范國權(quán)，白艷菊，高艷玲，張 威，張 抒，申 宇，邱彩玲，胡林雙，孫 妍，喻 江

（1.黑龍江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院植物脫毒苗木研究所，黑龍江 哈爾濱 150086；

2.農(nóng)業(yè)農(nóng)村部工程建設(shè)服務(wù)中心，北京 100000；3.哈爾濱商業(yè)大學(xué)，黑龍江 哈爾濱 150028）

馬鈴薯是一種營養(yǎng)體無性繁殖植物，植株和塊莖都易感病，侵染馬鈴薯的病蟲害有幾十種，主要包括真菌、細(xì)菌、病毒、類病毒、甲蟲、線蟲等。這些病蟲害可以隨種薯傳播，其中，細(xì)菌、病毒和類病毒病害還可以通過種苗傳播，造成病害大面積擴(kuò)散，嚴(yán)重影響馬鈴薯的產(chǎn)量和質(zhì)量。病蟲害一般可造成馬鈴薯減產(chǎn)10%～30%，嚴(yán)重情況下減產(chǎn)可達(dá)70%以上，是影響馬鈴薯產(chǎn)業(yè)發(fā)展的瓶頸之一。因此，在馬鈴薯生產(chǎn)中病蟲害檢測工作極為重要，及時(shí)發(fā)現(xiàn)并確認(rèn)病蟲害，有利于其有效防控，可以防止大面積擴(kuò)散，降低產(chǎn)量和質(zhì)量損失。

現(xiàn)有28個(gè)病蟲害檢測標(biāo)準(zhǔn)，其中涉及馬鈴薯細(xì)菌檢測標(biāo)準(zhǔn)4個(gè)，病毒檢測標(biāo)準(zhǔn)10個(gè)，類病毒檢測標(biāo)準(zhǔn)4個(gè)，真菌檢測標(biāo)準(zhǔn)7個(gè)，甲蟲檢測標(biāo)準(zhǔn)1個(gè)和線蟲檢測標(biāo)準(zhǔn)2個(gè)。從檢測病蟲害種類看，可檢測病蟲害包括細(xì)菌性病害青枯病[Ralstonia solanacearum（Smith）] 和 環(huán) 腐 ?。–lavibacter michiganensis subsp.sepedonicus）；病毒病有馬鈴薯卷葉病毒（Potato leaf roll virus，PLRV）、馬鈴薯Y 病毒（Potato virus Y，PVY）、馬鈴薯X 病毒（Potato virus X，PVX）、馬鈴薯A 病毒（Potato virus A，PVA）、馬鈴薯M 病毒（Potato virus M，PVM）、馬鈴薯S 病毒（Potato virus S，PVS）、馬鈴薯V 病毒（Potato virus V，PVV）、馬鈴薯帚頂病毒（Potato mop-top virus，PMTV）和馬鈴薯黃化矮縮病毒（Potato yellow dwarf virus，PYDV）；類病毒有馬鈴薯紡錘塊莖類病毒（Potato spindle tuber viroid，PSTVd）；真菌病害包括馬鈴薯銀屑病（Helminthosporium solani Durieu et Mont.）、馬鈴薯黑粉病[Thecaphora solani（Thirumalachar & O.Brien）Mordue]、馬 鈴 薯 壞 疽 ?。≒homa exigua var.foveata）、 馬 鈴 薯 緋 腐 ?。≒hytophthora erythroseptica Pethybridge）、馬鈴薯炭疽病[Colletotrichum coccodes（Wallr.）Hughes]、 馬 鈴 薯 皮 斑 病[Polyscytalum pustulans（M. N. Owen et Wakef.）M. B. Ellis]和馬鈴薯 癌 腫 病[Synchytrium endobiticum（Schilberszky）Percival]； 馬 鈴 薯 甲 蟲（Colorado potato beetle）[Leptinotarsa decemlineata（Say）]；線蟲包括馬鈴薯白線蟲（White potato cyst nematode）[Globodera pallida（Stone）Behrens]和馬鈴薯金線蟲（Golden potato cyst nematode）[Globodera rostochiensis（Wollenweber）Behrens]，總計(jì)22種病蟲害。

1 馬鈴薯病害檢測技術(shù)及特點(diǎn)

