呂 弘，王曉明,*，劉小梅，張 帆，王獻(xiàn)瑞，郭亞卿，潘桂湘*

（1.天津中醫(yī)藥大學(xué) 天津市現(xiàn)代中藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室-省部共建國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，天津 301617；2.天津中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，天津 300250）

興安升麻（Cimicifuga dahurica(Turcz.) Maxim）是毛茛科升麻屬多年生宿根草本植物，又稱北升麻、窟窿牙根、苦老菜根[1]，主產(chǎn)于我國華北、東北地區(qū)。興安升麻幼苗可食，根莖為藥用有效部位，即為升麻[2]。2015年版《中國藥典》記載，升麻具有發(fā)表透疹、清熱解毒、升舉陽氣等功效，用于風(fēng)熱頭痛、口瘡、麻疹不透、陽毒發(fā)斑、子宮脫垂等病證[3]。升麻屬植物目前發(fā)現(xiàn)主要含有9,19-阿爾廷烷三萜皂苷、肉桂酸衍生物等兩大類化合物，此外還有色原酮類、吲哚類生物堿以及其他含氮類化合物[4-5]。其藥理作用除了傳統(tǒng)的抗炎[6]、解熱、鎮(zhèn)痛和抗?jié)兺鈁7]，還可用于治療婦女絕經(jīng)、骨質(zhì)疏松[8-9]、腫瘤[10]等。

升麻可以鮮食，既是藥膳佳肴又是食材良藥。早春可將幼嫩的升麻莖制作后食用，清香爽口，略帶苦味，若與小米粥同食，可變苦為甜；幼葉涼拌菜、炒菜或用作主食菜餡，有較高的食用價(jià)值[11]。國家衛(wèi)生健康委（原衛(wèi)生部）曾于2002年3月發(fā)布《衛(wèi)生部關(guān)于進(jìn)一步規(guī)范保健食品原料管理的通知》文件，將升麻列入可用于保健食品的原料清單。

本實(shí)驗(yàn)利用超高效液相色譜（ultra performance liquid chromatography，UPLC）較佳的色譜分離特性和四極桿-飛行時(shí)間（quadrupole-time of flight，Q-TOF）良好的質(zhì)量分辨能力[12]，及亞2 μm填料窄徑柱優(yōu)越的色譜分離能力，使興安升麻甲醇提取物的眾多成分在色譜上得到較好分離，然后用Q-TOF-質(zhì)譜（mass spectrometry，MS）采集一級(jí)、二級(jí)高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)，接著利用Masshunter軟件對(duì)原始質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，根據(jù)獲得的化合物精確質(zhì)量數(shù)、色譜保留時(shí)間、碎片離子信息等，對(duì)興安升麻的化學(xué)成分進(jìn)行解析。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

升麻藥材購于河北安國藥材市場(chǎng)，天津中醫(yī)藥大學(xué)李天祥教授鑒定為興安升麻。

對(duì)照品：北升麻瑞、北升麻寧、升麻酰胺A、反式阿魏酰酪胺-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、(＋)-異落葉松脂素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、24-epi-7,8-雙去氫升麻酮醇-3-O-β-D-木吡喃糖苷均為自制，經(jīng)紅外光譜、核磁共振、質(zhì)譜鑒定，質(zhì)量分?jǐn)?shù)大于98%；咖啡酸、阿魏酸、異阿魏酸、升麻素、升麻酮醇-3-O-β-D-木吡喃糖苷 中國藥品生物制品檢定研究院。

乙腈、甲醇（均為色譜純） 美國Fisher公司；甲酸（色譜純） 美國Tedia公司；超純水由Milipore超純水凈化系統(tǒng)制得。

1.2 儀器與設(shè)備

1290 UPLC儀、6520 Q-TOF-MS儀 美國Agilent公司；Mill-Q II型超純水器 美國Millipore公司；3K15低溫高速離心機(jī) 德國Sigma公司；AX205十萬分之一天平瑞士Mettler Toledo公司；KQ-250E超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司；XW-80A旋渦混合器 上海滬西分析儀器廠。

