李柱梅 韓洛利 朱其叢

本文采用渦旋提取、固相萃取柱凈化、高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)小麥中阿維菌素、噻蟲嗪、除蟲脲、烯酰嗎啉、吡蟲啉、甲維鹽、辛硫磷、滅幼脲、多菌靈、啶蟲脒、氟啶脲等11種農(nóng)藥殘留，準(zhǔn)確度高、可靠性好、重復(fù)性佳，適用于小麥中多種農(nóng)藥殘留檢測(cè)。

一、試驗(yàn)部分

（一）儀器與試劑

1.儀器。Waters Xevo-TQ-S液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀（美國(guó) waters公司）;SilentCrusher M型勻漿機(jī)（德國(guó)Heidolph公司）;Milli-Q Advantage A10超純水機(jī)（美國(guó) Millipore 公司）;UNIVERSAL 320R型離心機(jī)（德國(guó)Hettich公司）。11種農(nóng)藥純度不低于95%。

2.試劑。標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。準(zhǔn)確吸取標(biāo)準(zhǔn)品各800μL于10 mL容量瓶中，根據(jù)各農(nóng)藥的性質(zhì)用甲醇、丙酮等溶劑溶解并定容，制得11種單一標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（80 μg/mL），置于-18 ℃冰箱中密封儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。分別移取一定量的上述標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液于10 mL容量瓶中，用甲醇定容得到濃度為4μg/mL的混合標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，置于-18 ℃冰箱中密封儲(chǔ)存?zhèn)溆谩?/p>

乙腈、甲醇（色譜純，德國(guó)默克公司）、C18粉、N-丙基乙二胺吸附劑（PSA）（色譜純，美國(guó)安捷倫科技有限公司）、氯化鈉、無(wú)水硫酸鎂（分析純，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）。試驗(yàn)用水為超純水。

（二）儀器工作條件

1.色譜條件。色譜柱：Acquity

UPLC BEHRP C18 色譜柱（50 mm×

2.1 mm，1.7μm）;柱溫40 ℃;

流動(dòng)相A相為乙腈， B 相為0.1%甲酸水溶液。線性梯度洗脫程序：0～2 min，10%～30% A;2～8 min，30%～90% A;8～9 min，90%～10% A;保持1 min。流速0.3 mL/min;進(jìn)樣體積 1μL。

2.質(zhì)譜條件。電噴霧離子源（ESI），正離子掃描，離子源溫度150 ℃，脫溶劑氣溫度500 ℃，脫溶劑氣和錐孔氣均為高純N2，脫溶劑氣流速為1000 L/h，錐孔氣流速為40 L/h。采用MRM 多反應(yīng)監(jiān)測(cè)方式檢測(cè)。

（三）試驗(yàn)方法

前處理方法。準(zhǔn)確稱取5.0 g（±0.05 g）新鮮樣品，于50 mL 塑料離心管中，加入 15 mL水浸潤(rùn)30 min，再加入乙腈溶液20 mL勻漿提取1 min，再加入5 g NaCl振蕩3 min，5000 r/min離心5 min。取10 mL上清液至10 mL玻璃離心管中，50 ℃氮?dú)獯抵两?。? mL洗脫液甲醇-二氯甲烷（5：95）溶解殘?jiān)? mL洗脫液活化NH4固相萃取柱，15 mL洗脫液洗脫，收集濾液，于40 ℃下氮吹至近干，用1 mL乙腈-水（1：1）定容，過(guò)0.22μm濾膜待測(cè)。

二、結(jié)果與討論

（一）優(yōu)化前處理方法

提取方式的優(yōu)化。試驗(yàn)考察了加水浸潤(rùn)后提取和不加水直接用乙腈提取兩種提取方式下0.05 mg/kg加標(biāo)水平下的回收率（提取率見(jiàn)表1）。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，加水浸潤(rùn)后提取，對(duì)大部分化合物的提取會(huì)有一定的提高，而且回收率比較穩(wěn)定。因此，為了試驗(yàn)操作簡(jiǎn)便，選擇先加水浸潤(rùn)后提取。

另外，試驗(yàn)考察了加水量的多少對(duì)于回收率的影響。采用樣品量的2倍、2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、5倍數(shù)量的水的體積，考察回收率的變化。結(jié)果表明，隨著水量的增加回收率會(huì)增大，3倍時(shí)回收率最大。若繼續(xù)加大加水體積，對(duì)于大部分化合物的回收率沒(méi)有明顯變化，但如阿維菌素、辛硫磷反倒會(huì)減小。因此，選擇加水3倍即15 mL。

