李亦聰　潘恩山　陳翠萍

摘要 目的：探討生精種玉湯治療少精弱精性不育的療效及對精液中Caspase 3和Caspase 8的影響，為其臨床診治提供參考。方法：選取2015年6月至2018年6月惠州市中心人民醫(yī)院收治的少精弱精性不育患者96例作為研究對象，按照隨機數(shù)字表法分為對照組和觀察組，每組48例。對照組患者給予五子衍宗丸治療，觀察組患者給予生精種玉湯治療，比較2組患者治療前后精液各參數(shù)以及精液中、精子中Caspase 3和Caspase 8水平變化。結(jié)果：與治療前比較，2組患者精子密度、精子成活率、a級精子活力以及a+b級精子活力等精液各參數(shù)均明顯升高，精液中Caspase 3、Caspase 8水平和精子中Caspase 3和Caspase 8水平明顯降低（均P<0.05），且觀察組上述指標(biāo)改善更為顯著（P<0.05）。觀察組患者治療有效率為95.83%，明顯高于對照組的83.33%，2組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：生精種玉湯治療少精弱精性不育患者，可以明顯降低精液中Caspase 3和Caspase 8水平，增強精子活力，標(biāo)本兼治，效果更加顯著，值得臨床推廣使用。

關(guān)鍵詞 生精種玉湯;少精弱精性不育;精子密度;精子活力;精子成活率;Caspase 3;Caspase 8;療效

Therapeutic Effects of Shengjing Zhongyu Decoction on Oligospermia and Asthenospermia Infertility and Its Effects on Caspase 3 and Caspase 8 in Semen

Li Yicong1，Pan Enshan2，Chen Cuiping1

（1 Department of Traditional Chinese Medicine，Huizhou Central People′s Hospital，Huizhou 516001，China; 2 Department of Urology，Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine Affiliated to Southern Medical University，Guangzhou 510000，China）

Abstract Objective：To explore the effects of Shengjing Zhongyu Decoction on the treatment of oligospermia and asthenospermia infertility and its influence on Caspase 3 and Caspase 8 in semen，and to provide reference for its clinical diagnosis and treatment.Methods：A total of 96 patients with oligospermia and asthenospermia infertility admitted to Huizhou Central People′s Hospital from June 2015 to June 2018 were enrolled in the study.They were divided into a control group and an observation group according to random number method，with 48 cases each.The control group was treated with Wuzi Yanzong Pill.The patients in the observation group were treated with Shengjing Zhongyu Decoction.The parameters of semen and the changes of Caspase 3 and Caspase 8 in semen and sperm were compared before and after treatment.Results：Compared with before treatment，the sperm density，sperm survival rate，a-level sperm activity，a+b-level sperm activity and other semen parameters of the 2 groups were significantly increased，and the levels of caspase-3 and caspase-8 in semen and sperm were significantly decreased，and the improvement of the above indicators was more significant in the observation group（P<0.05）.The effective rate of treatment in the observation group was 95.83%，which was significantly higher than 83.33% in the control group.The difference was statistically significant（P<0.05）.Conclusion：Shengjing Zhongyu Decoction can significantly reduce the levels of Caspase 3 and Caspase 8 in semen，enhance the sperm motility，and treat the symptoms more effectively.It is worthy of clinical promotion.

Key Words Shengjing Zhongyu Decoction; Oligospermia and asthenospermia infertility; Sperm density; Sperm vitality; Sperm survival rate; Caspase 3; Caspase 8; Efficacy

中圖分類號：R242文獻(xiàn)標(biāo)識碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2019.09.029