1.3 方法

1.3.1 樣品處理

供試品：將升麻藥材樣品粉碎，過40 目篩后精密稱取0.25 mg置于10 mL容量瓶，精密加入9.75 mL 80%甲醇，蓋塞超聲提?。üβ?50 W，頻率40 kHz）30 min，靜置放冷至室溫后，80%甲醇溶液補(bǔ)足至刻度，搖勻，濾紙過濾，取續(xù)濾液1 mL于14 000 r/min離心10 min，將上清液再用0.22 μm微孔濾膜過濾，取續(xù)濾液即得供試品溶液。

1.3.2 UPLC條件

色譜柱：Waters Acquity BEHC18柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）；保護(hù)柱：Waters Acquity BEH C18柱（2.1 mm×5 mm，1.7 μm）；柱溫30 ℃；流速0.4 mL/min；進(jìn)樣量1 μL；流動(dòng)相：A為0.1%甲酸溶液，B為乙腈。梯度洗脫程序見表1。

表1 色譜梯度洗脫程序Table 1 Gradient elution procedure for chromatographic separation

1.3.3 MS條件

電噴霧離子源；渦輪噴射，正負(fù)離子模式檢測(cè)，質(zhì)量掃描范圍m/z100～1 000。離子源參數(shù)：噴霧電壓3 500 V，碎裂電壓175 V，離子源溫度350 ℃，鞘氣流速10 L/min；噴霧氣壓力35 psi；錐孔電壓65 V。

1.3.4 高分辨質(zhì)譜數(shù)據(jù)處理、檢索和鑒定

利用Masshunter工作站中的MFE軟件，通過設(shè)定合適的閾值參數(shù)，對(duì)升麻甲醇提取物正負(fù)離子模式下采集到的原始質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行分子特征提取，得到精簡(jiǎn)的質(zhì)譜數(shù)據(jù)信息。然后將精簡(jiǎn)后的特征離子導(dǎo)入到自定義化合物數(shù)據(jù)庫中。該數(shù)據(jù)庫收集了文獻(xiàn)已報(bào)道升麻化學(xué)成分的化合物名稱、CAS號(hào)、分子式、精確質(zhì)量數(shù)、化學(xué)結(jié)構(gòu)式等相關(guān)信息，由PCDL軟件編輯而成。在數(shù)據(jù)庫中執(zhí)行Batch Search（批處理檢索）操作，檢索得到可能與升麻相關(guān)的候選成分，接著根據(jù)質(zhì)譜裂解規(guī)律，對(duì)二級(jí)質(zhì)譜碎片進(jìn)行解析，推測(cè)化合物的結(jié)構(gòu)，并輔以部分標(biāo)準(zhǔn)品的確證，鑒定升麻甲醇提取物中的主要化學(xué)成分。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取方法及色譜條件的選擇

提取方法的選擇：考察不同超聲時(shí)間，不同比例的甲醇溶液（40%、60%、80%、100%）的超聲提取效果，將色譜峰的數(shù)量和響應(yīng)強(qiáng)度作為考察指標(biāo)，最終確定提取時(shí)間為40 min，提取溶劑為80%甲醇溶液。

色譜柱的選擇：實(shí)驗(yàn)比較了C18、HSS T3不同類型色譜填料，5、1.7 μm不同填料粒徑，50、100 mm色譜柱長(zhǎng)度，4.6、2.1 mm色譜柱內(nèi)徑的色譜分離情況，結(jié)果顯示W(wǎng)aters Acquity BEH C18柱（2.1 mm×100 mm，1.7 μm）色譜柱峰容量大、色譜分離效果最佳。

流動(dòng)相的選擇：在色譜條件篩選過程中，實(shí)驗(yàn)比較了乙腈溶液與甲醇溶液的分離效果，結(jié)果表明乙腈溶液的分離效果更好；繼而又對(duì)乙腈-0.05%甲酸溶液、乙腈-0.1%甲酸溶液的分離效果進(jìn)行對(duì)比，結(jié)果表明當(dāng)流動(dòng)相為乙腈-0.1%甲酸溶液時(shí)，色譜分離效果最好。

2.2 興安升麻化學(xué)成分色譜峰的鑒定

圖1 興安升麻UPLC-Q-TOF-MS正（A）、負(fù)（B）總離子流色譜圖Fig. 1 UPLC-Q-TOF-MS total ion current (TIC) chromatograms of chemical components from C. dahurica in positive and negative ion modes