（二）優(yōu)化凈化方法

1.根據(jù)農(nóng)藥性質(zhì)的不同，選用氨基固相萃取柱凈化，分別用甲醇/

二氯甲烷（5：95）和乙腈洗脫;用石墨碳黑氨基柱凈化，甲苯/乙腈（3：8）洗脫;比較2種凈化柱3種洗脫溶劑和QuEChERS凈化包

（PSA 400 mg，C18 400 mg，無(wú)水硫

酸鎂1200 mg）對(duì)11種農(nóng)藥回收率的影響?？疾焯砑訚舛?.05 mg/kg 時(shí)回收率的變化（見(jiàn)表2）。

結(jié)果顯示，用氨基柱凈化時(shí)，甲醇/二氯甲烷洗脫大多數(shù)農(nóng)藥回收率在81.2%～101.7%，是比較理想的;乙腈洗脫時(shí)，多菌靈、啶蟲脒等由于極性弱洗脫效果不佳;石墨碳黑氨基柱凈化時(shí)，11種化合物的回收率都比較高，但是所需洗脫體積太大，增加下一步氮吹時(shí)間，不利于大批量做樣。QuEChERS凈化包凈化時(shí)，可能是由于凈化包中C18粉的緣故，吸附性特別強(qiáng)，致使回收率普遍較低，源于極性較強(qiáng)吸附到PSA上但缺乏足量溶劑的洗脫。因此，本試驗(yàn)選用氨基柱凈化并用甲醇/二氯甲烷（5：95）洗脫。

另外，不同的凈化方法對(duì)小麥空白基質(zhì)的影響也不同。氨基柱凈化，用不同的洗脫劑洗脫對(duì)基質(zhì)沒(méi)有太大的影響;石墨碳黑氨基柱凈化后，基質(zhì)較為干凈，空白基質(zhì)進(jìn)樣后基線噪音明顯要弱很多;QuChERS凈化包凈化后，對(duì)基質(zhì)并沒(méi)有太大改善，反而不如氨基柱干凈，基線噪音要高很多。

2.分別考察10 mL、15 mL、20 mL洗脫溶劑對(duì)回收率的影響。結(jié)果表明，當(dāng)洗脫劑體積為15 mL時(shí)，11種農(nóng)藥的回收率均在80%以上，效果最好故洗脫劑用量取15 mL。

（三）方法的線性范圍與定量限

在空白小麥樣品中分別添加4 μg/mL的3種混標(biāo)溶液25μL、62.5μL、125μL，理論添加濃度為0.02 mg/kg、0.05 mg/kg、0.1 mg/kg，分別設(shè)6 個(gè)平行樣，按本試驗(yàn)方法進(jìn)行樣品處理和測(cè)定，考察精密度。結(jié)果表明，平均回收率為75.8%～97.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）<

10%。

空白樣品經(jīng)上述方法處理后的進(jìn)樣液配制混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，配制濃度為0.000 1 ～1μg/mL。以檢出限響應(yīng)的3～5倍確定化合物的方法定量限（Limit of Quantity，LOQ），并考察定量離子峰面積和濃度之間的線性關(guān)系。

（四）實(shí)際樣品檢測(cè)

抽取5個(gè)小麥樣品檢測(cè)，用本方法和國(guó)標(biāo)GB/T 20770-2008進(jìn)行比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，國(guó)標(biāo)方法顯示陰性，本方法會(huì)有一定量的檢出，但是數(shù)值很小，基本在檢出限附近，故判斷為檢出陰性。

三、結(jié)論

本研究建立了檢測(cè)小麥中11種農(nóng)藥殘留的超高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法，對(duì)提取方式、凈化方法進(jìn)行優(yōu)化，確定加15 mL水浸潤(rùn)后提取，提取率最優(yōu)，氨基固相萃取柱凈化整體回收率最高，洗脫體積為15 mL時(shí)回收率結(jié)果最佳，也比較經(jīng)濟(jì)。另外，又進(jìn)行了方法精密度和重復(fù)性考察，確定方法定量限和線性范圍。本方法快速、高效、準(zhǔn)確度高，可實(shí)現(xiàn)對(duì)小麥基質(zhì)中目標(biāo)化合物的快速準(zhǔn)確篩查分析。