近年來，隨著我國社會的發(fā)展，環(huán)境污染加重以及人們生活節(jié)奏的不斷加快，尤其是日常食品中類雌激素作用的化合物含量的增加，男子精子的數(shù)量呈現(xiàn)逐年降低的趨勢[1]。研究顯示，經(jīng)統(tǒng)計世界范圍內(nèi)男子的精子數(shù)量降低有50%左右，不育癥發(fā)病率也上升至16%左右，對社會安定以及家庭和睦產(chǎn)生重要的影響[2]。在男性不育癥中，少精弱精者占有不低于60%的比例。目前現(xiàn)代醫(yī)學(xué)主要通過輔助生殖技術(shù)、手術(shù)、抗炎、抗激素以及激素等方面著手治療，但是最終療效欠佳[3]。中醫(yī)藥治療男性不育癥由來已久，具有相對較為豐富的經(jīng)驗多采用五子衍宗丸中成藥進(jìn)行治療，幾乎無不良反應(yīng)，療效獨特[4]。張小慶等[3]研究顯示，五子衍宗丸聯(lián)合治療少精弱精性不育患者可以明顯改善其精液治療指標(biāo)。生精種玉湯是著名中醫(yī)韓延華教授研制的臨床經(jīng)驗方，對于少精弱精性不育具有較好的療效[5]。故本文探討生精種玉湯治療精弱精性不育的療效及對精液中Caspase 3和Caspase 8的影響，為其臨床診治提供參考。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2015年6月至2018年6月惠州市中心人民醫(yī)院治療的少精弱精性不育患者96例作為研究對象，按照隨機數(shù)字表法分為對照組和觀察組，每組48例。2組患者年齡、病程以及少精弱精分型等一般資料差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。見表1。所有患者中醫(yī)證型均為腎虛精虧證。

1.2 診斷標(biāo)準(zhǔn)

1.2.1 西醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn) 參考WHO第4版《人類精液及精子-子宮頸黏液相互作用實驗室檢驗手冊》中關(guān)于弱精、少精癥的診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]，具體如下：1）少精子癥、弱精癥：精子成活率<60%/h，精子活動力a級<25%/h或者a+b級<50%/h為弱精癥;精子數(shù)<2×107/mL為少精癥。2）弱精癥病情程度以及精子活動力分級：0度不活動為d;I度原地擺動為c;Ⅱ度慢速直線運動為b;Ⅲ度以上為快速直線運動為a。a<10%/h或者a+b級<20%/h為重度;a級處于11%～20%/h或者a+b級處于21%～40%/h為中度;a級處于21%～24%/h或者a+b級處于41%～49%/h為輕度。3）少精癥病情程度與精子密度分級：染色體正常，但無精子為F;精子密度<106/mL為E;精子密度處于106～107/mL為D;精子密度處于107～20×106/mL為C級;精子密度處于20×106～40×106/mL為B級;精子密度<40×106/mL為A級。

1.2.2 中醫(yī)診斷標(biāo)準(zhǔn) 參考《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》[7]中關(guān)于少精弱精性不育的診斷標(biāo)準(zhǔn)，具體如下：次癥：脈沉細(xì)弱，舌淡苔薄白，夜尿增多，早泄遺精，精神疲憊，注意力不集中，脫發(fā)齒松，多夢失眠，記憶力減退，耳鳴頭暈，以上癥狀無記0分，有則記2分。主癥：腰膝酸軟，性欲淡漠，不育，以上每項癥狀分為無、輕、中、重，分別記為0、2、4、6分。必須具備上述主癥，外加上述至少1個次癥即可診斷。腎虛精虧證證候表現(xiàn)：脈無力或細(xì)弱，舌淡苔薄，腰膝酸軟，陰囊潮濕，耳鳴頭暈。

1.3 納入標(biāo)準(zhǔn) 1）符合上述診斷標(biāo)準(zhǔn)者;2）女方檢查正常，未孕，未采取任何避孕措施，性生活正常;3）患者及家屬同意并積極配合本次研究，簽署知情協(xié)議書，本研究經(jīng)本院倫理委員會審核通過（倫理審批號：20150105）。

1.4 排除標(biāo)準(zhǔn) 1）逆行排精者;2）無精子癥者;3）服用抗腫瘤、抗癲癇等有礙精子活力以及生精藥物者;4）中重度前列腺炎、附睪炎以及睪丸炎者;5）合并心、肝、腎、遺傳、免疫以及內(nèi)分泌等疾病者;6）生殖器官外傷史、手術(shù)史，影響生育功能者;7）未按規(guī)定用藥或者臨床治療不完整者。

