趙東鳳 魏星 肖小娟 彭艷 林亞平 彭卓雋 陳巧 陳絲怡 張程程

〔摘要〕 目的 通過觀察電針“梁門”“足三里”“三陰交”穴對糖尿病胃輕癱（diabetic gastroparesis，DGP）大鼠胃竇組織胰島素樣生長因子1（insulin-like growth factor 1，IGF-1）及表皮生長因子（epidermal growth factor，EGF）表達的影響，探討電針治療DGP的可能機制。方法 選取10只正常SD大鼠為空白組，其余大鼠造模成功后選取30只隨機分為模型組、電針組、胃復安組，每組10只。采用單次腹腔注射鏈脲佐菌素，并連續(xù)8周不規(guī)則喂養(yǎng)高糖高脂飼料方法制備DGP模型，每周測量血糖、尿糖值，記錄癥狀積分。電針組大鼠取穴“梁門”“足三里”“三陰交”，胃復安組予1.7%胃復安藥液灌胃（1 mL/100 g）。治療結(jié)束后，ELISA法檢測IGF-1及EGF表達。結(jié)果 與空白組相比，模型組大鼠血糖、尿糖值和癥狀積分顯著升高（P<0.01），胃竇部IGF-1的含量明顯升高（P<0.05），EGF的含量明顯降低（P<0.05）;經(jīng)治療后，與模型組大鼠相比，電針組和胃復安組大鼠尿糖值、癥狀積分、胃竇部IGF-1含量明顯降低（P<0.05或P<0.01），EGF含量明顯升高（P<0.05或P<0.01），電針組大鼠血糖明顯降低（P<0.05），胃復安組血糖無明顯變化（P>0.05），電針組與胃復安組大鼠比較，各指標均無明顯差異（P>0.05）。結(jié)論 電針“梁門”“足三里”“三陰交”穴能夠降低DGP大鼠血糖、尿糖值，改善DGP大鼠癥狀，其機制可能與電針調(diào)控胃竇組織中IGF-1與EGF的含量有關(guān)。

〔關(guān)鍵詞〕 糖尿病胃輕癱;電針;胃竇組織;胰島素樣生長因子1;表皮生長因子;梁門;足三里;三陰交

〔中圖分類號〕R246? ? ? ?〔文獻標志碼〕A? ? ? ?〔文章編號〕doi：10.3969/j.issn.1674-070X.2019.10.016

Effects of Electroacupuncture on Expression of IGF-1 and EGF in Gastric Antrum of

Diabetic Gastroparesis Rats

ZHAO Dongfeng， WEI Xing， XIAO Xiaojuan， PENG Yan*， LIN Yaping， PENG Zhuojuan， CHEN Qiao，

CHEN Siyi， ZHANG Chengcheng

（Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， Hunan 410208， China）

〔Abstract〕 Objective To observe effects of electroacupuncture （EA） at "Liangmen （ST 21）"， "Zusanli （ST 36）" and "Sanyingjiao （SP 6）" on expression of insulin-like growth factor 1 （IGF-1） and epidermal growth factor （EGF） in diabetic gastroparesis （DGP） rats， so as to explore the mechanism of EA in the treatment of DGP. Methods Ten Sprague-Dawley （SD） rats were taken as blank group. The other rats were randomly divided into model group， EA group， and metoclopramide group after successful modeling， with 10 rats in each group. DGP models were established by single intraperitoneal injection of streptozotocin （STZ） and feeding the rats with high fat-sugar forage irregularly for 8 weeks. Symptom score was recorded， and blood glucose and urine glucose were measured every week. "Liangmen （ST 21）"， "Zusanli （ST 36）" and "Sanyingjiao （SP 6）" were selected in the EA group. The metoclopramide group was given 1.7% metoclopramide （1 mL/100 g） by gavage. After the treatment， the expression of IGF-1 and EGF was detected by ELISA. Results Compared with the blank group， the blood glucose， urine glucose and symptom score in the model group were significantly increased （P<0.01）， the content of IGF-1 in gastric antrum was significantly increased （P<0.05）， while the content of EGF was significantly decreased （P<0.05）. Compared with the model group， the urine glucose and symptom score and the content of IGF-1 in gastric antrum were obviously decreased after the treatment in the EA group and the metoclopramide group （P<0.05 or P<0.01）， while the content of EGF was obviously increased （P<0.05 or P<0.01）. The blood glucose of rats in the EA group was significantly decreased （P<0.05）， but there was no significant change of that in the metoclopramide group （P>0.05）. And there was no significant difference in each index between the EA group and the metoclopramide group （P>0.05）. Conclusion EA at "Liangmen （ST 21）"， "Zusanli （ST 36）" and "Sanyingjiao （SP 6）" can decrease blood glucose and urine glucose， and improve symptoms in DGP rats， which may be closely associated with its effect of regulating the contents of IGF-1 and EGF in gastric antrum tissue.