目前，馬鈴薯病害檢測最常用的技術(shù)有生物學(xué)檢 測 法（Biology detection）、 電 鏡 檢 測 技 術(shù)（Technology of electron microscopy）、血清學(xué)方法（Serological detection assay）和分子生物學(xué)檢測法。

1.1 生物學(xué)檢測法

生物學(xué)檢測法是最直觀的一種檢測技術(shù)，屬于最基本的檢查方法，根據(jù)植物發(fā)病癥狀進(jìn)行病害診斷，適用于所有類型的病害。傳統(tǒng)生物學(xué)檢測技術(shù)檢測馬鈴薯病毒病直觀、容易操作、價(jià)錢便宜，除檢測病毒外，還可以在形態(tài)學(xué)上提供病毒毒理指標(biāo)[1]（表1）。但是，生物學(xué)檢測技術(shù)鑒定周期長，需要特定的指示植物，同時(shí)需要嚴(yán)格控制環(huán)境條件，現(xiàn)已不能適應(yīng)生產(chǎn)上快速檢測的需要。

1.2 電子顯微鏡檢測

電子顯微鏡特有的高分辨率特性，在馬鈴薯病害檢測、超微結(jié)構(gòu)及形態(tài)觀察中發(fā)揮了重要作用。目前常用的有透射電子顯微鏡、掃描電子顯微鏡、環(huán)境掃描電子顯微鏡、掃描隧道顯微鏡及原子力顯微鏡等新型電鏡。電子顯微鏡可以清晰地看到微小的病毒粒體，病原微生物侵染植物的過程，還可以直接觀察到細(xì)胞結(jié)構(gòu)和細(xì)胞器被破壞的過程。

1.3 血清學(xué)檢測方法

血清學(xué)方法是病毒診斷和鑒定的基礎(chǔ)方法，用于植物病毒檢測的血清學(xué)方法主要包括酶聯(lián)免疫吸附法、斑點(diǎn)免疫結(jié)合測定法、免疫擴(kuò)散、免疫電泳、熒光免疫等。目前，應(yīng)用最為廣泛的是酶聯(lián)免疫吸附法、斑點(diǎn)免疫結(jié)合測定法、免疫膠體金技術(shù)。在馬鈴薯病害檢測中，最常用的是雙抗體夾心法（Double antibody sandwich enzyme-link immunoassay，DAS-ELISA）。

1.4 分子生物學(xué)檢測方法

馬鈴薯病蟲害檢測常用的分子生物學(xué)方法有聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（Polymerase chain reaction，PCR）、反轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈鎖反應(yīng)（Reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）方法、實(shí)時(shí)定量PCR（Quantitative real-time polymerase chain reaction，qPCR）方法和實(shí)時(shí)定量RT-PCR（Quantitative real-time reverse transcription-polymerase chain reaction，qRT-PCR）方法、核酸雜交檢測技術(shù)（Nucleic acid spot hybridization， NASH）和免疫熒光檢測技術(shù)（Immunofluorescence，IF）等。分子生物學(xué)方法對于常規(guī)方法研究較困難的植物病毒、類病毒，以及專性寄生病原菌的檢測，顯示了較強(qiáng)的優(yōu)越性，技術(shù)靈敏度高，操作簡便。其中，核酸雜交檢測技術(shù)是目前馬鈴薯類病毒檢測主要采用的技術(shù)，而免疫熒光檢測技術(shù)在馬鈴薯細(xì)菌性病害檢測中廣泛應(yīng)用。

表1 馬鈴薯病毒的鑒別寄主及癥狀Table 1 Host plants and symptoms of potato viruses

2 28個(gè)病害檢測技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)

2.1 馬鈴薯類病毒檢測標(biāo)準(zhǔn)

涉及馬鈴薯類病毒檢測技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)共有5 項(xiàng)（表2）。《馬鈴薯紡錘塊莖類病毒檢疫鑒定方法》（GB/T 31790-2015）[2]和《馬鈴薯紡錘塊莖類病毒檢疫鑒定方法》（SN/T 3437-2012）[3]均由全國植物檢疫標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會提出。馬鈴薯類病毒作為國家檢疫性病害，2 個(gè)標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的檢測方法包括生物學(xué)方法、往復(fù)聚丙烯酰胺凝膠電泳法（Return-polyacrylamide gel electrophoresis，R-PAGE）、

