張世蘭

一、材料與方法

（一）材料與試劑

蔬菜和水果購于河南省鄭州市農(nóng)貿(mào)市場;乙腈、甲醇、二氯甲烷（色譜純，默克股份兩合公司）;氯化鈉（分析純，天津市科密歐化學試劑有限公司）;SupelcleanTM LC-NH2 SPE柱（美國Supelco公司）。

30種農(nóng)藥標準品質(zhì)量濃度均為1000μg/mL，多菌靈農(nóng)藥標準品質(zhì)量濃度為 500μg/mL，均購于農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護科研監(jiān)測所 （天津），取各標準品體積800μL，分別置于10 mL容量瓶中，用甲醇定容，于-18 ℃冰箱內(nèi)避光保存。

混合標準儲備溶液質(zhì)量體積濃度8μg/mL，分別移取一定量的各標準儲備溶液，用甲醇稀釋配制而成，于4 ℃冰箱內(nèi)避光保存。試驗時用空白基質(zhì)溶液配制標準溶液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

（二）儀器與設(shè)備

Agilent 1290-6495超高效液相-三重四極桿質(zhì)譜聯(lián)用儀;CLXXUVFM2超純水器;TTL-DCII氮吹儀;Silent crusher M高速分散均質(zhì)機;QL-861旋渦混合器;HC-3018R高速冷凍離心機;1%電子天平;固相萃取裝置。

（三）試驗方法

準確稱?。?0.00±0.10） g樣品于50.0 mL離心管中，向其中加入3 g氯化鈉、20.0 mL乙腈，高速勻漿2 min后，5000 r/min離心5 min，準確移取10.0 mL上層乙腈溶液，置于10.0 mL具塞玻璃離心管中，氮吹蒸發(fā)至近干，加入2.0 mL甲醇+二氯甲烷溶解殘渣，待凈化。將SPE柱用5.0 mL甲醇+二氯甲烷預淋洗，倒入上述待凈化溶液中，然后用15.0 mL刻度離心管收集洗脫液，用5.0 mL甲醇+二氯甲烷洗刻度離心管后過柱，并重復2次。氮吹蒸發(fā)至近干，用乙腈+水準確定容至5.0 mL，混勻過0.22 μm濾膜，待測。

二、結(jié)果與討論

（一）質(zhì)譜條件的優(yōu)化

對31種農(nóng)藥的混合標準溶液進行分析，通過Agilent MassHunter Optimizer 軟件進行優(yōu)化，獲得DMRM采集參數(shù)，包括1個母離子和2個碎片離子信息及其對應(yīng)的最佳碰撞能量，選擇響應(yīng)值最高的子離子作為定量離子，另一個作為定性離子。優(yōu)化后的采集參數(shù)見表1，其中“*”為定量離子。利用優(yōu)化后的采集參數(shù)對包菜基質(zhì)中31種農(nóng)藥進行分離。

（二）色譜條件的優(yōu)化

試驗采用Agilent Eclipse Plus C18色譜柱（1.8μm，3.0 mm×50 mm）對31種農(nóng)藥進行分離，考察了不同流動相對31種農(nóng)藥測定的影響。結(jié)果表明：5 mmol/L乙酸銨+0.10%甲酸水溶液，水作為流動相A，乙腈、甲醇作為流動相B，乙腈分離效果明顯優(yōu)于甲醇;乙酸銨能夠得到較好的峰形，同時加入甲酸能夠提高目標物的響應(yīng)值。試驗進一步考察了乙酸銨溶液中甲酸體積分數(shù)（0.00%、0.05%、0.10%、0.15%、0.20%、0.25%）對色譜峰的影響。試驗結(jié)果表明： 5 mmol/L乙酸銨+0.10%甲酸水溶液和乙腈為最佳流動相。

（三）基質(zhì)效應(yīng)

由于果蔬樣品基質(zhì)復雜，進行前處理時提取液中的無機物和有機物會對目標化合物的離子化程度產(chǎn)生很大影響。因此，本試驗通過比對基質(zhì)匹配標準曲線斜率和溶劑匹配標準曲線斜率來考察基質(zhì)效應(yīng)。由表2可以看出，滅蠅胺、啶蟲脒、阿維菌素基質(zhì)效應(yīng)<0.8，為基質(zhì)抑制效應(yīng);滅多威、氯吡脲基質(zhì)效應(yīng)>1.2，為基質(zhì)增強效應(yīng);其余26種農(nóng)藥的基質(zhì)效應(yīng)在0.8～1.2，基質(zhì)效應(yīng)可忽略。因此，應(yīng)采用基質(zhì)匹配標準曲線進行實際樣品的定量測定。

（四）工作曲線與檢出限

試驗選用空白包菜樣品的提取液配制標準溶液，以消除基質(zhì)效應(yīng)的影響。以各化合物的質(zhì)量濃度為橫坐標，定量離子的峰面積為縱坐標繪制工作曲線，計算其線性回歸方程和相關(guān)系數(shù)，在5～500μg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，各目標化合物的線性關(guān)系良好，線性回歸相關(guān)系數(shù)結(jié)果見表2。以3倍信噪比和10倍信噪比計算各化合物在基質(zhì)中的檢出限（3S/N）和定量限（10S/N）。如表2所示，31種農(nóng)藥的檢出限和定量限分別為0.015 4～0.237 1 μg/kg和0.051 4～0.790 4 μg/kg，其中定量限均低于我國相關(guān)規(guī)定中最高殘留限量標準。

（五）精密度和回收試驗

按試驗方法對包菜空白樣品進行加標回收試驗，添加3個水平（0.02 mg/kg、0.08 mg/kg和0.4 mg/kg），每個水平做6個平行樣品。其平均回收率和測定值的相對標準偏差（RSD）見表3。由表3可知，31種農(nóng)藥平均回收率為62%～120%，RSD為1.2%～12.6%，表明本方法準確度高、穩(wěn)定性好，能夠滿足日常檢測需求。

三、結(jié)論

本試驗采用固相萃取裝置凈化，經(jīng)氮氣吹干后用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進行測定，優(yōu)化了不同提取溶劑、混勻方式、流動相對回收率的影響。該方法靈敏度高、穩(wěn)定性好，在13 min內(nèi)能夠快速對31種農(nóng)藥進行定量，適用于果蔬中多種農(nóng)藥殘留的同時檢測分析。