依據(jù)供試品的色譜保留時(shí)間、碎片離子峰等信息，結(jié)合質(zhì)譜裂解規(guī)律和部分標(biāo)準(zhǔn)品確證，從興安升麻甲醇提取物中共鑒定了38 個(gè)化合物，其中19 個(gè)于正離子模式下檢測(cè)，另19 個(gè)在負(fù)離子模式下檢測(cè)到，見圖1、表2。

2.3 化合物的MS解析

2.3.1 苯丙素類

鑒定苯丙素類化合物共18 個(gè)，其中苯丙素苷2 個(gè)、木質(zhì)素1 個(gè)，咖啡酸類15 個(gè)，分別為表2中的化合物2、3、4、5、6、7、8、9、11、12、13、14、17、20、21、22、23和24。

化合物4、5均失去一個(gè)氫離子得到母離子m/z 315.107 3 [M－H]－，在二級(jí)質(zhì)譜中檢測(cè)到m/z 161、153 [M－H－162]－，保留時(shí)間分別為5.11 min和5.88 min，其裂解過程為準(zhǔn)分子離子丟失一分子六元含氧糖生成苷元碎片離子。通過與自制的北升麻瑞、北升麻寧標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，含半乳糖化合物出峰時(shí)間早于含葡萄糖的化合物，根據(jù)文獻(xiàn)[15-16]數(shù)據(jù)確定化合物4為北升麻瑞，化合物5為北升麻寧，均為苯丙素苷類化合物，裂解途徑如圖2A所示。

化合物1 1失去一個(gè)氫離子得到母離子m/z 521.204 2 [M－H]－，其保留時(shí)間為14.59 min，檢測(cè)到二級(jí)碎片離子m/z 359 [M－H－162]－、161，結(jié)合碎片離子質(zhì)量推測(cè)其裂解過程為準(zhǔn)分子離子m/z 521.204 2失去葡萄糖中性碎片，得到m/z 359、161的碎片離子峰，裂解途徑如圖2B所示，與(＋)-異落葉松脂素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行對(duì)照，確定化合物11為(＋)-異落葉松脂素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，是升麻屬中首次分離得到的木質(zhì)素類化合物。

化合物7失去一個(gè)氫離子得到母離子m/z 179.035 3 [M－H]－，豐度較高，其保留時(shí)間為8.08 min，在二級(jí)質(zhì)譜中檢測(cè)出m/z 135，根據(jù)文獻(xiàn)[17]推測(cè)其裂解途徑為準(zhǔn)分子離子脫去一分子CO2得到碎片m/z 135 [MH－44]－，裂解途徑如圖2C所示，與咖啡酸對(duì)照品一致，確定化合物7為咖啡酸。

化合物8、12均失去一個(gè)氫離子得到母離子m/z 193.05 [M－H]－，二級(jí)質(zhì)譜中均檢測(cè)到m/z 178、134的碎片離子，保留時(shí)間分別為12.96 min和14.61 min，因2 個(gè)成分質(zhì)譜數(shù)據(jù)完全相同，所以互為同分異構(gòu)體。根據(jù)文獻(xiàn)[18]推測(cè)其裂解途徑，為準(zhǔn)分子離子丟失一分子CH3?，形成m/z 178的碎片離子，再失去一分子CO2，生成m/z 134 [M－H－15－44]－的碎片離子。通過與阿魏酸、異阿魏酸標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行對(duì)照，確定化合物8為阿魏酸，化合物12為異阿魏酸。阿魏酸的裂解途徑如圖2D所示，異阿魏酸的裂解規(guī)律與阿魏酸相似。

化合物9失去一個(gè)氫離子得到母離子m/z 609.144 3[M－H]－，其保留時(shí)間為13.23 min，特征碎片離子為m/z 253、178、163、134，根據(jù)文獻(xiàn)[14]推測(cè)其裂解途徑可能是m/z 609.144 3丟失一分子六元糖基碎片得到苷元碎片，苷元碎片再失去一分子咖啡酸及一分子H2O，得到m/z 253、178 [C9H8O4－H]－的碎片離子，碎片m/z 178分別失去一分子CH3?和一分子CO2，分別得到碎片m/z 163、134。根據(jù)文獻(xiàn)[14]數(shù)據(jù)推斷化合物9可能為咖啡酸類衍生物shomaside A。

表2 UPLC-Q-TOF-MS在正、負(fù)離子模式下鑒定興安升麻中化學(xué)成分Table 2 Compounds identi fi ed in C. dahurica by UPLC-Q-TOF-MS in both negative and positive ion modes