1.5 治療方法 對照組患者口服五子衍宗丸（福州海王金象中藥制藥有限公司，國藥準(zhǔn)字Z35020749），2次/d，1丸/次。觀察組患者口服生精種玉湯治療，處方為熟地黃25 g、山藥20 g、黃精20 g、枸杞子20 g、鱉甲15 g、淫羊藿15 g、杜仲15 g、續(xù)斷15 g、白芍10 g、柴胡10 g、炙甘草10 g。每日1劑，水煎取汁400 mL，分2次溫服。2組均以2個月為1個療程，服藥期間禁止過度吸煙酗酒，避免與有毒物質(zhì)、放射線以及高溫等有害環(huán)境因素接觸以及相關(guān)精神刺激。

1.6 觀察指標(biāo) 1）精液常規(guī)檢查：治療前后對所有患者進(jìn)行精液常規(guī)檢查，禁欲4～5 d，手淫取精，之后置于恒溫箱（37 ℃）中保存，采用精液全自動分析系統(tǒng)（BTS-QP型;北京倍特雙科技發(fā)展有限公司）對精液相關(guān)參數(shù)進(jìn)行分析。2）精液中Caspase 3和Caspase 8水平測定：將精液通過離心機（Ortho BioVue;強生（上海）醫(yī)療器材有限公司）在37 ℃，離心半徑10.5 cm，轉(zhuǎn)速3 000 r/min條件下，離心15 min;對精漿進(jìn)行分離，用生理鹽水對剩下的精子進(jìn)行清洗離心，轉(zhuǎn)速3 000 r/min條件下，離心5 min。將精子、精液分別編號，置于-40 ℃冰箱保存。采用酶聯(lián)免疫吸附法對精液中和精子中的Caspase 3和Caspase 8水平進(jìn)行測定，試劑盒購于上海信裕生物科技有限公司，操作方法嚴(yán)格按照說明書執(zhí)行。

1.7 療效判定標(biāo)準(zhǔn) 參考《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則》[7]和《不育夫婦標(biāo)準(zhǔn)檢查與診斷手冊》中關(guān)于少精弱精不育癥的臨床療效評價標(biāo)準(zhǔn)，具體如下[8]：1）無效：治療前后無變化，或者治療后精子成活率、活力以及密度≤30%;2）有效：弱精癥成活率>30%，精子活力a或者a+b提高>30%，少精癥精子密度提高>30%，精子活動力和密度有群級間改善;3）顯效：雖未受孕，但治療后精子成活率≥60%/h，弱精癥精子活動力處于正常（a級>25%/h或者a+b級≥50%/h），少精癥精子數(shù)量≥20×106/mL;4）痊愈：精液無異?；蛑委熎陂g配偶懷孕?？傆行?（痊愈+顯效+有效）/總數(shù)×100%。

1.8 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，行t檢驗，計數(shù)資料采用[例（%）]表示，行χ2檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組患者治療前后精液各參數(shù)比較 與治療前比較，2組患者精子密度、精子成活率、a級精子活力以及a+b級精子活力等精液各參數(shù)均明顯升高（P<0.05），且觀察組患者上述指標(biāo)升高更為顯著（P<0.05）。見表2。

2.2 2組患者治療前后精液及精子中Caspase 3和Caspase 8水平比較 與治療前比較，2組患者精液中Caspase 3和Caspase 8水平均明顯降低（P<0.05），且觀察組患者上述指標(biāo)降低更為顯著（P<0.05）。與治療前比較，2組患者精子中Caspase 3和Caspase 8水平均明顯降低（P<0.05），且觀察組患者上述指標(biāo)降低更為顯著（P<0.05）。見表3。

2.3 2組患者臨床療效比較 觀察組患者治療有效率為95.83%，明顯高于對照組的83.33%，2組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。見表4。

