趙榮軍，蘇詩(shī)娜，陳祝霞，蘇朝芬，劉英，梁超峰

(1.江蘇省泰興市人民醫(yī)院藥學(xué)科，江蘇泰興 225400； 2.廣州市藥物一致性評(píng)價(jià)技術(shù)聯(lián)盟，廣東 廣州 510663； 3.廣州科瑯醫(yī)療科技有限公司，廣東 廣州510530； 4.廣州市番禺區(qū)中心醫(yī)院，廣東 廣州511400； 5.廣州醫(yī)藥工業(yè)研究院廣州市藥物制劑新型釋藥技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，廣東 廣州510240； 6.中山大學(xué)新華學(xué)院，廣東 廣州510520； 7.廣東嶺南職業(yè)技術(shù)學(xué)院，廣東 廣州510663； 8.廣東藥科大學(xué)附屬第一醫(yī)院，廣東 廣州510080)

鹽酸文拉法辛(venlafaxine hydrochloride)作為第三代抗抑郁藥，在臨床上被廣泛應(yīng)用于治療各種類型抑郁癥、強(qiáng)迫癥、精神分裂癥、社交恐懼癥、創(chuàng)后應(yīng)激障礙等疾病，具有起效快、不良反應(yīng)少、耐受劑量范圍更大，對(duì)重性抑郁癥患者有更高的臨床治愈率的優(yōu)點(diǎn)[1]。鹽酸文拉法辛緩釋膠囊由惠氏公司首先研發(fā)并于1997年10月首獲美國(guó)FDA批準(zhǔn)上市，商品名為“怡諾思”(EFFEXOR XR)，是全球第一個(gè)上市的5-羥色胺-去甲腎上腺素再攝取抑制劑，實(shí)現(xiàn)了一天一次給藥且能更快地改善癥狀，得到臨床廣泛認(rèn)可[2]。

本研究在前期研究[3]和其他文獻(xiàn)[4]的基礎(chǔ)上，對(duì)鹽酸文拉法辛緩釋膠囊產(chǎn)業(yè)化的關(guān)鍵，即中試放大環(huán)節(jié)(特別是對(duì)關(guān)鍵工藝—緩釋層流化床包衣的關(guān)鍵參數(shù)的控制)和產(chǎn)品在不同釋放條件(介質(zhì)、方法、轉(zhuǎn)速)的釋藥特性進(jìn)行研究，為建立緩釋制劑的產(chǎn)業(yè)化過(guò)程質(zhì)量評(píng)價(jià)與控制、研發(fā)及中試平臺(tái)打下基礎(chǔ)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

流化床[可行性試驗(yàn)型：Midi-Glatt；小試型：GPCG-1；預(yù)中試型：GPCG-5，德國(guó)Glatt GmbH；中試型：FLZB-30，創(chuàng)志(上海)有限公司]；Agilent HPLC 1100高效液相色譜儀(安捷倫科技公司)；UV-2450型紫外可見分光光度計(jì)(日本島津公司)；ADFC8E自動(dòng)溶出取樣系統(tǒng)(天津市天大天發(fā)科技有限公司)。

1.2 藥品與試劑

鹽酸文拉法辛緩釋膠囊(批號(hào)：1112014，規(guī)格：75 mg/粒，愛爾蘭惠氏藥廠)；鹽酸文拉法辛對(duì)照品(批號(hào)：20111114，質(zhì)量分?jǐn)?shù)：99.74%，湖北巨順宏生物化工有限公司)；MCC PH101(批號(hào)：C1206065，湖州展望藥業(yè)有限公司)；HPMC E5(批號(hào)：PD371004)、HPMC E6(批號(hào)：PD340380A)、乙基纖維素 EC 10CP(批號(hào)：PD303969)均由上?？?lè)康包衣技術(shù)有限公司提供；滑石粉(批號(hào)：0904011A，桂林桂廣滑石開發(fā)有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 鹽酸文拉法辛的測(cè)定方法