化合物13、14均失去一個(gè)氫離子得到母離子m/z 593.15 [M－H]－，二級(jí)質(zhì)譜檢測(cè)出碎片離子均為m/z 253、178、163、134，保留時(shí)間分別為14.96 min和15.36 min，裂解途徑與shomaside A相似，推測(cè)二者母核相同但糖基種類不同，鑒于含半乳糖化合物出峰時(shí)間早于含葡萄糖的化合物，結(jié)合質(zhì)譜數(shù)據(jù)推斷化合物13可能為shomaside B，化合物14可能為shomaside C。

化合物1 7失去一個(gè)氫離子得到母離子m/z 433.075 9 [M－H]－，其保留時(shí)間為16.60 min，在二級(jí)質(zhì)譜中檢測(cè)出m/z 271、179、135碎片離子，根據(jù)參考文獻(xiàn)[14,20]推測(cè)其裂解途徑為m/z 433.075 9失去一分子咖啡酰氧基得到碎片m/z 271 [M－H－C9H7O3]－，碎片m/z 179 [C9H8O4－H]－失去一分子CO2得到m/z 135的碎片離子，根據(jù)文獻(xiàn)[14,20]推測(cè)化合物17可能為蜂斗菜酸。

化合物21、22均失去一個(gè)氫離子得到母離子m/z 447.092 4 [M－H]－，均檢測(cè)出二級(jí)碎片離子m/z 253、235、194，m/z 253碎片豐度峰較高，保留時(shí)間分別22.28 min和24.27 min。結(jié)合文獻(xiàn)[20]推測(cè)出準(zhǔn)分子離子丟失一分子阿魏酸/異阿魏酸的中性碎片，得到m/z 253 [M－194]－碎片離子，碎片m/z 253進(jìn)一步裂解丟失一分子H2O得到碎片m/z 235，依據(jù)文獻(xiàn)[20]質(zhì)譜數(shù)據(jù)推斷化合物21可能為升麻酸A，化合物22可能為升麻酸B。

化合物23、24均失去一個(gè)氫離子得到母離子m/z 431.096 7 [M－H]－，二級(jí)質(zhì)譜中檢測(cè)出m/z 237、193、165的碎片離子，保留時(shí)間分別25.66 min和26.83 min，裂解途徑與升麻酸A、升麻酸B相似。結(jié)合文獻(xiàn)[14]數(shù)據(jù)，2-阿魏?；?番石榴酸的出峰時(shí)間早于2-異阿魏酰基-番石榴酸，推斷化合物23可能為2-阿魏?；?番石榴酸，化合物24可能為2-異阿魏酸?；?番石榴酸。

圖2 北升麻瑞、北升麻寧（A）、()-異落葉松脂素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（B）、咖啡酸（C）、阿魏酸（D）的裂解途徑Fig. 2 Fragmentation pathways of cimidahurine and cimidahurinine (A),(+)-isolariciresinol-3-O-β-D-glucopyranoside (B),caffeic acid (C), and ferulic acid (D)

2.3.2 含氮化合物

圖15所示為某型飛機(jī)叉耳式機(jī)身—機(jī)翼交點(diǎn)對(duì)接裝配示意圖，機(jī)身交點(diǎn)軸線faF的長(zhǎng)度l1=800 mm，機(jī)翼交點(diǎn)軸線waF的長(zhǎng)度l2=1 000 mm?；鶞?zhǔn)A、基準(zhǔn)B分別為機(jī)身、機(jī)翼的中心線。機(jī)身、機(jī)翼單獨(dú)制造時(shí)，機(jī)身交點(diǎn)軸線faF相對(duì)基準(zhǔn)A的同軸度要求faT=0.1 mm，機(jī)翼交點(diǎn)軸線waF相對(duì)基準(zhǔn)B的同軸度要求waT=0.2 mm。機(jī)身—機(jī)翼對(duì)接裝配時(shí)，waF相對(duì)faF的同軸度誤為協(xié)調(diào)控制對(duì)象。利用交點(diǎn)軸線T-Maps和累積T-Map的幾何關(guān)系進(jìn)行公差累積分析，以獲的空間波動(dòng)域。

