陳小露，陳百瑩，王 玫，李 靜，鄒玉璟，戎 俊，鄧澤元,*

（1.南昌大學 食品科學與技術國家重點實驗室，江西 南昌 330047；2.國家油茶產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心，江西 贛州 341001；3.南昌大學生命科學研究院流域生態(tài)學研究所，南昌大學生命科學學院，江西 南昌 330031）

油茶在中國栽培歷史悠久，超過兩千年，是生長在亞熱帶濕潤氣候地區(qū)和污染較少南方丘陵地區(qū)的木本油料作物。種植面積廣泛，以湖南、江西兩省產(chǎn)量最多[1]。油茶籽富含VD、VE、胡蘿卜素、磷脂、角鯊烯等活性物質(zhì)[2]。油茶籽餅粕中含有豐富的茶皂素[3]。

山茶油含有豐富的不飽和脂肪酸，主要是油酸和亞油酸[4]。油酸是一種對人體非常有益的脂肪酸，具有預防心血管疾病[5]、降低膽固醇[6]和抑制腫瘤[7]的作用。角鯊烯常溫下為無色油狀液體，是一種具有特殊功效的生物活性物質(zhì)，能與體內(nèi)的氧密切結(jié)合，物化為血氧，供給生命之需，據(jù)研究角鯊烯具有抗衰老、抗三高、抗癌癥等功能[8]。目前，角鯊烯的主要來源是深海鯊魚肝油，由于它很容易被皮膚吸收的特點，廣泛用于化妝品和保健食品領域[9]。生育酚具有良好的油溶性和熱穩(wěn)定性，是天然的油脂抗氧化劑[10]。油茶籽油中的生育酚以α-生育酚、β-生育酚、γ-生育酚形式存在，其中α-生育酚含量最多，占90%以上[11]。茶皂素又稱茶皂苷，主要來源于山茶科植物[12]。是一種天然的非離子型表面活性劑，具有乳化、發(fā)泡、潤濕等功能。能夠加工成許多種類附加產(chǎn)品[13]。據(jù)研究，茶皂素還具有抗菌、抗病毒、抗氧化、防癌、降血脂等多種功能[14]。

我國是植物油消費大國，年消費量超過3 000萬 t，但是其中70%依賴進口[15]。大力發(fā)展適合山地種植的木本油料作物，可以充分利用山地資源，提高植物油自給率。目前，限制油茶產(chǎn)業(yè)發(fā)展的核心問題是，缺少高產(chǎn)且適應優(yōu)良的品種，病蟲害嚴重，平均畝產(chǎn)低[16]。野生油茶是栽培油茶的近緣種，作物的野生近緣種對于作物的遺傳育種具有寶貴的價值，與作物相比野生近緣種更多地具有抗病、抗蟲、抗逆性基因，從而更適應嚴酷生境[17]。目前，油茶種植資源的采集、研究主要針對栽培品種，對野生油茶的關注不夠，嚴重限制了對其遺傳多樣性的有效利用[18]。我國的油茶籽油具有極高的食用價值，種植時在品種選擇上要考慮地區(qū)、氣候等多個因素，這決定著產(chǎn)量的高低。油茶主要分為普通油茶、大小果油茶、攸縣油茶、紅花油茶、小黃花茶等主要品種，其中普通油茶的出油率為最高[19]。野生油茶具有抗性強、耐干旱、適應性強、對環(huán)境要求低、能耐干瘠、繁殖容易的特點，探討其分布和營養(yǎng)物質(zhì)含量對遺傳育種、引種馴化具有積極意義[20]。本實驗通過測定湖北、湖南、廣西、安微、四川等10 個地區(qū)不同單粒質(zhì)量的野生普通油茶籽中α-生育酚、角鯊烯、茶皂素的含量和脂肪酸組成，探討不同地區(qū)不同單粒質(zhì)量油茶籽品質(zhì)，為不同地區(qū)油茶引種、馴化、栽培提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

