，即得。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 分別取“2.2”項(xiàng)下各溶液（除自身對照品溶液外），按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜圖。結(jié)果，空白輔料無干擾，特拉唑嗪峰與各雜質(zhì)峰間無干擾，分離度均大于1.5，理論板數(shù)以特拉唑嗪計(jì)均大于3 000，雜質(zhì)A、B、C相對保留時間分別為0.39、0.74、2.77。系統(tǒng)適用性試驗(yàn)色譜圖見圖1。

2.3.2 專屬性試驗(yàn) 取鹽酸特拉唑嗪片（批號：6001414）細(xì)粉適量（約相當(dāng)于特拉唑嗪12.5 mg），分別置于10 mL量瓶中，共6份，一份為未破壞樣品，另5份按以下條件進(jìn)行破壞。（1）酸破壞：加0.1 mol/L鹽酸溶液1 mL，放置17 h后，加0.1 mol/L氫氧化鈉溶液1 mL中和，然后用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為酸破壞樣品。（2）堿破壞：加0.1 mol/L氫氧化鈉溶液1 mL，放置1 h后，加0.1 mol/L鹽酸1 mL中和，然后用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為堿破壞樣品。（3）高溫破壞：加入流動相適量，置于60 ℃下10 d后，放冷，再用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為高溫破壞樣品。（4）光照破壞：5 000 Lx條件下放置10 d后，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為光照破壞樣品。（5）氧化破壞：加3% H2O2溶液1 mL，放置17 h后，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為氧化破壞樣品。取上述6種樣品20 μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄色譜圖。結(jié)果，鹽酸特拉唑嗪片在酸性和堿性條件下主要降解雜質(zhì)為雜質(zhì)A；在氧化、光照和高溫條件下主要降解成雜質(zhì)A及其他未知雜質(zhì)，主成分峰與各雜質(zhì)峰之間的分離較好，表明本法專屬性良好。專屬性試驗(yàn)色譜圖見圖2。

2.3.3 線性關(guān)系與校正因子考察 精密量取 “2.2.1”項(xiàng)下溶液0.2、0.8、1.6、3.2、4.0 mL分別置5個量瓶中，另各取“2.2.2”項(xiàng)下各雜質(zhì)對照品溶液0.25、0.5、1.0、2.0、3.0 mL，分別依次置于上述量瓶中，加入流動相稀釋，即得鹽酸特拉唑嗪含量為0.25、1.0、2.0、4.0、5.0 μg/mL，雜質(zhì)A、B、C含量均分別為0.25、0.5、1、2、3 μg/mL的系列溶液。精密吸取上述溶液20 μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄各峰峰面積。以峰面積（y）對各雜質(zhì)質(zhì)量濃度（x）進(jìn)行線性回歸，并以方程斜率（K）計(jì)算校正因子=K鹽酸特拉唑嗪/K雜質(zhì)，線性關(guān)系與校正因子考察結(jié)果見表1。

2.3.4 檢測限與定量限考察 取“2.2.3”項(xiàng)下溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定。以信噪比為3 ∶ 1計(jì)算檢測限（LOD），以信噪比為10 ∶ 1計(jì)算定量限（LOQ）。結(jié)果，雜質(zhì)A、B、C的LOD分別為0.35、0.51、0.43 ng，LOQ分別為0.70、1.02、0.86 ng。

2.3.5 準(zhǔn)確度試驗(yàn) 取鹽酸特拉唑片細(xì)粉適量（約相當(dāng)于特拉唑嗪12.5 mg，其中雜質(zhì)A、B、C含量分別為0.11%、0.03%、0.11%，各雜質(zhì)限量均為0.4%），分別加入雜質(zhì)A、B、C對照品溶液適量，使雜質(zhì)A、B、C含量均分別為0.32%、0.40%、0.48%，每個濃度平行配置3份，然后流動相稀釋至刻度，搖勻。精密吸取各溶液20 μL，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件，連續(xù)進(jìn)樣3次，測定并計(jì)算各雜質(zhì)的平均回收率。結(jié)果，雜質(zhì)A、B、C的平均回收率分別為99.9%、99.6%、99.2%（RSD均<1.0%，n=9）。

2.3.6 精密度試驗(yàn) 取“2.2.3”項(xiàng)下溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，重復(fù)測定6次，計(jì)算各雜質(zhì)峰面積的RSD。結(jié)果，雜質(zhì)A、B、C峰面積的RSD分別為0.5%、1.0%、0.6%（n=6），表明儀器精密度良好。

2.3.7 濾膜吸附性試驗(yàn) 取“2.2.3”項(xiàng)下溶液分別過濾2、4、6、8 mL的續(xù)濾液，照上述色譜條件檢測，記錄峰面積，并以未過濾溶液為100%濃度計(jì)算各續(xù)濾液的回收率（即已過濾溶液濃度除以未過濾溶液濃度所得的百分比）。結(jié)果，初濾液為2、4 mL時，雜質(zhì)A、B、C均存在不同程度的濾膜吸附，當(dāng)棄去前4 mL初濾液后，各續(xù)濾液的雜質(zhì)回收率均大于98%。