RT-PCR方法和qRT-PCR方法。標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定生物學(xué)癥狀明顯的樣品，通過標(biāo)準(zhǔn)中一種方法檢測為陽性，即可判斷為樣品攜帶PSTVd，如果未發(fā)現(xiàn)生物學(xué)癥狀，則需要通過不同原理的2 種方法進(jìn)行檢測，均為陽性的樣品，判定樣品攜帶PSTVd。從檢疫角度出發(fā)，標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的結(jié)果判定方法符合國際檢疫性病害判定方法，結(jié)果嚴(yán)謹(jǐn)準(zhǔn)確。

表2 馬鈴薯類病毒檢測標(biāo)準(zhǔn)Table 2 Detection standard of potato spindle tuber viroid

《馬鈴薯紡錘塊莖類病毒檢測》（NY/T 1962-2010）[4]和《脫毒馬鈴薯種薯（苗）病毒檢測技術(shù)規(guī)程》（NY/T 401-2000）[5]中規(guī)定了采用R-PAGE 和RT-PCR方法進(jìn)行檢測的具體流程，結(jié)果規(guī)定其中一種方法檢測結(jié)果為陽性則樣品中含有PSTVd?！恶R鈴薯紡錘塊莖類病毒檢測核酸斑點(diǎn)雜交法》（NY/T 2744-2015）[6]，采用核酸探針的方法進(jìn)行檢測，結(jié)果出現(xiàn)藍(lán)紫色斑點(diǎn)的樣品為陽性樣品。

由于類病毒沒有蛋白外殼，因此在RT-PCR檢測過程中，實(shí)驗(yàn)環(huán)境要多通風(fēng)、設(shè)備紫外殺菌處理，防止檢測中受到氣溶膠的污染，造成假陽性。NASH 和R-PAGE 不受氣溶膠影響，但R-PAGE 檢測靈敏度較低，NASH 檢測靈敏度與RT-PCR 相似，NASH方法操作簡單，結(jié)果準(zhǔn)確，對核酸要求不高，并在田間可以直接取汁液至檢測的硝酸纖維素膜上，不需要將樣品帶回實(shí)驗(yàn)室，一次性檢測樣品多，適合大面積推廣應(yīng)用。因此，在實(shí)際的類病毒檢測過程中，根據(jù)實(shí)驗(yàn)室的實(shí)際條件，選擇適合的檢測方法。條件符合的實(shí)驗(yàn)室最好選用NASH或RT-PCR方法檢測。如果實(shí)驗(yàn)室條件有限，大田樣品檢測時(shí)可以使用R-PAGE 方法，但由于易受R-PAGE檢測靈敏度的限制，可能出現(xiàn)漏檢的情況。

2.2 馬鈴薯細(xì)菌病害檢測標(biāo)準(zhǔn)

目前，馬鈴薯細(xì)菌性病害檢測標(biāo)準(zhǔn)中，涉及環(huán)腐病標(biāo)準(zhǔn)有1個(gè)國家標(biāo)準(zhǔn)和1個(gè)檢疫標(biāo)準(zhǔn)，青枯病有1個(gè)檢疫標(biāo)準(zhǔn)。此外，在產(chǎn)地檢疫標(biāo)準(zhǔn)中同時(shí)規(guī)定了青枯病和環(huán)腐病的檢測方法（表3）。

《馬鈴薯環(huán)腐病菌檢疫鑒定方法》（GB/T 28978-2012）[7]和《馬鈴薯環(huán)腐病菌檢疫鑒定方法》（SN/T 1135.5-2007）[8]均由檢疫部門提出申請完成，其中2007 版行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定檢測方法為血清學(xué)和PCR 方法，結(jié)果需要2 種方法檢測結(jié)果均呈陽性，才能判定樣品含有環(huán)腐病。但是，目前用于血清學(xué)檢測試劑不易購買，因此該標(biāo)準(zhǔn)只能采用PCR一種方法進(jìn)行檢測。

表3 馬鈴薯細(xì)菌病害檢測標(biāo)準(zhǔn)Table 3 Detection standard of potato bacterium disease