樣品由南昌大學生態(tài)研究所于2016年9—11月期間，在湖北、湖南、廣西、安微、四川五省宜昌、八大公山等10 個地區(qū)采集，單粒質(zhì)量分別為0.35 g以下（≤0.35 g）、0.35～0.8 g之間和0.8 g以上（≥0.8 g）（表1）。采集人員去往人跡罕至的叢林地區(qū)，尋找符合野生條件的油茶樹，將果實全部摘取。采集的樣品品種均為普通油茶。采集后曬干，用透氣的牛皮紙袋于常溫下保藏。判斷為野生油茶的依據(jù)：1）地處偏僻，交通不便，人跡罕至；2）油茶與雜灌混生，高矮不齊，大小不一，密度不均，稀松散布，無規(guī)律性；3）單株樹齡相差懸殊，天然下種，自然生長，樹形自然，無人工修剪跡象；4）無人為入侵痕跡，無松土、挖穴、除草等人為管理痕跡。

表1 采集樣品的來源及單粒質(zhì)量Table 1 Sample sources and single kernel mass

無水硫酸鈉、濃硫酸（均為分析純） 西隴科學股份有限公司；香草醛（分析純） 國藥集團化學試劑有限公司；蒸餾水、石油醚、甲醇鈉-甲醇溶液、草酸-乙酸甲酯、乙酸甲酯、乙酸乙酯（均為分析純） 上?；瘜W試劑公司；角鯊烯標品、α-生育酚標品、茶皂素標準品美國Sigma-Aldrich公司；甲醇、乙腈、正己烷（均為色譜純） 美國Tedia公司；硅膠粉 青島海洋化工廠分廠。其他試劑均為分析純。

1.2 儀器與設備

1100高效液相色譜儀、6890N氣相色譜儀 美國Agilent公司。

1.3 方法

1.3.1 提油

將采集的油茶籽去殼、粉碎、過60 目篩后，所得粉末加入12 倍體積的正己烷溶液，用攪拌器攪拌2 h后，靜置、取上清液離心，再旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑，所得即為山茶油，剩余殘渣再重復以上過程1 次，2 次所得油脂合并，殘渣烘干，用于茶皂素含量檢測。

1.3.2 脂肪酸組成的測定

樣品甲酯化：取2 mg油脂，加1.5 mL的正己烷，渦流30 s，再加40 μL乙酸甲酯與甲醇鈉-甲醇溶液，渦流30 s，37 ℃水浴反應20 min，然后置于－20 ℃冷凍10 min，取出，迅速加入60 μL的草酸-乙酸甲酯溶液，離心取上清液過無水硫酸鈉柱，取200 μL過柱上清液氮氣吹干，加1 mL正己烷溶解，進行氣相色譜分析。每個樣品測定3 次[21]。

測定條件：色譜柱采用C P-7 4 8 9毛細管柱（100 m×0.25 mm，0.2 μm）；載氣為N2，燃氣為H2和空氣；進樣口溫度為250 ℃，壓力為24.52 Pa，總流量為29.4 mL/min；氣相柱壓為24.52 Pa，柱內(nèi)流速為1.8 mL/min；程序升溫：45 ℃保持4 min，然后以13 ℃/min的速率升至175 ℃保持27 min，后以4 ℃/min的速率升至215 ℃保持35 min，總測定時間為86 min；檢測器溫度為250 ℃，H2流速為30.0 mL/min；空氣流速為300 mL/min；N2流速為30.0 mL/min。通過與脂肪酸甲酯標準對照，采用面積歸一化法確定脂肪酸的相對含量（以峰值面積的百分比表示）。

1.3.3α-生育酚含量的測定

α-生育酚標準曲線繪制：稱取α-生育酚標準品63.125 mg，正己烷定容至25 mL。移取1 mL用正己烷稀釋至25 mL，再從稀釋液中分別移取0.5、1、1.5、2、3 mL，用正己烷稀釋至10 mL。采用高效液相色譜法對其進行測定分析，制作α-生育酚標準曲線[21]。