〔Keywords〕 diabetic gastroparesis; electroacupuncture; gastric antrum tissue; insulin-like growth factor 1; epidermal growth factor; Liangmen （ST 21）; Zusanli （ST 36）; Sanyingjiao （SP 6）

糖尿病胃輕癱（diabetic gastroparesis，DGP）是繼發(fā)于糖尿病的慢性胃腸疾病，以胃動力下降、胃排空減緩為主要特征，臨床表現(xiàn)為腹部飽脹、惡心、嘔吐、厭食等[1-2]。資料顯示，超過50%的糖尿病患者會并發(fā)胃輕癱[3]，使患者血糖控制難度增加，出現(xiàn)其他并發(fā)癥，可危及患者的生命[4]。臨床治療DGP多以改善胃動力為主，但效果欠佳，易產(chǎn)生副作用[5]。胰島素樣生長因子1（insulin-like growth factor 1，IGF-1）又稱為生長介素，是胃腸道內(nèi)重要的營養(yǎng)因子，在局部以自分泌和旁分泌形式對許多組織細胞的增殖、分化起調(diào)節(jié)作用[6]。表皮生長因子（epidermal growth

factor，EGF）是一種肽類生長因子，具有廣泛生物學效應，它的異常表達會打破組織細胞增殖凋亡的動態(tài)平衡，造成疾病的發(fā)生[7]。近年來，針灸被廣泛的應用于DGP的臨床治療中，療效顯著，簡便安全，但缺乏現(xiàn)代醫(yī)學機制的研究[8]。故本研究擬通過觀察電針對DGP大鼠胃竇組織IGF-1和EGF含量的影響，探討電針治療DGP的可能機制。

1 材料與方法

1.1? 動物與分組

60只正常SD大鼠，雌雄各半，SPF級，體質(zhì)量為180～220 g，購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，動物許可證號：SCXK（湘）2016-0002，血糖正常、尿糖陰性，均可納入實驗。適應性喂養(yǎng)7 d后，采用隨機的方法挑選10只為空白組，其余50只大鼠造模。均飼養(yǎng)于湖南斯萊克景達實驗技術(shù)服務(wù)部SPF級實驗動物房，室溫20～26 ℃，相對濕度40%～70%，晝夜循環(huán)，保持12 h光照。

1.2? 主要試劑與儀器

鏈脲佐菌素（美國Sigma公司，貨號：S0130-500 mg）;檸檬酸-檸檬酸鈉（500 g/瓶，湖南匯虹試劑有限公司）;胃復安（5 mg/片，山西云鵬制藥有限公司）;水合氯醛（國藥集團化學試劑有限公司，貨號：30037517）;血糖儀及血糖試紙（三諾安穩(wěn)免調(diào)碼型）;尿糖試紙（廣州市花都高爾寶生物技術(shù)有限公司）;電針儀（華佗牌SDZ-Ⅱ型）;華佗牌針灸針（蘇州醫(yī)療用品廠有限公司生產(chǎn)，0.3 mm×13 mm）;大鼠IGF-1酶聯(lián)免疫試劑盒（南京建成生物工程研究所，貨號：H041）;EGF酶聯(lián)免疫試劑盒（南京建成生物工程研究所，貨號：H031）。

1.3? 造模方法與評定方法

根據(jù)參考文獻[9]，采用單次腹腔注射鏈脲佐菌素（streptozocin， STZ），并連續(xù)8周不規(guī)則喂養(yǎng)高糖高脂飼料方法制備DGP模型。造模前所有大鼠禁食12 h，用0.1 mmol/L檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液于4 ℃干燥環(huán)境中將STZ配成2%濃度（pH 4.2～4.5），快速注射于左下腹腔內(nèi)（55 mg/kg）?？瞻捉M大鼠注射等劑量的0.1 mmol/L檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液。72 h后尾靜脈采血測血糖，血糖≥16.7 mmol/L者視為糖尿病大鼠，配以高脂高糖飼料（普通飼料、蔗糖、熟豬油、奶粉、雞蛋之比為58∶20∶15∶5∶2）不規(guī)則喂養(yǎng)8周，空白組大鼠普通飼料喂養(yǎng)。期間每周測定血糖、尿糖值，血糖<16.7 mmol/L、尿糖陰性者剔除實驗，共剔除12只。DGP造模成功標志[10]：（1）血糖≥16.7 mmol/L，尿糖陽性;（2）大鼠皮毛色澤、行為活動、精神狀態(tài)、大便性狀與空白組有明顯差異。造模大鼠死亡2只，成功36只，隨機挑選造模成功的30只大鼠再次隨機分為電針組、胃復安組和模型組，每組10只。