《馬鈴薯環(huán)腐病菌檢疫鑒定方法》（GB/T 28978-2012）中規(guī)定了生物學(xué)檢測、Biolog 鑒定、DAS-ELISA檢測、PCR檢測和致病性測定的方法，結(jié)果判定依據(jù)Biolog檢測、DAS-ELISA檢測或分子生物學(xué)檢測（PCR方法或qPCR方法）結(jié)果，其中基于2種不同原理的方法檢測結(jié)果呈陽性、且致病性測定為陽性時(shí)，判定為馬鈴薯環(huán)腐病菌。當(dāng)DAS-ELISA 檢測或分子生物學(xué)檢測（PCR 方法或qPCR方法）初篩檢測結(jié)果為陰性，或其中只有一種檢測方法的結(jié)果為陽性時(shí)，判定為非馬鈴薯環(huán)腐病菌。該標(biāo)準(zhǔn)中的方法不僅需要實(shí)驗(yàn)室檢測鑒定，還需要致病性鑒定，結(jié)果判定科學(xué)合理，嚴(yán)謹(jǐn)準(zhǔn)確，符合檢疫性病害國家判定方法，但該標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的方法實(shí)驗(yàn)周期較長，多數(shù)實(shí)驗(yàn)室不能滿足要求。《馬鈴薯種薯產(chǎn)地檢疫規(guī)程》（GB 7331-2003）[9]中規(guī)定可以使用革蘭氏染色的方法鑒定馬鈴薯環(huán)腐病菌。若結(jié)果通過染色、顯微鏡觀察，成藍(lán)紫色的單個(gè)或2～4個(gè)聚集的短桿狀菌體為革蘭氏陽性菌，為環(huán)腐病菌，染成粉紅色的即可排除環(huán)腐病菌，判定為革蘭氏陰性反應(yīng)，該方法容易操作、實(shí)驗(yàn)條件容易達(dá)到要求，但檢測靈敏度較低，同時(shí)，該標(biāo)準(zhǔn)也規(guī)定了硝酸纖維素膜酶聯(lián)免疫吸附測定法（Nitro cellulose-membrane-enzyme linked emmusorbent assay，NCM-ELISA）的檢測方法。

《馬鈴薯青枯病菌檢疫鑒定方法》（SN/T 1135.9-2010）[10]規(guī)定了生理生化反應(yīng)測定的結(jié)果可通過生物型區(qū)分、選擇性培養(yǎng)基、血清學(xué)、PCR和qPCR方法進(jìn)行判定，結(jié)果判定為血清學(xué)或PCR檢測為陽性，即判定樣品含有青枯病菌。

環(huán)腐病在中國部分區(qū)域時(shí)有發(fā)生，現(xiàn)行的3個(gè)標(biāo)準(zhǔn)中涉及的檢測方法，建議選擇靈敏度較高的PCR方法進(jìn)行檢測，如果實(shí)驗(yàn)條件不能滿足可以選擇革蘭氏進(jìn)行初篩，檢出陽性后再運(yùn)用不同原理方法進(jìn)行檢測，保證結(jié)果準(zhǔn)確。在青枯病檢測上，血清檢測試劑盒市場上不容易購買，同時(shí)考慮到靈敏度等因素，建議采用PCR 方法進(jìn)行檢測和判定結(jié)果。目前，對產(chǎn)業(yè)影響較大的馬鈴薯黑脛病還沒有標(biāo)準(zhǔn)支持檢測工作，急需制定完善。

2.3 馬鈴薯病毒病檢測標(biāo)準(zhǔn)

馬鈴薯病毒檢測技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)涉及9種病毒，共10個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（表4）?！睹摱抉R鈴薯種薯（苗）病毒檢測技術(shù)規(guī) 程》（NY/T 401-2000）中 規(guī) 定 了PVY、PVA、PVX、PVM、PVS和PLRV 6種病毒的血清學(xué)檢測方法，結(jié)果判定為（檢測樣品OD405）/（陰性對照OD405）≥2時(shí)，樣品為陽性。該方法適用于大田樣品檢測。具有一次性檢測樣品量大、操作簡單、實(shí)驗(yàn)條件要求低等特點(diǎn)，但在試管苗檢測時(shí)，由于DAS-ELISA 檢測靈敏度和試管苗本身濃度低的原因，可能會出現(xiàn)漏檢。