α-生育酚含量的測定：稱取油茶籽油0.3 g，用正己烷定容至10 mL，濾膜過濾，采用高效液相色譜法對其進行測定分析[20]，每個樣品平行測3 次。通過α-生育酚標準曲線圖，計算各樣品中α-生育酚的含量。色譜柱為Hypersil ODS2（4.6 mm×150 mm，5 μm），流動相為甲醇-水（98∶2，V/V），流速0.8 mL/min，進樣量3 μL，柱溫為室溫，熒光檢測器波長：最大激發(fā)波長（λEx）為295 nm，最大發(fā)射波長（λEm）為325 nm。

1.3.4 角鯊烯含量的測定

角鯊烯標準曲線繪制：稱取10 mg角鯊烯，10 mL容量瓶正己烷定容。取出1 mL于10 mL容量瓶中正己烷定容，再分別移取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL，正己烷定容至10 mL，用高效液相色譜法測定并制作標準曲線。色譜條件為Hypersil ODS2色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為乙腈-甲醇（60∶40，V/V）；流速1.0 mL/min；進樣量10 μL；柱溫30 ℃；檢測波長210 nm[21]。

角鯊烯含量的測定：稱取0.5 g油茶籽油，5 mL石油醚溶解，過160～200 目的硅膠柱，收集過柱后的樣液在N2流下吹干后加2.5 mL的正己烷溶解，取1 mL溶液過0.45 μm濾膜，用高效液相色譜法測定，并通過角鯊烯標準曲線圖，計算出樣品中角鯊烯含量。

1.3.5 茶皂素含量的測定

茶皂素標準曲線繪制：稱取茶皂素標準品10 mg，甲醇溶解后并定容至10 mL，作為茶皂素儲備液。取5 mL質(zhì)量濃度為1 mg/mL的儲備液，定容至10 mL，得到質(zhì)量濃度為0.5 mg/mL的標準溶液。分別取標準溶液0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL，甲醇補足至0.5 mL，精確加8%香草醛溶液0.5 mL，于冰浴中加入77%硫酸溶液4 mL（垂直加入），振蕩均勻，于60 ℃加熱15 min，取出置于冰浴中10 min，以試劑空白為參比溶液，用1 cm比色皿在波長550 nm處測定吸光度，并繪制標準曲線[22]。

茶皂素含量的測定[23]：稱取1.3.2節(jié)提粗脂肪后的茶籽渣50 mg，用少量甲醇溶液溶解后，于50 mL容量瓶中用甲醇定容。吸取上清液0.5 mL，采取1.3.5.1節(jié)茶皂素標品測定方法進行含量分析。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

所有指標均重復測量3 次，檢測結(jié)果以 ±s表示。采用SPSS 20.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，采用單因素Duncan方差分析比較均值，P＜0.05，差異顯著。

2 結(jié)果與分析

2.1 油茶籽樣品含油率

從表2可知，所有樣品的含油率在29.9%～46.11%之間。從地區(qū)角度看，峨眉山（43.74%）、般若寺（4 3.4 8%）油茶籽的平均含油率高于貓兒山（42.24%）、元寶山（41.29%）、鄧村坪（42.18%）、橫口村（40.65%）、湯口（37.83%），平均含油率較低的地區(qū)有大嶺村（32.86%）、黃連臺（34.08%）、青龍寨（33.14%）。所有的油茶籽樣品來自5 個省份，四川省的油茶籽樣品平均含油率最高（42.14%），廣西省的油茶籽平均含油率也較高（41.66%），平均含油率最低的油茶籽來自湖南?。?4.08%）。從單粒質(zhì)量角度看，單粒質(zhì)量0.35～0.8 g的油茶籽平均含油率最高（43.43%）。單粒質(zhì)量0.8 g以上（36.74%）和單粒質(zhì)量0.35 g以下的油茶籽平均含油率（36.28%）相差不大。