2.3.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取“2.2.4”項(xiàng)下供試品溶液，分別于常溫和4 ℃條件下放置0、2、4、6、8 h后按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積。結(jié)果，在常溫下，溶液不穩(wěn)定；在4 ℃條件下，溶液雜質(zhì)A、B、C峰面積的RSD分別為1.7%、1.3%、1.1%，表明供試品溶液在4℃條件下放置8 h穩(wěn)定性良好。

2.3.9 樣品有關(guān)物質(zhì)測定 取鹽酸特拉唑嗪片3批，按 “2.2.4”項(xiàng)下方法制備，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測定，記錄峰面積，分別按加校正因子的主成分自身對照法和雜質(zhì)對照品法計(jì)算有關(guān)物質(zhì)的含量。結(jié)果，兩種方法測定結(jié)果一致。

3 討論

筆者在前期試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)當(dāng)選擇柱溫為30 ℃時，雜質(zhì)C的保留時間較長（大于70 min），且重復(fù)進(jìn)樣差異較大；增加柱溫后發(fā)現(xiàn)，可減小其保留時間，故最終選用柱溫為50 ℃，以有效分離各雜質(zhì)。2015年版《中國藥典》中并未考察所配溶液的濾膜吸附性，筆者在本研究中發(fā)現(xiàn)鹽酸特拉唑嗪雜質(zhì)存在著一定的濾膜吸附性，故參考美國藥典方法對其進(jìn)行考察。

本試驗(yàn)以鹽酸特拉唑嗪為對照，采用標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定各雜質(zhì)的校正因子，可以很好地控制計(jì)算校正因子過程中的誤差。結(jié)果表明，采用加校正因子的主成分自身對照法與雜質(zhì)對照品法所測定的結(jié)果一致，說明本法可準(zhǔn)確測定鹽酸特拉唑嗪中有關(guān)物質(zhì)的含量。

綜上所述，本研究在現(xiàn)行2015年版《中國藥典》中鹽酸特拉唑嗪片有關(guān)物質(zhì)檢測的基礎(chǔ)上，建立以HPLC加校正因子的主成分自身對照法測定鹽酸特拉唑嗪片中雜質(zhì)A、B、C含量的方法，結(jié)果表明，該方法簡便、快速，可作為鹽酸特拉唑嗪片中有關(guān)物質(zhì)的檢測方法。

參考文獻(xiàn)

[ 1 ] 祝凌飛.特拉唑嗪治療良性前列腺增生療效的Meta分析[J].中國藥房，2013，24（24）：2279-2282.

[ 2 ] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[S]. 2015版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：1065-1066.

[ 3 ] British Pharmacopoeia Commission. British Pharmacopoeia[S]. 2017 version. London：The Stationery Office，2017：1-968.

[ 4 ] The United States Pharmacopieial Convention. U.S. Pharmacopoeia[EB/OL].[2018-09-01].https：//www.drugfuture.com/standard/search.aspx.

[ 5 ] 日本藥品監(jiān)管局.鹽酸特拉唑嗪片[EB/OL].[2018-09- 01].http：//www.pmda.go.jp/PmdaSearch/iyakuSearch/.

[ 6 ] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：四部[S]. 2015版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2015：59-61.

[ 7 ] 謝沐風(fēng).如何建立高效液相色譜法測定有關(guān)物質(zhì)的方法[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2007，38（1）：45-48.

[ 8 ] 胡麗娜，張毅，顧劍，等.加校正因子的主成分自身對照法測定阿托伐他汀鈣中雜質(zhì)D的含量[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2015，32（12）：1476-1480.

[ 9 ] The international council for harmonisation of technical requirements for pharmaceuticals for human use[EB/OL].（1996-11-06）[2018-09-01].http：//www.ich.org/products/guidelines/quality/quality-single/article/validation-of- analytical-procedures-text-and-methodology.html.

[10] 張哲峰. HPLC法校正因子研究中的幾個問題[EB/OL].（2011-12-07）[2018-09-01].http：//www.cde.org.cn/dzkw. do？method=largePage&id=312552.

[11] 劉小均，羅軍波，李培海，等. RP-HPLC加校正因子的主成分自身對照法測定鹽酸多奈哌齊口腔崩解片中有關(guān)物質(zhì)的含量[J].中國藥房，2015，26（12）：1702-1706.

[12] 余永華，馬敏康，楊仲杰，等.加校正因子的主成分自身對照法測定培哚普利片中有關(guān)物質(zhì)的含量[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2017，34（10）：1427-1431.

（收稿日期：2018-09-06 修回日期：2019-01-07）

（編輯：唐曉蓮）