表4 馬鈴薯病毒病檢測標(biāo)準(zhǔn)Table 4 Detection standard of potato viruses

由于PVA是檢疫性病害，檢疫部門制定了《馬鈴薯A病毒檢疫鑒定方法》（SN/T 1135.7-2009）[11]和《馬鈴薯A病毒檢疫鑒定方法納米顆粒增敏膠體金免疫層析法》（GB/T 28974-2012）[12]。其中檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定了生物學(xué)、DAS-ELISA和RT-PCR檢測方法，并且規(guī)定當(dāng)DAS-ELISA檢測結(jié)果為陽性時(shí)，需要生物學(xué)或是RT-PCR 檢測結(jié)果亦為陽性的樣品，才能判定為含有PVA病毒。國際標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定采用免疫膠體金的方法進(jìn)行檢測，在結(jié)果判定上同樣需要生物學(xué)或是RT-PCR檢測結(jié)果亦為陽性的樣品，才能判定樣品中含有PVA病毒。

《馬鈴薯卷葉病毒檢疫鑒定方法》（SN/T 2627-2010）[13]和《馬鈴薯M病毒檢疫鑒定方法》（SN/T 1135.12-2015）[14]規(guī)定DAS-ELISA和RT-PCR檢測方法。其中，有一種方法檢測結(jié)果為陽性即可判定為樣品含有卷葉病毒；若結(jié)果均為陰性，樣品中不含PVM，DAS-ELISA 檢測為陽性或疑似陽性的樣品，需經(jīng)RT-PCR檢測為陽性，且測序結(jié)果為目的片段的樣品判定為含有PVM病毒。

《馬鈴薯Y 病毒檢疫鑒定方法》（SN/T 1135.13-2015）[15]規(guī)定DAS-ELISA、膠體金免疫層析法、RT-PCR檢測方法、qRT-PCR、免疫電鏡和生物學(xué)方法。結(jié)果中無可疑癥狀的樣品，通過血清學(xué)或分子生物學(xué)任意一項(xiàng)檢測結(jié)果為陰性，則判斷樣品不帶PVY；若有可疑樣品，通過血清學(xué)或分子生物學(xué)方法任意2項(xiàng)檢測結(jié)果為陰性時(shí)，則判定樣品中不帶PVY。免疫學(xué)原理的一種，分子生物學(xué)原理的一種和免疫電鏡，任意2 種方法檢測為陽性的，則樣品含有PVY。免疫學(xué)原理的一種或分子生物學(xué)原理任意一種檢測結(jié)果為陽性，并通過生物學(xué)檢測表現(xiàn)為葉脈壞死的陽性樣品，則判斷含有PVYN株系。該標(biāo)準(zhǔn)中檢測方法比較全面，但結(jié)果判定較為繁瑣，通常情況下非檢疫性病害，應(yīng)用除生物學(xué)方法外的一種檢測技術(shù)即可判定結(jié)果。

《馬鈴薯6 種病毒的檢測RT-PCR 法》（NY/T 2678-2015）[16]規(guī)定了PVY、PVA、PVX、PVM、PVS和PLRV 6種病毒單重和多重檢測程序，該標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用通用反應(yīng)程序，檢測病毒種類時(shí)僅需要調(diào)整引物和水的體積即可，簡單方便，通量大，靈敏度高，適合檢測試管苗和薯塊樣品。電泳檢測結(jié)果中若出現(xiàn)目的片段，即可判定為陽性樣品。

《馬鈴薯黃化矮縮病毒檢疫鑒定方法》（SN/T 1135.2-2003）[17]規(guī)定了關(guān)于生物學(xué)、血清學(xué)和電鏡的檢測方法，檢測結(jié)果中若植株或薯塊具有典型癥狀、病毒粒子典型形態(tài)、血清學(xué)檢測為陽性和生物測定鑒別寄主典型癥狀的樣品，判定樣品含有馬鈴薯黃化矮縮病毒。該標(biāo)準(zhǔn)在結(jié)果判定上要求較為嚴(yán)格，一般實(shí)驗(yàn)室很難同時(shí)滿足條件，因此在實(shí)際檢測操作中一般可以采用血清學(xué)方法檢測判定結(jié)果，如需確定則需送檢疫部門測定。