鑒定含氮化合物共6 個(gè)，其中生物堿類2 個(gè)，酰胺類4 個(gè)。分別為表2中的化合物1、10、16、18、19和25。

化合物1結(jié)合一個(gè)氫離子得到母離子m/z 154.097 1[M＋H]＋，其保留時(shí)間為1.11 min，二級(jí)質(zhì)譜中測(cè)定出m/z 112、95的碎片離子，根據(jù)文獻(xiàn)[13]以及碎片離子質(zhì)量，推測(cè)其裂解途徑為準(zhǔn)分子離子失去一分子碳二亞胺（NH＝C＝NH），得到碎片m/z 112 [M＋H－42]＋，碎片m/z 112進(jìn)一步丟失一分子H2O得到碎片m/z 95，其裂解途徑如圖3A所示，根據(jù)文獻(xiàn)[13]數(shù)據(jù)推斷化合物1可能為cimipronidine型生物堿cyclocimipronidine。

化合物25結(jié)合一個(gè)氫離子得到母離子m/z 614.367 1[M＋H]＋，其保留時(shí)間為30.45 min，檢測(cè)到二級(jí)碎片離子為596，根據(jù)文獻(xiàn)[23-24]以及依據(jù)氮規(guī)則推斷出化合物為9,19-cycloane cycloartane型，含有一個(gè)氮原子，準(zhǔn)分子離子失去一分子H2O得到碎片m/z 596 [M＋H－H2O]＋，此外，化合物還可與一個(gè)鈉離子結(jié)合得到m/z 636 [M＋Na]＋。根據(jù)文獻(xiàn)[23-24]數(shù)據(jù)推斷化合物25可能為升麻堿。

化合物1 0結(jié)合一個(gè)氫離子得到母離子m/z 492.185 3 [M＋H]＋，其保留時(shí)間為13.87 min，檢測(cè)到二級(jí)碎片離子m/z 330、177，根據(jù)文獻(xiàn)[13]以及依據(jù)氮規(guī)則推斷出化合物含有一個(gè)氮原子，推測(cè)其裂解過程為準(zhǔn)分子離子丟失一分子糖基，得到碎片m/z 330 [M＋H－162]＋，R2位的糖基被H取代后，酰胺鍵斷裂，生成阿魏酸碎片，得到m/z 177的碎片離子。與自制的升麻酰胺A標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行對(duì)照，確定化合物10為升麻酰胺A。

化合物1 6結(jié)合一個(gè)氫離子得到母離子m/z 476.190 3 [M＋H]＋，其保留時(shí)間為16.15 min，二級(jí)質(zhì)譜中檢測(cè)到m/z 314 [M＋H－162]＋、177的碎片離子，裂解途徑與升麻酰胺A相似，與自制的反式阿魏酰酪胺-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行對(duì)照，結(jié)合文獻(xiàn)[13]數(shù)據(jù)確定化合物16為反式阿魏酰酪胺-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷，其裂解途徑如圖3B所示。

圖3 Cyclocimipronidine（A）、反式阿魏酰酪胺-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷（B）、升麻酰胺（C）的裂解途徑Fig. 3 Fragmentation pathways of cyclocimipronidine (A), transferuloyl tyramine-4-O-β-D-glucopyranoside (B), and cimicifugamide (C)

化合物18、19均結(jié)合一個(gè)氫離子得到母離子m/z 506.202 3 [M＋H]＋，二級(jí)碎片離子均為m/z 344 [M＋H－162]＋、177，保留時(shí)間分別為17.71 min和18.06 min，裂解途徑與升麻酰胺A相似，兩者質(zhì)譜數(shù)據(jù)相同，互為同分異構(gòu)體，推測(cè)兩者的甲氧基與糖基的位置不同，根據(jù)文獻(xiàn)[21-22]異升麻酰胺的出峰時(shí)間早于升麻酰胺，推斷化合物18可能為異升麻酰胺，化合物19可能為升麻酰胺，其裂解途徑如圖3C所示。

2.3.3 色原酮類

圖4 升麻素的裂解途徑Fig. 4 Fragmentation pathways of cimifugin

2.3.4 皂苷類

鑒定皂苷類化合物共13 個(gè)。升麻屬最主要的成分是三萜皂苷，大多為同分異構(gòu)體。分別為表2中的化合物26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37和38。