1.4? 干預方法

干預期所有大鼠普通飼料正常飼養(yǎng)，穴位定位參照《實驗針灸學》和擬人對照法[11]。梁門：以胸骨柄上緣到恥骨聯(lián)合的上3/4與下1/4交界處為肚臍，胸劍聯(lián)合與肚臍連線的中點水平線與鎖骨中線相交處;足三里：膝關(guān)節(jié)后外側(cè)，腓骨小頭下約5 mm處;三陰交：后肢內(nèi)踝尖直上10 mm處。循經(jīng)分別于梁門、足三里、三陰交直下2 mm處取一點作為電針連接點（附點）。電針組大鼠用0.30 mm×13 mm的華佗牌針灸針直刺0.3～0.4寸，連接電針治療儀，負極接穴位，正極接附點，時間15 min，波形為疏密波，疏波頻率為20 Hz，密波頻率為100 Hz，以穴位旁組織輕微顫動為宜。每次針刺單側(cè)，左右輪換取穴。胃復安組大鼠捆綁15 min，并予1.7%胃復安藥液灌胃（1 mL/100 g，1次/d）?？瞻捉M與模型組大鼠捆綁15 min，并予0.9%氯化鈉溶液灌胃（1 mL/100 g，1次/d）。每組大鼠均進行3個療程的治療，每個療程5 d，療程期間休息2 d，共3周。

1.5? 觀察指標

1.5.1? 血糖及尿糖值? 每周采尾靜脈血測血糖;壓迫大鼠下腹部收集尿液，用尿糖試紙檢測（“-”計0分，一個“+”計1分）。

1.5.2? 一般癥狀積分? 根據(jù)大鼠一般情況，記錄大鼠癥狀積分[12]。0分：精神狀態(tài)佳，目光有神，毛色乳白有光澤，活動正常，行動靈活，大便正常;1分：精神狀態(tài)良好，目光乏神，毛色乳白，光澤欠佳，活動正常，但行動較遲緩，大便質(zhì)地變軟，臭味加重;2分：精神不振，目光無神，毛色淡黃，無光澤，活動減少，反應遲鈍，大便質(zhì)稀、次數(shù)多，臭味加重;3分：精神萎靡倦怠、嗜睡，毛色枯黃無光澤，有感染病灶，行動遲緩、群體扎堆，大便稀溏或干稀不定，氣味重。

1.5.3? 胃竇組織IGF-1及EGF含量? 大鼠麻醉處死后，迅速剪取胃竇組織一塊，凍存于-80 ℃冰箱，待測。根據(jù)南京建成生物工程研究所試劑盒說明操作，采用ELISA法檢測。

1.6? 統(tǒng)計學方法

實驗采用完全隨機設(shè)計，所有數(shù)據(jù)使用SPSS 24.0軟件進行處理。滿足正態(tài)性的數(shù)據(jù)用“x±s”表示，多組計量資料采用單因素方差分析，方差齊時用LSD法，方差不齊時用Dunnett T3檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1? 各組大鼠血糖值比較

與造模前比較，造模后的各組大鼠血糖值顯著升高，與空白組比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01），提示造模成功。治療3個療程后，電針組與胃復安組大鼠血糖值較造模后差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01），電針組大鼠血糖值較模型組差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），胃復安組與模型組大鼠血糖值差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表1。

2.2? 各組大鼠尿糖值比較

與造模前比較，造模后的各組大鼠尿糖值顯著升高，與空白組相比差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。治療3個療程后，電針組與胃復安組大鼠尿糖值較造模后差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），電針組與胃復安組大鼠尿糖值較模型組差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），電針組與胃復安組大鼠尿糖值差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表2。

2.3? 各組大鼠癥狀積分比較

與造模前比較，造模后各組大鼠癥狀積分升高明顯，與空白組相比差異有顯著統(tǒng)計學意義（P<0.01），提示造模成功。治療3個療程后，電針組和胃復安組大鼠癥狀積分較造模后有明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01），較模型組亦有明顯降低（P<0.01），電針組與胃復安組大鼠癥狀積分差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表3。

2.4? 各組大鼠胃竇組織IGF-1及EGF含量比較

與空白組相比，模型組大鼠胃竇組織中IGF-1的含量明顯升高（P<0.05），EGF含量明顯下降（P<0.05），電針組大鼠胃竇組織中IGF-1、EGF的含量差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），胃復安組大鼠胃竇組織中IGF-1的含量差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），EGF的含量差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）;與模型組比較，電針組和胃復安組胃竇組織中IGF-1含量明顯下降（P<0.05），電針組胃竇組織中EGF含量顯著升高（P<0.01），胃復安組胃竇組織中EGF含量亦有升高（P<0.05），電針組與胃復安組胃竇組織中的IGF-1和EGF含量比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。見表4。