《馬鈴薯帚頂病毒檢疫鑒定方法》（SN/T 1135.3-2003）[18]規(guī)定了生物學(xué)、血清學(xué)、電子顯微鏡技術(shù)和分子生物學(xué)的相關(guān)方法，結(jié)果判定為薯塊和病株樣品癥狀具有典型病害癥狀，血清學(xué)檢測和RT-PCR檢測結(jié)果均為陽性，且生物學(xué)檢測鑒別寄主產(chǎn)生典型癥狀的樣品，即可以判定含有馬鈴薯帚頂病毒。

《馬鈴薯V 病毒檢疫鑒定方法》（GB/T 31806-2015）[19]規(guī)定了DAS-ELISA 方法、RT-PCR、qRT-PCR和生物學(xué)檢測方法，結(jié)果判定除生物學(xué)方法外，檢測的樣品呈陰性時(shí)則樣品中不含PVV 病毒，樣品經(jīng)DAS-ELISA檢測為陽性，分子生物學(xué)檢測也為陽性的樣品即可以判定為樣品含PVV病毒。

馬鈴薯病毒檢測標(biāo)準(zhǔn)中均涉及血清學(xué)方法，目前該方法已得到廣泛推廣，具有操作簡單，檢測通量大等特點(diǎn)。因此，建議在實(shí)際檢測工作中，大田樣品采用靈敏度、特異性較好的DAS-ELISA方法檢測。而分子生物學(xué)方法具有一次性檢測病害種類多、靈敏度高的特點(diǎn)，適合檢測試管苗樣品和塊莖樣品，以及驗(yàn)證DAS-ELISA檢測的臨界值樣品。檢測試管苗樣品時(shí)如果出現(xiàn)臨界值樣品時(shí)，需要啟動RT-PCR驗(yàn)證。免疫膠體金檢測方法適合大田樣品現(xiàn)場檢測，但試紙條價(jià)格較高，目前不能實(shí)現(xiàn)大面積應(yīng)用。電鏡檢測法實(shí)驗(yàn)室大多不具備設(shè)備條件，而且在檢測時(shí)極容易漏檢。生物學(xué)方法則檢測周期長，需要溫室等隔離條件，實(shí)際操作性不強(qiáng)。因此，建議在日常檢測工作中可以采用DAS-ELISA和RT-PCR檢測方法，判定檢測結(jié)果。

2.4 真菌性病害檢測標(biāo)準(zhǔn)

7種真菌性病害的檢測標(biāo)準(zhǔn)均為檢疫部門提出（表5），其中，銀屑病、黑粉病、壞疽病、皮斑病和癌腫病均為檢疫性病害，對產(chǎn)業(yè)危害較重。

《馬鈴薯銀屑病菌檢疫鑒定方法》（GB/T 28093-2011）[20]、《馬鈴薯黑粉病菌檢疫鑒定方法》（SN/T 1135.4-2006）[21]、《馬鈴薯壞疽病菌檢疫鑒定方法》（SN/T 1135.8-2009）[22]和《馬鈴薯緋腐病菌檢疫鑒定方法》（SN/T 1135.6-2008）[23]均規(guī)定采用生物學(xué)方法檢測，若樣品具有典型的病害癥狀、病原菌形態(tài)和培養(yǎng)特征，則判定為陽性樣品?！恶R鈴薯炭疽病菌檢疫鑒定方法》（SN/T 2729-2010）[24]和《馬鈴薯皮斑病菌檢疫鑒定方法》（SN/T 1135.11-2013）[25]除規(guī)定采用生物學(xué)方法檢測外，還規(guī)定了PCR 和測序方法，其中，SN/T 2729-2010結(jié)果判定規(guī)定若樣品具有典型的病害癥狀、病原菌形態(tài)和培養(yǎng)特征，或培養(yǎng)后獲得的樣品經(jīng)過PCR檢測，可以得到目的片段的樣品均為馬鈴薯炭疽病菌陽性樣品。而SN/T 1135.11-2013 規(guī)定樣品具有典型的病原菌形態(tài)特征，并經(jīng)過PCR檢測或測序檢測為馬鈴薯皮斑病陽性的樣品?！恶R鈴薯癌腫病檢疫鑒定方法》（SN/T 1135.1-2002）[26]和《馬鈴薯種薯產(chǎn)地檢疫規(guī)程》（GB 7331-2003）[27]都規(guī)定了采用鏡檢的方式進(jìn)行檢測，檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)中還規(guī)定了病害引起的生物學(xué)癥狀判定方法。