表2 樣品含油率Table 2 Oil contents of camellia seed samples

2.2 脂肪酸組成

由表3可知，所有油茶籽樣品共檢測出26 種脂肪酸。其中主要為油酸（C18:19c）（71.156%～78.515%），其次為棕櫚酸（8.091%～12.096%）和亞油酸（C18:29c12c）（2.6 2 1%～1 0.6 1 8%）。其中油酸含量，橫口（7 6.9 7%～7 9.1 5%）、元寶山（76.971%～78.515%）、鄧村坪（76.58%）高于湯口（73.700%～76.011%）、青龍寨（75.1%）、黃連臺（75.278%）、般若寺（72.367%～75.097%）、貓兒山（7 4.1 8%～7 5.2 3 9%），大嶺村（72.279%）、峨眉山（71.156%）最少。飽和脂肪酸（11.09%～15.53%）以棕櫚酸（C16:0）和硬脂酸（C18:0）為主，般若寺（13.355%～15.53%）高于貓兒山（1 3.3 8 3%～1 3.7 4 9%）、元寶山（12.508%～14.953%）、峨眉（13.676%）、橫口（11.615%～13.199%）、鄧村坪（12.964%）、大嶺村（12.682%）、青龍寨（11.823%）、黃連臺（11.09%）。單不飽和脂肪酸以油酸（C18:19c）為主，差異性和油酸含量一致。多不飽和脂肪酸中，亞油酸的含量為2.621%～10.618%，不同地區(qū)有顯著性差異，大嶺村（10.618%）和峨眉山（10.163%）的含量顯著高于其他地區(qū)，元寶山整體含量最低。大多數(shù)地區(qū)單粒質(zhì)量越小的油茶籽亞油酸含量越高。亞麻酸的含量為0.367%～0.552%，除黃連臺含量較高外，其余地區(qū)無顯著性差異，不同單粒質(zhì)量的油茶籽亞麻酸含量無顯著性差異。C18:0、C18:19t、C18:111t、C18:16c、C18:111c這幾種脂肪酸含量無顯著性差異。在般若寺、橫口村、貓兒山、湯口等8個地區(qū)的油茶籽中檢測出少量神經(jīng)酸（C22:1n-9），長鏈不飽和脂肪酸的種類和含量也很豐富，在其他文獻中少見報道。

表3 野生油茶籽的脂肪酸組成Table 3 Fatty acid composition of wild camellia seeds%

2.3 α-生育酚含量測定結(jié)果

圖1 野生油茶籽樣品α-生育酚含量Fig. 1 α-Tocopherol contents of wild camellia seed samples

由圖1可知，所有樣品α-生育酚含量在0.031～0.149 mg/g之間。在0.35 g以下的油茶籽中，湯口地區(qū)α-生育酚含量最高（0.149 mg/g），高于般若寺（0.129 mg/g）、元寶山（0.082 mg/g）、橫口村（0.065 mg/g）、貓兒山（0.032 mg/g）。在0.35～0.8 g的油茶籽中，湯口地區(qū)含量（0.135 mg/g）高于般若寺（0.129 mg/g），橫口村（0.064 mg/g）和貓兒山（0.058 mg/g）無顯著性差異，元寶山含量最低（0.031 mg/g）。在0.8 g以上的油茶籽中，般若寺（0.096 mg/g）含量高于湯口（0.087 mg/g）、橫口村（0.063 mg/g）。從地區(qū)角度看，峨眉山油茶籽油的α-生育酚含量高于其他地區(qū)，黃山湯口、般若寺和青龍寨高于大嶺村、黃連臺、鄧村坪、橫口、元寶山地區(qū)，貓兒山整體含量最低。除此之外油茶籽單粒質(zhì)量也對α-生育酚含量有影響，多數(shù)地區(qū)，單粒質(zhì)量0.35 g以下的油茶籽＞單粒質(zhì)量0.35～0.8 g的油茶籽＞單粒質(zhì)量大于0.8 g的油茶籽，例如元寶山地區(qū)，黃山湯口地區(qū)、般若寺地區(qū)，但是貓兒山、橫口村則不符合此規(guī)律，故并不能將質(zhì)量大小作為判斷油茶籽等級的標準。

