陳鴻英 王燕玲

摘要：目的 建立測(cè)定醋酸阿托西班注射液含量的UPLC法并進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。方法 色譜條件：以0.05mol/L的磷酸鹽緩沖液pH2.3為流動(dòng)相A，乙腈為流動(dòng)相B，梯度洗脫；進(jìn)樣量2μl，流速0.4ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)215nm。結(jié)果：在0.75～2.25μg范圍內(nèi)與主峰面積呈良好的線性關(guān)系（R2=0.9999）；空白溶劑對(duì)該法無(wú)干擾；重復(fù)性RSD為0.1%，中間精密度RSD為0.2%；溶液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)RSD為0.3%；不同加標(biāo)量的平均回收率為100.10%；耐用性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示各條件檢測(cè)結(jié)果RSD在1.0%以內(nèi)；采用HPLC與UPLC對(duì)3批樣品的含量測(cè)定進(jìn)行對(duì)比，兩法相對(duì)偏差均未超過(guò)0.5%。結(jié)論 UPLC法快速、簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)，適用于醋酸阿托西班注射液含量測(cè)定。

關(guān)鍵詞 醋酸阿托西班注射液 UPLC 含量

【中圖分類號(hào)】186.3 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A 【文章編號(hào)】2107-2306（2019）02-135-02

Abstract： Objective Establish the UPLC method for assay of Atosiban Acetate Injection and carry out the methodology validation. Method Chromatographic Conditions： 0.05 mol/L phosphate buffer solution pH 2.3 was used as mobile phase A and acetonitrile was used as mobile phase B to carry out the gradient elution. Injection volume was 2 μl. Flow rate was 0.4 ml/min. Detection wavelength was 215 nm. Results： There was a good linear relationship with the area of the principal peak within the range of 0.75～2.25 μg （R2=0.9999）. The blank solvent had no interference with this method. The RSD of repeatability was 0.1%， the RSD of the intermediate precision was 0.2%， and RSD of the solution stability test was 0.3%. The average recovery rate of different spike quantities was 100.10%. The robustness results revealed that the RSD of the test results under different conditions was within 1.0%. HPLC and UPLC were adopted to compare the assay of 3 batches of sample， and the relative deviations of the two methods were both not more than 0.5%. Conclusions UPLC method was rapid， simple and convenient， accurate and had strong specificity， and it was suitable for assay of Atosiban Acetate Injection.

Key Words；Atosiban Acetate Injection ；UPLC； Content

引言

醋酸阿托西班是催產(chǎn)素拮抗劑，代表一種新的抗分娩藥【1】。醋酸阿托西班注射液能有效抑制宮縮，無(wú)明顯副作用，是治療先兆早產(chǎn)有效而安全的方法。【2】目前國(guó)內(nèi)采用HPLC測(cè)定其含量和有關(guān)物質(zhì)，其方法檢測(cè)時(shí)間長(zhǎng)，化學(xué)試劑用量大，本文參照HPLC含量測(cè)定方法建立其含量UPLC測(cè)定法。

1 材料

【樣品與對(duì)照品】醋酸阿托西班注射液（20180602、20180603、20180701），工作對(duì)照品（S01820171101）海南中和藥業(yè)股份有限公司制。

【主要試劑及儀器】CQUITY UPLC H-Class型超高效液相色譜儀，ACQ TUV 紫外檢測(cè)器；waters C18 2.1 x 50 mm，1.7um色譜柱；磷酸二氫鉀（廣州化學(xué)試劑廠 AR）、磷酸（成都市科隆化學(xué)品有限公司2017060501、AR）、三乙胺（西隴化工股份有限公司110722、AR）、乙腈（上海星要可高純?nèi)軇┯邢薰?11471201、色譜純）

【色譜條件】以0.05mol/L的磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鉀6.8g，加水1000ml，用磷酸調(diào)pH至2.3，再加入120μl三乙胺，即得）為流動(dòng)相A，乙腈為流動(dòng)相B，線性梯度洗脫；流速為0.4ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為215nm。同時(shí)精密稱取醋酸阿托西班對(duì)照品和雜質(zhì)A對(duì)照品適量，加流動(dòng)相A溶解并制成每1ml分別含醋酸阿托西班和雜質(zhì)A約0.5mg的混合溶液，作為系統(tǒng)適應(yīng)性溶液；精密量取2μl注入液相色譜儀。阿托西班峰與雜質(zhì)A峰的分離度應(yīng)不少于2.0，理論塔板數(shù)按阿托西班峰計(jì)算應(yīng)不低于5000。

2 方法與結(jié)果

【系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn)】稱取醋酸阿托西班對(duì)照品和雜質(zhì)A對(duì)照品適量，加流動(dòng)相A溶解并制成每1ml中分別含醋酸阿托西班和雜質(zhì)A約0.5mg的混合溶液，作為系統(tǒng)適應(yīng)性溶液。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示分離度為3.1，理論塔板數(shù)為16885。

【專屬性】配制空白溶劑、空白輔料溶液、對(duì)照品溶液與供試品溶液，進(jìn)行輔料干擾分析。結(jié)果顯示，空白溶劑與空白輔料在該條件下無(wú)吸收峰，對(duì)本法無(wú)干擾，方法專屬性良好。

【重復(fù)性、中間精密度試驗(yàn)】結(jié)果顯示重復(fù)性RSD值為0.1%，中間精密度RSD值為0.2%。

【線性實(shí)驗(yàn)】制備含量為0.75mg/ml 的對(duì)照品溶液，分別精密量取0、1、1.5、2、2.5、3μl進(jìn)樣，以主峰峰面積A為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣體積（μl）為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為Y=1949417x-160684，相關(guān)系數(shù)為R2=0.999，表明，在進(jìn)樣量為0.75～2.25μg范圍內(nèi)與主峰面積呈良好的線性關(guān)系。

【準(zhǔn)確度試驗(yàn)】在空白輔料中加入對(duì)照品制成加標(biāo)對(duì)照品約為0.6mg/ml、0.75mg/ml、0.9mg/ml的溶液各三份，計(jì)算回收率?；厥章史謩e為99.92%、100.53%、99.86%，平均回收率為100.10%，表明方法準(zhǔn)確度高。

【溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)】取供試品溶液，于第0、2、4、8、12小時(shí)進(jìn)樣，進(jìn)樣5次，計(jì)算峰積RSD值。結(jié)果顯示RSD為0.3%，表明樣品溶解后在12小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。

【耐用性試驗(yàn)】結(jié)果顯示RSD均在1.0%以內(nèi)，表明當(dāng)色譜柱、流速、柱溫等條件發(fā)生微小變化時(shí)對(duì)含量測(cè)定結(jié)果無(wú)影響。

【UPLC法與HPLC法對(duì)比試驗(yàn)】結(jié)果表明，相對(duì)偏差均未超過(guò)0.5%，該方法與HPLC法的測(cè)定結(jié)果一致性良好。

3 討論

UPLC分析方法是一種高效、快捷的檢測(cè)方法，比HPLC法在檢測(cè)時(shí)間上節(jié)省80%，檢出能力與HPLC法一致。方法驗(yàn)證結(jié)果表明，該法是一種準(zhǔn)確、可靠的測(cè)定方法。

參與文獻(xiàn)

[1]姚志勇，李新宇，支欽.醋酸阿托西班注射液的處方工藝開發(fā)[J]. 中國(guó)當(dāng)代醫(yī)藥， 2014（28）.

[2]朱國(guó)棟.阿托西班及彌新平用于早產(chǎn)兒的治療.世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘婦產(chǎn)科學(xué)分冊(cè)，2006 ，（ 2）： 58.