化合物2 6結(jié)合一個(gè)氫離子得到母離子m/z 637.393 7 [M＋H]＋，其保留時(shí)間為40.58 min，檢測(cè)到二級(jí)碎片離子m/z 487 [M＋H－150]＋，根據(jù)文獻(xiàn)[25]以及碎片離子質(zhì)量，推測(cè)準(zhǔn)分子離子失去一分子木吡喃糖得到碎片m/z 487，推測(cè)化合物26可能為12-β-羥基升麻醇-3-O-α-L-阿拉伯糖苷。

化合物2 7失去一個(gè)氫離子得到母離子m/z 679.406 5 [M－H]－，其保留時(shí)間為40.61 min，二級(jí)質(zhì)譜檢測(cè)到碎片m/z 619，根據(jù)文獻(xiàn)[26]及碎片離子質(zhì)量，推測(cè)裂解途徑為準(zhǔn)分子離子失去乙酰氧基碎片，得到m/z 619 [M－H－59]－的碎片離子，推斷出化合物27可能為hydroshengmanol型的24-O-乙酰氫化升麻新醇-3-O-β-D-木吡喃糖苷。

化合物28、29均失去一個(gè)氫離子得到母離子m/z 661.39 [M＋H]＋，檢測(cè)到二級(jí)碎片離子為m/z 643、601、583，保留時(shí)間分別為52.65 min和61.78 min，根據(jù)文獻(xiàn)[26-27]及碎片離子質(zhì)量，推測(cè)準(zhǔn)分子離子失去一分子H2O和一分子乙酰氧基碎片，得到m/z 643[M＋H－18]＋、601 [M＋H－59]＋及m/z 583 [M＋H－18－59]＋的碎片離子，并且23-epi-26-脫氧升麻烴出峰時(shí)間早于26-脫氧升麻烴，結(jié)合文獻(xiàn)數(shù)據(jù)推測(cè)化合物28可能為23-epi-26-脫氧升麻烴；化合物29可能為26-脫氧升麻烴，其裂解途徑如圖5A所示。

化合物31、32和33均失去一個(gè)氫離子得到母離子m/z 661.39 [M＋H]＋，二級(jí)離子碎片均為m/z 643、601、583，保留時(shí)間分別為66.99、67.11 min和78.39 min，裂解途徑與23-epi-26-脫氧升麻烴、26-脫氧升麻烴相似。結(jié)合文獻(xiàn)[25]與不同化合物的出峰時(shí)間對(duì)照，含阿拉伯糖苷的化合物出峰時(shí)間早于含木糖的化合物，推斷化合物31可能為25-O-乙酰-7,8-雙去氫升麻酮醇-3-O-α-L-阿拉伯糖苷；化合物32可能為25-O-乙酰-7,8-雙去氫升麻酮醇-3-O-α-L-木糖苷；化合物33可能為3’-O-乙酰-24-epi-7,8-雙去氫升麻酮醇-3-O-β-D-木糖苷。

化合物3 0結(jié)合一分子醋酸得到母離子m/z 665.389 1 [M＋HCOO]－，其保留時(shí)間為63.72 min，二級(jí)質(zhì)譜中檢測(cè)到碎片離子m/z 647、619 [M－H]－、533，根據(jù)文獻(xiàn)[25]及碎片離子質(zhì)量，推測(cè)化合物為cimigenol型皂苷，準(zhǔn)分子離子失去一分子H2O，得到碎片m/z 647[M＋HCOO－H2O]－，或失去阿拉伯糖中性分子得到碎片m/z 533 [M＋HCOO－132]－，其裂解途徑如圖5B所示，推斷化合物30可能為升麻酮醇-3-O-α-L-阿拉伯糖苷。

化合物34、35均結(jié)合一個(gè)氫離子得到母離子m/z 619.384 6 [M＋H]＋，二級(jí)碎片離子均為m/z 601、487，保留時(shí)間不同，分別為78.87 min和79.09 min，根據(jù)文獻(xiàn)[26]及碎片離子質(zhì)量，推測(cè)化合物均為cimigenol型皂苷，準(zhǔn)分子離子失去一分子H2O，得到碎片m/z 601 [M＋H－H2O]＋，或失去木吡喃糖糖中性分子得到碎片m/z 487[M＋H－132]＋，7,8-雙去氫升麻酮醇-3-O-β-D-木吡喃糖苷出峰時(shí)間早于24-epi-7,8-雙去氫升麻酮醇-3-O-β-D-木吡喃糖苷，與自制24-epi-7,8-雙去氫升麻酮醇-3-O-β-D-木吡喃糖苷標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，確定化合物35為24-epi-7,8-雙去氫升麻酮醇-3-O-β-D-木吡喃糖苷，結(jié)合文獻(xiàn)[26]數(shù)據(jù)推斷化合物34為7,8-雙去氫升麻酮醇-3-O-β-D-木吡喃糖苷。