2.4 角鯊烯含量測定結(jié)果

圖2 野生油茶籽樣品角鯊烯含量Fig. 2 Squalene contents of wild camellia seed samples

由圖2可知，在所有樣品中角鯊烯含量在0.056～0.256 mg/g之間。在0.35 g以下的油茶籽中，湯口含量最高（0.142 mg/g），高于橫口（0.111 mg/g）、貓兒山（0.086 mg/g）、般若寺（0.069 mg/g）、元寶山（0.073 mg/g），在0.35～0.8 g的油茶籽中，湯口含量最高（0.111 mg/g），高于橫口村（0.095 mg/g）、般若寺（0.081 mg/g）、元寶山（0.073 mg/g）、貓兒山（0.063 mg/g）。在單粒質(zhì)量0.8 g以上的油茶籽中，角鯊烯含量（0.056～0.065 mg/g）沒有顯著性差異。從地區(qū)看，大嶺村的角鯊烯含量最高，高于黃連臺、峨嵋山、青龍寨、湯口、橫口，最低的是貓兒山、元寶山、般若寺。從單粒質(zhì)量的角度，大部分地區(qū)單粒質(zhì)量小于0.35 g的油茶籽角鯊烯含量最高，在0.35～0.8 g的油茶籽次之，0.8 g以上油茶籽角鯊烯含量最低。

2.5 茶皂素含量測定結(jié)果

圖3 野生油茶籽樣品茶皂素含量Fig. 3 Tea saponin contents of wild camellia seed samples

由圖3可知，在所有樣品中茶皂素含量在0.166～0.351 g/g之間。在0.35 g以下的油茶籽中，般若寺含量最高（0.328 g/g），高于橫口村（0.262 g/g）、貓兒山（0.271 g/g）、元寶山（0.264 g/g）、湯口（0.235 g/g）。在0.35～0.8 g的油茶籽中，湯口（0.264 g/g）含量高于貓兒山（0.218 g/g）、元寶山（0.179 g/g）、橫口（0.202 g/g）、般若寺（0.204 g/g）。在單粒質(zhì)量0.8 g以上的油茶籽中，湯口和橫口油茶籽含量沒有顯著性差異，分別為0.328、0.351 g/g，般若寺地區(qū)稍低（0.262 g/g）。從地區(qū)來看，峨眉山地區(qū)含量高于湯口地區(qū)、般若寺、橫口村、大嶺村、貓兒山、元寶山、鄧村坪、青龍寨高于黃連臺。在同一個地區(qū)，不同單粒質(zhì)量的油茶籽茶皂素含量也有顯著性差異?？偟膩碚f單粒質(zhì)量0.8 g以上油茶籽茶皂素含量高于單粒質(zhì)量0.35 g以下和單粒質(zhì)量0.35～0.8 g的油茶籽。

3 討 論

3.1 不同地區(qū)和不同單粒質(zhì)量野生油茶籽品質(zhì)的差異

本研究測得的油茶籽含油率在29.9%～46.11%之間。從地區(qū)角度看，四川峨眉山（43.74%）、四川都江堰（43.48%）、湖北宜昌（42.18%）、廣西貓兒山（42.24%）、廣西元寶山（41.29%）的油茶籽含油率較高，可能與氣候有關；這幾個地區(qū)均為亞熱帶溫潤季風氣候，氣候溫暖，雨水充沛，年降水量為1 500～2 000 mm，全年光照1 250～1 540 h；反觀霍山大嶺村（32.86%）、黃連臺（34.08%）、達州青龍寨（33.14%）這幾個地區(qū)油茶籽含油率較低，可能因為這幾個地區(qū)光熱不足。達州降水充沛但是光照較少，八大公山海拔較高，氣溫較低。就單粒質(zhì)量來說，0.35～0.8 g的油茶籽含油率最高。α-生育酚的含量，四川峨眉山、般若寺和黃山湯口的油茶籽最高，單粒質(zhì)量小的油茶籽含量較高。這幾個地區(qū)都是降水充足（1 300～2 000 mm）氣候溫暖的地區(qū)。角鯊烯含量，大嶺村、黃連臺地區(qū)較高，這2個地區(qū)都是氣候較為濕潤的丘陵地區(qū)。茶皂素含量，峨眉山、湯口、橫口、般若寺、大嶺村、貓兒山、元寶山含量較高且無顯著性差異，黃連臺和青龍寨含量較低，可能是由于這2個地區(qū)光熱不足。總的來說，雨水充沛、光熱充足、氣候溫暖的地區(qū)野生油茶籽營養(yǎng)成分較高。其中峨眉山的油茶籽含油率和營養(yǎng)成分含量最為優(yōu)良，從單粒質(zhì)量的角度，0.35～0.8 g的油茶籽含油率高，α-生育酚含量高，單粒質(zhì)量0.35 g以下的油茶籽角鯊烯含量高，單粒質(zhì)量0.8 g以上的油茶籽茶皂素含量高。其中0.35～0.8 g的油茶籽含油率和營養(yǎng)成分總體最高。因此就育種和栽培看，應控制油茶籽的單粒質(zhì)量。

