雷穎 任俞新 吳利紅

摘要：以溫室盆栽的鐵皮石斛莖切段為外植體，采用交叉分組設(shè)計(jì)方法，在MS培養(yǎng)基中，添加不同濃度的植物生長調(diào)節(jié)劑2.4-D、NAA、IBA和6-BA誘導(dǎo)鐵皮石斛叢生芽并觀察對叢生芽增殖和生根的影響。結(jié)果表明，鐵皮石斛叢生芽誘導(dǎo)的最適培養(yǎng)基為MS+6-BA 2.0 mg/L+2.4-D 1.0 mg/L;最適叢生芽增殖的培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L;最適生根壯苗培養(yǎng)基為1/2 MS+IBA 1.5 mg/L，移栽基質(zhì)為珍珠巖、森林腐葉土、松針葉質(zhì)量比1∶1∶1。

關(guān)鍵詞：鐵皮石斛;組織培養(yǎng);篩選;天水地區(qū)

中圖分類號：S813.1 ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A ? ? ?文章編號：1001-1463（2019）09-0039-04

doi：10.3969/j.issn.1001-1463.2019.09.010

Abstract：The top bud of Dendrobium officinale potted in greenhouse were used as explants， the method of cross-grouping design was adopted. and cultured in MS + mashed bananas puddle. The different concentrations of plant growth regulators 2.4-D， NAA， IBA and 6-BA were added in MS medium to induce the bushy buds of Dendrobium officinalis， and the effects on the proliferation and rooting of bushy buds were observed. The results showed that the best medium for inducing cluster buds of Dendrobium officinale were MS+6-BA 2.0 mg/L+2.4-D 1.0 mg/L and MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L. The optimum medium for multiplication of cluster buds was MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L. The optimum medium for multiplication of cluster buds was MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L. The transplanting matrix was perlite， forest leaf mould and pine needle mass ratio 1∶1∶1.

Key words：Dendrobium officinale;Tissue culture;Scree;Tianshui area

鐵皮石斛（Dendrobium officinale）是重要的傳統(tǒng)中藥材和四大洋蘭之一。作為蘭科植物，由于其種子缺少胚乳，自然萌發(fā)率極低，很難用實(shí)生苗栽培。傳統(tǒng)的分株、扦插等方式的繁殖率極低，加上無節(jié)制地采挖，其野生資源已瀕臨滅絕，因此被列為國家重點(diǎn)保護(hù)的藥用植物之一。通過組織培養(yǎng)技術(shù)使其大量繁殖，是保護(hù)和利用鐵皮石斛資源的重要途徑。鐵皮石斛在我國特別是在浙江、安徽、云南等省區(qū)已形成重要產(chǎn)業(yè)。近年來鐵皮石斛人工種植迅速北上，在京津冀已有保護(hù)地種植，但在西北地區(qū)還未見大面積種植，所以，鐵皮石斛這一源自熱帶亞熱帶地區(qū)的植物如何在西北地區(qū)發(fā)展，其快速繁育技術(shù)的研發(fā)顯得優(yōu)為緊迫[1 ]。鑒于此，我們于2018年在甘肅林業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院進(jìn)行了鐵皮石斛組織培養(yǎng)試驗(yàn)，以期為鐵皮石斛的組織培養(yǎng)與快速繁殖探究最佳技術(shù)方案。

1 ? 材料與方法

1.1 ? 供試材料

供試鐵皮石斛為盆栽苗，采自甘肅林業(yè)職業(yè)技術(shù)學(xué)院花卉基地。

1.2 ? 試驗(yàn)方法

試驗(yàn)可分3個階段。

1.2.1 ? 誘導(dǎo)培養(yǎng) ? 主要探究2，4-D與6-BA對叢生芽誘導(dǎo)的影響[2 ]，以MS為基本培養(yǎng)基，設(shè)計(jì)NAA與6-BA各3個濃度水平，共9個劑量組合，具體方案見表1。每組3次重復(fù)，每個重復(fù)10瓶培養(yǎng)基，每瓶接種1個外植體。

1.2.2 ? ?增殖培養(yǎng) ? ?探究NAA與6-BA對叢生芽增殖的影響，MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，設(shè)計(jì)IBA與6-BA各3個濃度水平，共9個劑量組合，具體方案見表1。每組3次重復(fù)，每個重復(fù)10瓶培養(yǎng)基，每瓶接種10個單芽。

1.2.3 ? ?生根培養(yǎng) ? ?探究NAA與IBA對壯苗與生根的影響，以1/2 MS為基本培養(yǎng)基[3 ]，設(shè)計(jì)6個劑量組合，具體方案見表2。每組3次重復(fù)，每重復(fù)10瓶培養(yǎng)基，每瓶接種10個單芽。

1.3 ? 試驗(yàn)步驟

1.3.1 ? 材料處理與外植體滅菌 ? 選擇生長旺盛無病蟲感染的優(yōu)良盆栽母株，剪取葉色嫩綠生長均勻的莖條，除去葉片及下段老莖，在流水中沖洗干凈后，剪成2～3 cm小段放入消毒瓶中，在超凈工作臺上，倒入70%的酒精30 s后，無菌水沖洗5遍，轉(zhuǎn)入飽和漂白粉上清液中消毒15 min后，無菌水沖洗5次，取出后放在鋪有濾紙的接種盤中。