3 討論

DGP在中醫(yī)文獻典籍中無明確對應的病名，按照臨床癥狀將其歸屬于“消渴”兼“痞滿”“胃緩”“反胃”等范疇，認為此病是由于長期消渴導致脾胃虛弱，內(nèi)生寒、濕、熱邪為患而引發(fā)[13]。研究表明，電針治療DGP療效顯著，臨床上多選取足陽明胃經(jīng)、足太陰脾經(jīng)穴位[14]?！白闳铩笔亲汴柮魑附?jīng)的合穴、胃腑之下合穴，能夠補益脾胃、扶正祛邪，對調(diào)理腸胃和血糖均有良好的作用;“梁門”亦是胃經(jīng)腧穴，能夠和胃降逆、消積化滯，常與“足三里”配伍治療腸胃疾患;“三陰交”為足三陰經(jīng)之交會穴，能夠健脾助運、化痰祛濁，現(xiàn)代研究表明，“三陰交”能夠改善胃部的微循環(huán)，調(diào)控機體內(nèi)分泌，與“足三里”配伍治療DGP的頻率高達45.7%[9，15]。

關(guān)于DGP的發(fā)病機制尚不明確，目前，認為可能與高血糖、胰島細胞免疫破壞、平滑肌纖維化、Cajal間質(zhì)細胞病變等因素有關(guān)[16]，其中高血糖是基礎(chǔ)病因。研究發(fā)現(xiàn)[17]，針灸不僅能夠緩解DGP臨床癥狀，而且能夠調(diào)節(jié)血糖水平。在實驗過程中，每周觀察大鼠的皮毛色澤、行為活動、精神狀態(tài)和大便性狀，并用自擬癥狀積分表評分。本實驗結(jié)果顯示，DGP模型大鼠的癥狀積分較空白組大鼠顯著升高，經(jīng)電針治療后，電針組大鼠的癥狀積分較模型組顯著降低，電針組大鼠血糖和尿糖值與模型組大鼠相比亦明顯降低，這與以往研究一致，說明電針能夠改善DGP大鼠的癥狀，降低血糖及尿糖值。而電針組大鼠的癥狀積分、血糖與尿糖值與胃復安組比較無明顯差異。

IGF-1有48%的氨基酸序列與胰島素同原，是第二強大的天然肽，當其與受體結(jié)合后可以發(fā)揮胰島素效應，改善胰島素抵抗，調(diào)節(jié)血糖水平[18]，同時能夠刺激胃腸道平滑肌細胞的生長，改善胃腸動力，促進胃排空[19]。以往研究表明，DGP的發(fā)生發(fā)展與胃竇組織中IGF-1的含量升高有關(guān)，通過電針治療后，胃竇組織中IGF-1的含量下降，胃腸運動功能得到改善[8]。Zhang G Q等[20]發(fā)現(xiàn)IGF-1與其受體（IGF-1R）結(jié)合后能夠促進Cajal間質(zhì)細胞發(fā)育所必須的相關(guān)神經(jīng)元和神經(jīng)突觸的生長，推斷胃腸運動功能與IGF-1/IGF-1R信號密切相關(guān)。在另一項Li H等[21]的實驗中也表明，IGF-1信號通路可促進Cajal間質(zhì)細胞的再生，進而改善大鼠的胃腸功能。EGF是最早被確定結(jié)構(gòu)的生長因子，是一種能夠強烈刺激靶細胞增生的有絲分裂原，在胰島β細胞群擴增的過程中發(fā)揮重要作用，促進糖酵解[22]。EGF廣泛存在于消化道內(nèi)，能夠促進胃黏膜的損傷增值修復與分化[23]，在保護胃黏膜免受破壞、維持胃腸道黏膜完整性方面具有重要意義[24]。以往研究表明，胃腸動力障礙的患者，胃液中EGF的水平明顯降低[25]。本研究結(jié)果顯示，DGP模型大鼠胃竇組織中IGF-1的含量明顯升高，EGF的含量明顯降低，經(jīng)電針治療后，胃竇組織中IGF-1的含量明顯降低，EGF的含量顯著升高，表明電針“梁門”等穴可以調(diào)控胃竇組織中IGF-1及EGF的含量，電針組大鼠的癥狀積分、血糖及尿糖值與模型組相比亦具有統(tǒng)計學意義，表明電針可以改善DGP大鼠的癥狀、降低血糖及尿糖值，可能與電針調(diào)控胃竇組織中IGF-1與EGF的含量有關(guān)。而電針組大鼠胃竇組織中IGF-1及EGF的含量與胃復安組比較差異無統(tǒng)計學意義。

綜上所述，電針“梁門”“足三里”“三陰交”穴能夠改善DGP模型大鼠的癥狀，控制血糖及尿糖值，其機制可能與胃竇組織中IGF-1含量下降和EGF含量升高有關(guān)，但這種效應是通過何種信號途徑達到的，還有待進一步研究。

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