化合物3 6結(jié)合一個(gè)氫離子得到母離子m/z 621.397 9 [M＋H]＋，其保留時(shí)間為79.32 min，二級(jí)譜中碎片離子為 m/z 603、453，根據(jù)文獻(xiàn)[28]以及碎片離子質(zhì)量，推測(cè)化合物為cimigenol型皂苷，準(zhǔn)分子離子失去一分子H2O得到碎片m/z 603 [M＋H－H2O]＋，碎片m/z 603繼而失去木吡喃糖糖碎片得到m/z 453 [M＋H－H2O－150]＋，此外，化合物還可與一分子鈉離子結(jié)合得到m/z 643 [M＋Na]＋。與升麻酮醇-3-O-β-D-木吡喃糖苷標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照，確定化合物36為升麻酮醇-3-O-β-D-木吡喃糖苷。

化合物3 7結(jié)合一個(gè)氫離子得到母離子m/z 663.410 1 [M＋H]＋，其保留時(shí)間為84.84 min，二級(jí)譜測(cè)得碎片離子m/z 645，根據(jù)文獻(xiàn)[25]以及碎片離子質(zhì)量，推測(cè)化合物為cimigenol型皂苷，準(zhǔn)分子離子失去一分子H2O得到碎片m/z 645 [M＋H－H2O]＋，結(jié)合文獻(xiàn)[25]數(shù)據(jù)推斷化合物37可能為25-O-乙酰升麻酮醇-3-O-α-L-阿拉伯糖苷。

化合物3 8失去一個(gè)氫離子得到母離子m/z 619.383 5 [M－H]－，其保留時(shí)間為88.85 min，檢測(cè)到二級(jí)碎片離子m/z 601，通過碎片m/z 601推測(cè)裂解途徑為準(zhǔn)分子離子失去一分子H2O，得到碎片m/z 601 [M－HH2O]－，此外，化合物還可與一分子醋酸離子形成加合離子m/z 665 [M＋HCOO]－。結(jié)合文獻(xiàn)[25]數(shù)據(jù)，推斷化合物38可能為升麻新醇木糖苷。

圖5 26-脫氧升麻烴（A）和升麻酮醇-3-O-α-L-阿拉伯糖苷（B）的裂解途徑Fig. 5 Fragmentation pathways of 26-deoxyactein (A), and cimigenol-3-O-α-L-arabinoside (B)

3 結(jié) 論

實(shí)驗(yàn)共鑒定了興安升麻中的38 種化學(xué)成分，其中包括18 個(gè)苯丙素類化合物，6 個(gè)含氮化合物，13 個(gè)皂苷類化合物以及1 個(gè)色原酮。以上成分中，苯丙素類具有抗腫瘤、抗HIV、抗氧化、抗炎、抗微生物、抗凝血等方面的生物活性，某些苯丙素還有降血脂、降血壓、降血糖、抗血栓、抗突變、抗早孕，抗毒蛇，鎮(zhèn)痛鎮(zhèn)靜等作用[29]；生物堿類具有抗炎、抗菌、擴(kuò)張血管、強(qiáng)心、平喘、抗癌等作用[30]；皂苷類具有調(diào)節(jié)免疫能力、護(hù)腦護(hù)心、延緩衰老、抗腫瘤、擴(kuò)張腦血管、增加血流量、抑制中樞神經(jīng)和中樞鎮(zhèn)靜的作用，還能補(bǔ)氣生血[31]。興安升麻可治療圍絕經(jīng)期綜合征，具有抗腫瘤、抗骨質(zhì)疏松、抗炎、免疫抑制作用以及降糖作用等[32]，推測(cè)與上述成分的多種藥理活性協(xié)同發(fā)揮作用有關(guān)。綜上所述，本研究利用UPLC-Q-TOF-MS技術(shù)，對(duì)興安升麻的甲醇提取物進(jìn)行了多個(gè)成分的鑒定，可為后續(xù)進(jìn)一步的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)及質(zhì)量控制和臨床應(yīng)用提供一定的參考。