見本課題組的前期研究[3]。

2.2 釋放度測(cè)定方法

2.2.1 色譜條件[5]色譜柱：Agilent C8(150 mm × 4.6 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-緩沖液(體積比3∶7)；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：274 nm；柱溫：30 ℃。

2.2.2 方法學(xué)考察 按2015年版《中國(guó)藥典》(四部)通則9101相關(guān)要求進(jìn)行方法學(xué)考察。結(jié)果顯示：鹽酸文拉法辛質(zhì)量濃度(ρ)對(duì)峰面積(A)的回歸方程為A= 2.513 5ρ+1.700 5(r2=1.000 0，n=6)，線性范圍為2～120 μg/mL；平均回收率為99.9%(RSD=1.42%，n=15)；取鹽酸文拉法辛緩釋膠囊6粒，置37 ℃、900 mL脫氣純化水的溶出杯中，采用《中國(guó)藥典》2015年版四部0931第二法[6]，以脫氣純化水作為釋放介質(zhì)，轉(zhuǎn)速為100 r/min，在釋放24 h時(shí)抽取5 mL，濾過(guò)，在室溫放置不同的時(shí)間(0、2、4、6、8、12、24 h)分別測(cè)定吸收度，結(jié)果顯示過(guò)濾后樣品的文拉法辛質(zhì)量分?jǐn)?shù)在24 h內(nèi)基本保持不變。

2.2.3 釋放度測(cè)定方法 采用《中國(guó)藥典》2015年版四部0931第二法[6]，采用ADFC8E自動(dòng)溶出取樣系統(tǒng)，取鹽酸文拉法辛緩釋膠囊12粒，置37 ℃、900 mL的脫氣純化水中，分別于1、2、3、4、5、6、8、10、12、16、20、24 h定時(shí)取濾液5 mL，濾過(guò)，HPLC法測(cè)定釋放度；另精密稱取鹽酸文拉法辛對(duì)照品適量，加介質(zhì)(取相同規(guī)格的空膠囊殼，加脫氣純化水900 mL，置37 ℃水浴使溶解，濾過(guò))適量使溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含文拉法辛70 μg的溶液，計(jì)算釋放度。

2.3 緩釋(小丸)膠囊的制備

2.3.1 制備工藝[3]稱取鹽酸文拉法辛75 g，MCC 111 g，HPMC 1.88 g，過(guò)80目篩，混合均勻，加入純水，采用快速攪拌制粒機(jī)制成濕度適宜的軟材。將軟材加入擠壓機(jī)中，經(jīng)0.8 mm篩孔篩板，以35 r/min的螺桿轉(zhuǎn)速擠出成條狀；再將其置于圓化機(jī)內(nèi)，以滾圓速度1 000 r/min滾化9 min，制得含藥濕丸；置于60 ℃鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)4.5 h，取出，篩分得含藥丸芯。稱取1.88 g HPMC和281 g體積分?jǐn)?shù)75%乙醇配制的溶液作為隔離衣層；37.1 g乙基纖維素、0.375 g滑石粉和493 g體積分?jǐn)?shù)75%乙醇配制的溶液作為緩釋衣層；含藥丸芯投入流化床包衣機(jī)(Wurster裝置)，調(diào)節(jié)包衣參數(shù)包隔離衣、緩釋衣，制成緩釋小丸，檢驗(yàn)、裝膠囊。

2.3.2 緩釋衣層小試、中試放大研究 根據(jù)在可行性試驗(yàn)型流化床Midi-Glatt上的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，采用流化床批量遞增(可行性試驗(yàn)型Midi-Glatt→小試型GPCG-1→預(yù)中試型GPCG-5→中試型FLZB-30)設(shè)計(jì)，檢測(cè)產(chǎn)品質(zhì)量分?jǐn)?shù)、收率、效率、釋放度和釋放曲線，考察、優(yōu)化中試放大工藝，結(jié)果見表1、表2?？梢?，調(diào)整好各參數(shù)，特別是控制包衣區(qū)溫度、隔圈內(nèi)風(fēng)速、霧化液滴大小，在小試、中試放大過(guò)程中盡量相近后，可以將小試工藝順利放大到中試，所得產(chǎn)品均符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，且中試產(chǎn)品的釋放度與較小制備規(guī)模樣品的相似(相似因子f2>50)。