表5 馬鈴薯真菌性病害檢測標(biāo)準(zhǔn)Table 5 Detection standard of potato fungal diseases

表6 馬鈴薯甲蟲檢測標(biāo)準(zhǔn)Table 6 Detection standard of colorado potato beetle

表7 馬鈴薯線蟲檢測標(biāo)準(zhǔn)Table 7 Detection standard of potato nematodes

馬鈴薯真菌病害相對容易識別，發(fā)病癥狀典型，所以檢測中多以典型的病害癥狀及真菌的生物學(xué)特征進(jìn)行檢測和結(jié)果判定，在特殊條件下，有些病害也可能潛隱在樣品中，不容易直接目測判斷，造成漏檢，因此也需要進(jìn)一步完善PCR檢測技術(shù)，補(bǔ)充生物學(xué)檢測的不足。同時(shí)，一些常見的真菌病害，如晚疫病、早疫病、黑痣病、枯萎病和粉痂病等病害，通常也是應(yīng)用生物學(xué)方法鑒定，但在檢測工作中還缺少相應(yīng)的檢測標(biāo)準(zhǔn)支持，有待補(bǔ)充完善。

2.5 馬鈴薯甲蟲檢測標(biāo)準(zhǔn)

馬鈴薯甲蟲具有顯著的形態(tài)特征，在標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定了甲蟲不同時(shí)期的形態(tài)及特征，可以據(jù)此進(jìn)行判定檢測結(jié)果（表6）。馬鈴薯甲蟲個(gè)體比較大，較容易識別，因此，該標(biāo)準(zhǔn)可行性較高。

2.6 馬鈴薯線蟲檢測

目前，馬鈴薯線蟲檢測只有針對白線蟲和金線蟲2 個(gè)檢疫行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)（表7）。標(biāo)準(zhǔn)中均詳細(xì)規(guī)定了線蟲的形態(tài)特征，并據(jù)此判定檢測結(jié)果。但線蟲個(gè)體小，檢測時(shí)需要專業(yè)的技術(shù)人員，檢測標(biāo)準(zhǔn)推行難度較大。

3 討 論

綜上所述，目前中國針對常見馬鈴薯病毒、類病毒、真菌性病害、細(xì)菌性病害、馬鈴薯線蟲病害已建立較為系統(tǒng)健全的檢測標(biāo)準(zhǔn)體系，基本可以滿足馬鈴薯檢測的需求。但隨著馬鈴薯產(chǎn)業(yè)的不斷發(fā)展和在實(shí)踐過程中一些檢測機(jī)構(gòu)現(xiàn)有條件的制約，馬鈴薯檢測技術(shù)的應(yīng)用仍存在一些亟待解決的問題。

（1）近年來逐漸發(fā)現(xiàn)一些新的危害產(chǎn)業(yè)發(fā)展的病害，主要包括病毒病和細(xì)菌性病害，現(xiàn)有的檢測標(biāo)準(zhǔn)未能涉及。

（2）馬鈴薯真菌性病害和馬鈴薯線蟲病害檢測標(biāo)準(zhǔn)多采用生物學(xué)檢測方法，方法較為單一，不全面。

（3）馬鈴薯線蟲生物學(xué)鑒定需要專業(yè)技術(shù)人員，鑒定難度較大，檢測效率低，可行性差。

因此，應(yīng)根據(jù)馬鈴薯產(chǎn)業(yè)發(fā)展的需要不斷完善檢測標(biāo)準(zhǔn)，規(guī)范檢測流程，提高檢測效率，培養(yǎng)更專業(yè)、技術(shù)更全面的檢測人才，真正為馬鈴薯產(chǎn)業(yè)的發(fā)展服務(wù)。