3 討論

中醫(yī)學(xué)對于男性不育癥的研究歷史悠久，《山海經(jīng)》云“幼鳥，食之宜子孫……佩之宜子孫”。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，人體腎藏精，主生殖，腎部精氣不足會對人的正常生長發(fā)育以及生殖功能產(chǎn)生直接性的影響[9]。本病治療時，應(yīng)在補腎的基礎(chǔ)上，加脾胃等其他臟器的進(jìn)補。脾胃為人體后天之根本，生化氣血之源頭;腎部之精氣需要脾胃化生而成的水谷精微促進(jìn)形成，故而人體脾胃的好壞間接或者直接性地對腎之精氣產(chǎn)生作用[10]。陳修園曾云：“人之即生……，而后腎得以補益”。另外，中醫(yī)學(xué)也有“精血同源”的理論，血可生精，亦可化血?！稄埵厢t(yī)通》云：“氣不耗……歸精于肝而化清血”。目前臨床上認(rèn)為男性不育癥的主要病因有生殖系統(tǒng)病變以及精索靜脈曲張等，久積入絡(luò)，不通則瘀，肝氣郁結(jié)，氣機不暢，進(jìn)而誘導(dǎo)男性不育的發(fā)生[11]。故本病的主要病機為血瘀、肝郁、腎脾虧虛，其中腎虛為本，血瘀、肝郁為標(biāo)，臨床治療應(yīng)以補腎為主，同時兼顧肝脾二臟的補益[12]。

凋亡是機體異常細(xì)胞清除異己組織器官正常發(fā)育維持所必須的一種細(xì)胞程序性死亡，在人體睪丸組織中凋亡對于睪丸成熟以及精子分化具有重要作用[13]。其中Caspase在凋亡機制中起著重要的作用，主要通過線粒體途徑和膜死亡受體途徑介導(dǎo)細(xì)胞凋亡，而Caspase3和Caspase8是其中最重要的2個啟動因子[14]。精漿中分離出來的Caspase可對射精前精子凋亡情況進(jìn)行直接性反映;而從精子中分離出來的Caspase可以對射精后精子凋亡情況進(jìn)行反映，也有可能是附睪或者睪丸中少量發(fā)育不全精子的凋亡反映。而健康人的精子在射精后死亡不是由于凋亡引起的而是自身壞死[15]。對照組患者Caspase 3和Caspase 8得到一定程度的改善，可能是由于五子衍宗丸中的五味子、覆盆子可固腎澀精，菟絲子、枸杞子可益精補腎，諸藥配合起補髓填精滋腎的功效，改善腎功能，增強附睪以及睪丸功能，降低精液中Caspase 3和Caspase 8水平，提高精子質(zhì)量[16]。中醫(yī)學(xué)認(rèn)為，腎精虧虛是引起男子不育主要原因，生精種玉湯方中熟地黃為君藥，起填髓益精、滋陰補血之效，現(xiàn)代藥理學(xué)研究顯示，熟地黃可通過作用于機體骨髓造血系統(tǒng)，起補血滋陰之效。川續(xù)斷、杜仲、淫羊藿可溫補腎陽，陰陽互濟，鼓舞腎氣，生化無窮;鱉甲潛陽滋陰，以補陰藥配伍，陰陽互補;黃精、山藥可健脾養(yǎng)陰益氣，以旺后天滋補先天之功，生精之源不竭;枸杞子可養(yǎng)精補腎，上述諸藥均為臣藥。現(xiàn)代藥理學(xué)研究顯示，枸杞子對脂質(zhì)代謝或抗脂肪肝的作用，淫羊藿可通過促進(jìn)機體精液分泌，刺激神經(jīng)，間接性的興奮性欲，黃精可升高肝臟超氧化物歧化酶（SOD）活性，降低心肌脂褐質(zhì)，有研究[12]顯示，弱精性不育與機體內(nèi)SOD水平降低有關(guān)。白芍可柔肝養(yǎng)血斂陰，與柴胡合用共起斂陰陽達(dá)肝氣之功，有助于全身血行，通瘀滯，進(jìn)而促使精子活動有力，為佐藥。甘草調(diào)和諸藥，健脾胃，中和方中佐使藥[17]。各藥合用共奏填精補腎之效，補益腎陰腎陽，充盈腎氣，旺盛生精，降低精液中Caspase 3和Caspase 8水平，促進(jìn)精子活動更加有力，增強療效。

綜上所述，生精種玉湯治療少精弱精性不育患者，可以明顯降低精液中Caspase 3和Caspase 8水平，增強精子活力，標(biāo)本兼治，效果更加顯著，值得臨床推廣使用。

參考文獻(xiàn)

[1]Perret J，Dharmage S.The Less Refined Reference Group of“No Asthma”Is Related to the Opposing Interaction Findings[J].Am J Respir Crit Care Med，2016，194（9）：1172-1173.