3.2 野生油茶籽品質(zhì)差異對育種的參考

測得的野生油茶籽含油率在29.9%～46.11%之間；從省份看，安徽省37.15%、廣西省41.66%、湖南省34.08%、湖北省39.14%、四川省42.14%，與王湘南等[24]測得的栽培油茶含油率湖南35.83%、貴州37.93%、河南31.13%比較發(fā)現(xiàn)某些野生油茶籽含油率如廣西省融水元寶山0.35～0.8 g高達46.11%，遠高于栽培油茶籽。本研究中油茶籽油共檢測出26 種脂肪酸，主要是油酸（71.156%～78.515%），與張東生等[9]研究的10 個地區(qū)油茶籽油酸含量（74.31%～83.65%）相似，測得野生油茶籽油棕櫚酸（8.208%～12.096%）和亞油酸（2.621%～10.618%）。龍伶俐等[4]測得95 個提取油茶籽樣品棕櫚酸含量為7.12%～9.57%、亞油酸含量為5.4%～9.8%。艾芳芳等[25]測得油茶籽中多不飽和脂肪酸含量為7.53%，本研究中測得的多不飽和脂肪酸含量為3.79%～11.47%，說明野生油茶籽的脂肪酸組成與栽培油茶籽相近，選育的栽培油茶籽油酸稍高。本研究中所測得的角鯊烯含量為0.056～0.256 mg/g，其中湯口（TK0.35 g）、峨眉山、大嶺村、黃連臺的油茶籽油中含量分別為142、124、256 mg/kg和137 mg/kg，劉瑞興等[26]水酶法提取的山茶中角鯊烯含量為0.114 mg/g，湯富彬等[2]測得的茶油中角鯊烯含量為117 mg/kg，說明某些野生油茶籽角鯊烯含量高于栽培油茶籽。本研究測得的α-生育酚含量為0.031～0.149 mg/g，任傳義等[11]用冷榨法提油測得的油茶籽油α-生育酚含量為0.249 mg/g，含量相差較大可能是因為樣品在溶劑浸提的過程中蒸發(fā)溶劑造成了損失，與石曉麗[27]采用不同方式提油對α-生育酚含量的影響結(jié)果一致。本研究測得的茶皂素含量為0.166～0.351 g/g，其中湖北地區(qū)茶皂素HK0.35 g含量為0.162 g/g、HK0.35～0.8 g含量為0.202 g/g、HK0.8 g含量為0.351 g/g、DCP含量為0.246 g/g；郭艷紅[28]測得湖北省宜昌油茶籽茶皂素含量為0.248 g/g；楊凱[29]測得的茶皂素含量為浙江0.193 g/g，湖南0.191 g/g，廣西0.196 g/g；李好等[30]的研究表明栽培油茶籽成熟過程中茶籽仁的茶皂素含量在0.132～0.256 g/g范圍內(nèi)；說明某些地區(qū)的油茶籽茶皂素含量高于栽培油茶籽?？傮w來看，某些地區(qū)野生油茶籽的含油率高于栽培品種，可以為馴化高產(chǎn)油茶提供參考；其脂肪酸組成與栽培品種相近，可以作為食物資源；某些地區(qū)高角鯊烯的野生油茶籽可以育種作為開發(fā)保健食品的原料；某些地區(qū)的野生油茶也可用來選育高茶皂素油茶，提高茶籽餅粕的工業(yè)價值。這些成分的差異，可為不同地區(qū)選育合適的種植油茶提供參考。