表1 各型流化床參數(shù)及實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 1 Various fluidized bed parameters and experimental results

表2 鹽酸文拉法辛緩釋膠囊各型流化床制品的釋放度Table 2 Release of various fluidized bed products of venlafaxine hydrochloride sustained-release capsules

2.4 影響釋放度的因素考察

2.4.1 不同釋放方法對(duì)藥物釋放的影響[7]采用《中國(guó)藥典》2015年版四部0931第一法、第二法進(jìn)行釋放度試驗(yàn)[6]，轉(zhuǎn)速為100 r/min，分別于1、2、3、4、5、6、8、10、12、16、20、24 h定時(shí)取濾液5 mL，HPLC法測(cè)定釋放度，考察不同方法對(duì)釋放度的影響，結(jié)果見圖1?？梢?，2種方法均對(duì)鹽酸文拉法辛膠囊釋放度幾乎沒(méi)有影響。

籃法漿法051015202530100806040200t/h釋放度/%

圖1不同釋放方法對(duì)藥物釋放的影響

Figure1The effect of different dissolution methods on drug release

2.4.2 不同轉(zhuǎn)速對(duì)藥物釋放的影響 采用《中國(guó)藥典》2015年版四部0931第二法[6]進(jìn)行釋放度試驗(yàn)，轉(zhuǎn)速分別為100、75、50 r/min，考察不同轉(zhuǎn)速對(duì)釋放度的影響，結(jié)果見圖2?？梢姡?種轉(zhuǎn)速下鹽酸文拉法辛膠囊的釋放曲線接近相同。

50r/min75r/min100r/min051015202530t/h100806040200釋放度/%

圖2不同轉(zhuǎn)速對(duì)藥物釋放的影響

Figure2The effect of different rotational speeds on drug release

2.4.3 不同介質(zhì)對(duì)藥物釋放的影響 采用《中國(guó)藥典》2015年版四部0931第二法[6]進(jìn)行釋放度試驗(yàn)。配制人工胃液(pH1.2)、人工腸液(pH6.8)、pH4.5緩沖溶液和脫氣純化水分別作為藥物釋放介質(zhì)，考察鹽酸文拉法辛膠囊在上述4種介質(zhì)下的釋放度情況[8-9]，結(jié)果見圖3。可見，鹽酸文拉法辛膠囊在4種pH釋放介質(zhì)下的釋放度曲線相似度高，4種pH釋放介質(zhì)對(duì)鹽酸文拉法辛膠囊釋放度均基本沒(méi)有影響。

pH4.5pH1.2pH6.8水051015202530t/h100806040200釋放度/%

圖3不同遞質(zhì)對(duì)藥物釋放的影響

Figure3The effect of different release medium on drug release

2.4.4 體外釋藥機(jī)理的研究 取本品，按照《中國(guó)藥典》2015年版四部0931第二法[6]，以水為釋放介質(zhì)，體積為900 mL，轉(zhuǎn)速為100 r/min，依法操作，經(jīng)1、2、3、4、5、6、8、10、12、16、20、24 h，各取溶液5 mL，濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液，按“2.2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣檢測(cè)，計(jì)算不同時(shí)間的釋放度，結(jié)果見圖4。

051015202530t/h100806040200釋放度/%

圖4鹽酸文拉法辛緩釋膠囊釋放曲線

Figure4Release curve of Venlafaxine Hydrochloride Sustained-Release Capsules

為了更直觀描述鹽酸文拉法辛緩釋膠囊的體外釋藥機(jī)理，根據(jù)上述釋放度測(cè)定的結(jié)果，分別用不同的釋放模型(零級(jí)方程、一級(jí)方程、Higuchi方程、Ritger-Peppas方程、Weibull方程)進(jìn)行線性擬合，結(jié)果見表3?？梢姡}酸文拉法辛緩釋膠囊的體外釋藥符合一級(jí)釋放模型，前期快速釋藥，后期緩慢釋藥。