[2]Hancox R J，Gray A R，Sears M R.Reply：The Less Refined Reference Group of “No Asthma”Is Not Related to the Opposing Interaction Findings[J].Am J Respir Crit Care Med，2016，194（9）：1173-1174.

[3]張小慶，孫丹杰.五子衍宗丸聯(lián)合復(fù)方玄駒膠囊治療少弱精癥患者30例療效觀察[J].中國性科學(xué)，2017，26（2）：88-90.

[4]李振華，曲夷.姜建國運用五子衍宗丸治療弱精癥經(jīng)驗[J].山東中醫(yī)雜志，2017，36（5）：396-397.

[5]劉東陽，韓延華，LIUDong-yang，等.韓延華治療少弱精子癥經(jīng)驗拾萃[J].世界中西醫(yī)結(jié)合雜志，2016，11（1）：14-15.

[6]Crawford N M，Hoff H S，Mersereau J E.Infertile women who screen positive for depression are less likely to initiate fertility treatments[J].Human Reproduction，2017，32（3）：582-587.

[7]孫建明，劉鵬，梁國慶，等.生精湯治療腎虛血瘀型弱精子癥臨床療效觀察[J].中國男科學(xué)雜志，2017，31（1）：50-54.

[8]關(guān)立軍，胡一珍，高媛，等.自擬七子補腎生精湯聯(lián)合他莫昔芬、維生素E治療少弱精子癥療效觀察[J].中國計劃生育和婦產(chǎn)科，2016，6（1）：76-78.

[9]陶方澤，周小敏，方躍坤，等.崔云教授治療少弱精子癥遣方用藥特色探討[J].浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2017，41（2）：103-107.

[10]毛加明，姜輝，王傳航，等.麒麟丸治療特發(fā)性少弱精子癥的多中心、隨機雙盲對照研究[J].中華男科學(xué)雜志，2017，23（3）：251-255.

[11]杜強，耿強，李湛民，等.東北地區(qū)少弱精子癥和無精子癥患者中醫(yī)體質(zhì)特征初探[J].中華中醫(yī)藥雜志，2017，9（2）：855-857.

[12]孫捷，應(yīng)志偉，吳麗萍，等.麒麟丸治療少弱精子癥的系統(tǒng)評價[J].中國男科學(xué)雜志，2016，30（4）：57-59.

[13]Zalata A A，Mokhtar N，Atwa A，et al.The role of Protamine 2 gene expression and caspase-9 activity in male infertility[J].Journal of Urology，2016，195（3）：796-800.

[14]Zheng X，Chu F，Mirkin B L，et al.Role of the proteolytic hierarchy between cathepsin L，cathepsin D and caspase-3 in regulation of cellular susceptibility to apoptosis and autophagy[J].BBA-Molecular Cell Research，2016，1783（12）：2294-2300.

[15]Kiekow C J，F(xiàn)igueiró F，Dietrich F，et al.Quercetin derivative induces cell death in glioma cells by modulating NF-κB nuclear translocation and caspase-3 activation[J].European Journal of Pharmaceutical Sciences Official Journal of the European Federation for Pharmaceutical Sciences，2016，84（6）：116-122.

[16]關(guān)立軍，苑輝，胡一珍，等.七子補腎生精湯聯(lián)合維生素E治療弱精子癥臨床研究[J].中醫(yī)學(xué)報，2017，32（10）：1969-1972.

[17]尹艷茹，韓延華，王孟長.生精種玉湯治療腎虛型少弱精子癥的療效觀察[J].中國男科學(xué)雜志，2014，28（1）：56-56.

（2019-02-19收稿 責(zé)任編輯：芮莉莉）