1.3.2 ? 叢生芽的誘導(dǎo) ? 在超凈工作臺上將消毒好的莖段切成1.0～1.5 cm的帶節(jié)小段，接種于從生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，培養(yǎng)基中植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的配比見表1。試驗(yàn)過程中，每7 d觀察1次，記錄生長狀況，培養(yǎng)60 d后統(tǒng)計(jì)各培養(yǎng)基中叢生芽的誘導(dǎo)數(shù)和誘導(dǎo)率。

1.3.3 ? ?叢生芽的增殖 ? ?取正常誘導(dǎo)的叢生芽，將其切成單芽接種于增殖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基中植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)的配比見表1。培養(yǎng)60 d后觀察各培養(yǎng)基中鐵皮石斛的增殖情況。

1.3.4 ? ?生根與壯苗 ? ?截取增殖階段生長旺盛的叢生芽，將其切成單芽接種于1/2 MS基本培養(yǎng)基，植物生長調(diào)節(jié)劑選用NAA、IBA。培養(yǎng)60 d后觀察各培養(yǎng)基中鐵皮石斛的生根情況。

以上各種培養(yǎng)基中均附加入3%蔗糖、6%瓊脂，適量香蕉泥[4 ]、pH調(diào)至5.5～6.0。

1.3.5 ? ?組培苗的培養(yǎng) ? ?在溫度（25±1） ℃，光照時(shí)間 12 h/d，光照強(qiáng)度為1 500～2 000 lx的培養(yǎng)條件下使試管苗正常生長[5 ]。

1.3.6 ? 組培苗的移栽 ? 控制溫室溫度在20～25 ℃，濕度80%～100%，采用珍珠巖∶森林土∶粉碎松針葉按質(zhì)量比1∶1∶1配制的移栽基質(zhì)。將生根的瓶苗不開蓋在溫室放置3 d，然后開蓋放置3 d[6 ]，取出苗后洗凈根部培養(yǎng)基， 移栽到基質(zhì)上，30 d后觀察其成活率及生長情況。

2 ? 結(jié)果與分析

2.1 ? 2， 4-D與6-BA對叢生芽誘導(dǎo)的影響

通過表3可以看出，NAA與6-BA誘導(dǎo)鐵皮石斛叢生芽分化的最適配比為MS+6-BA 2.0 mg/L+2，4-D 1.0 mg/L，此時(shí)鐵皮石斛分化率最高，為88.31%，平均芽數(shù)最多，為18.01個。

2.2 ? NAA與6-BA對叢生芽增殖的影響

通過表4可以看出，NAA與6-BA誘導(dǎo)鐵皮石斛叢生芽增殖的最適濃度配比為MS+6-BA 1.5 mg/L+NAA 1.0 mg/L，此時(shí)鐵皮石斛叢生芽增殖倍數(shù)最高，為11.35倍，平均苗高最高，為5.01 cm。

2.3 ? IBA與NAA對鐵皮石斛壯苗與生根的影響

通過表5可以看出，鐵皮石斛壯苗與生根的最適濃度配比為1/2 MS+IBA 1.5 mg/L，生根率為100%，平均根數(shù)最多，為9.80條，平均芽數(shù)可達(dá)3.65株。

3 ? 小結(jié)與討論

試驗(yàn)選擇生長健壯旺盛的優(yōu)良盆栽母株，剪取葉色嫩綠生長均勻的莖條為外植體，經(jīng)過試驗(yàn)分析，篩選出了最適合誘導(dǎo)鐵皮石斛叢生芽分化的培養(yǎng)基為MS+6-BA 2.0 mg/L+2，4-D 1.0 mg/L，此條件下，鐵皮石斛分化率為88.31%，平均芽數(shù)為18.01個。最適合促進(jìn)叢生芽增殖的培養(yǎng)基為MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 1.0 mg/L，此條件下鐵皮石斛叢生芽增殖倍數(shù)為11.35倍，平均苗高為5.01 cm。最適合壯苗與生根的培養(yǎng)基為1/2MS+IBA 1.5 mg/L，試管苗移栽至珍珠巖、森林土、粉碎松針葉質(zhì)量比為1∶1∶1配制的基質(zhì)上，30 d后成活率達(dá)90%以上。

2，4-D與6-BA在一定配比下對鐵皮石斛叢生芽的誘導(dǎo)發(fā)揮重要作用，但6-BA的影響高于2，4-D;2，4-D雖然在叢生芽的分化過程中起重要的作用，幾乎能促進(jìn)所有外植體產(chǎn)生愈傷組織，但對于叢生芽分化的效果不顯著，且有部分叢生芽呈玻璃狀，因此在芽苗增殖培養(yǎng)過程中采用了NAA則獲得了較好的結(jié)果。在增殖培養(yǎng)中獲得的叢生芽也能產(chǎn)生一定幼根，但苗細(xì)根弱，根莖處還有少量愈傷組織，為獲得壯苗以提高移栽成活率，本試驗(yàn)設(shè)計(jì)了壯苗與生根試驗(yàn)，IBA對鐵皮石斛的生根與壯苗起到了重要作用。

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（本文責(zé)編：陳 ? ?偉）