表3 不同釋藥模型的擬合方程和相關(guān)度

Table3The fitting equation and correlation degree of different drug release models

擬合模型擬合方程r零級(jí)釋放Q=0.035 7t+0.249 10.890 3一級(jí)釋放ln(1-Q)=-0.051 9t - 0.026 10.995 0HiguchiQ = 0.232t1/2+0.071 40.958 8Ritger-PeppaslnQ=1.699 4lnt - 3.603 50.906 1Weibullln ln11-Q=1.960 6lnt - 3.660.935 2

3 討論

中試是實(shí)驗(yàn)室小試與大生產(chǎn)的橋梁，是在模擬工業(yè)化生產(chǎn)的條件下驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)室工藝可行性所進(jìn)行的工藝研究，流化床包衣的中試是緩釋丸劑研發(fā)鏈條中最關(guān)鍵一環(huán)，原因是中試的流化床在噴槍結(jié)構(gòu)原理等方面與小試的不同，但與工業(yè)化生產(chǎn)的一致。無(wú)論是何種流化床，進(jìn)口的或是國(guó)產(chǎn)的，關(guān)鍵是控制包衣區(qū)溫度、隔圈內(nèi)風(fēng)速、霧化液滴大小在小試、中試、生產(chǎn)放大過(guò)程中一致或盡量接近，再調(diào)整好其他參數(shù)，就可以將小試工藝順利放大到中試，并使產(chǎn)品質(zhì)量在生產(chǎn)規(guī)模放大過(guò)程中保持一致，為進(jìn)一步大生產(chǎn)奠定基礎(chǔ)。

本研究分別考察人工胃液(pH1.2)、人工腸液(pH 6.8)、pH 4.5緩沖溶液和脫氣純化水4種釋放介質(zhì)，結(jié)果顯示鹽酸文拉法辛緩釋膠囊在4種釋放介質(zhì)中的釋放度曲線相似度高，4種釋放介質(zhì)對(duì)鹽酸文拉法辛膠囊釋放度基本沒(méi)有影響。相比之下，純化水簡(jiǎn)單易得，可以考慮用純化水代替人工胃液和人工腸液進(jìn)行釋放度測(cè)試。

鹽酸文拉法辛膠囊在3種轉(zhuǎn)速(100、75、50 r/min)下的釋放曲線接近相同，說(shuō)明藥物在身體機(jī)能強(qiáng)壯或虛弱者體內(nèi)均能按要求釋放和被吸收，而較低轉(zhuǎn)速(如50 r/min)使藥物釋放較緩慢且更有區(qū)分力，因此，用50 r/min轉(zhuǎn)速來(lái)測(cè)試釋放度，更能準(zhǔn)確地反映鹽酸文拉法辛緩釋膠囊的釋藥性能和差異。

鹽酸文拉法辛膠囊與釋放介質(zhì)接觸后，膠囊殼逐漸溶解破裂，其內(nèi)部含藥小丸暴露于釋放介質(zhì)中，釋放過(guò)程中含藥小丸自始至終維持球形且體積和外表沒(méi)有變化，由此估計(jì)含藥小丸釋放的主要過(guò)程為介質(zhì)從藥劑表面的浸入、藥物溶解、經(jīng)孔道擴(kuò)散及釋出。Higuchi方程及一級(jí)動(dòng)力學(xué)方程均能較好地描述緩釋膠囊的體外釋放曲線，藥物釋放量也與時(shí)間的平方根成直線關(guān)系，符合水不溶性骨架藥物的釋藥特征，提示本制劑處方工藝制備的丸芯和控釋膜控制藥物釋放是通過(guò)孔徑很細(xì)且錯(cuò)綜復(fù)雜的孔道進(jìn)行。