姜會真，金曉飛，閆麗萍，冀雨芳，燕 平，司佳弘，李佳茹，曹韻茗

（山西中醫(yī)藥大學(xué)針灸推拿學(xué)院，山西晉中030619）

隨著現(xiàn)代科學(xué)的發(fā)展，對針灸的研究不斷深入，迫切需要在針灸實驗動物過程當(dāng)中尋求較為恰當(dāng)?shù)姆椒ㄟM行固定，然后進行針刺干預(yù)。以大鼠為例，對大鼠進行穴位定位后，根據(jù)不同干預(yù)的要求，加上運用不同的針刺方法，在實際操作過程當(dāng)中，給科研實驗及教學(xué)實踐帶來一定困難，迫切需要客觀、可靠的固定方法。隨著與國際接軌，以人文關(guān)懷的實驗動物，根據(jù)實驗動物倫理學(xué)要求，以3R原則為指導(dǎo)［1］，減少對動物的不必要的傷害和刺激，達到最佳的治療目的。筆者通過提供更多固定的方法，為廣大科研工作者及教學(xué)實踐者提供更加符合實際應(yīng)用、取材簡便、制作簡單、不易損壞的動物固定方法。

針刺大鼠過程的具體固定方法：以SPF級SD雌性大鼠，9 w左右，約275 g為例，許可證號：SCXK（京）2016-0006，北京維通利華動物技術(shù)有限公司。

1 麻醉狀態(tài)下

1.1 麻醉束縛法

結(jié)果見圖1。

圖1 麻醉束縛法

操作需要物品準(zhǔn)備：提前配制好水合氯醛、一次性注射器1 mL、橡皮筋5個、紙板或木板一塊，長約29.5 cm、寬約18 cm、厚約0.5 cm，燕尾夾5個。具體操作方法：腹腔注射10%水合氯醛，麻醉生效后，用橡皮筋進行捆綁，俯臥位、仰臥位都需固定四肢及牙齒。根據(jù)實驗操作目的予以針刺治療及治療時間要求進行固定，一般束縛時間不超過1 h，避免遠端肢體因束縛導(dǎo)致缺血壞死。

本操作的優(yōu)點：能夠讓大鼠的穴位更加暴露，更具有準(zhǔn)確性，取穴方便，大鼠不會躁動。非束縛下的大鼠穴位不如束縛下暴露充分，影響取穴的準(zhǔn)確性。

缺點：麻醉狀態(tài)下如果麻醉深度把控不住，可能在麻醉狀態(tài)下造成死亡；在針刺過程中，因為處于麻醉狀態(tài)下，可能導(dǎo)致信息傳導(dǎo)受阻，最終影響治療效果。盡管之前中國興起針刺麻醉和藥物麻醉組合進行手術(shù)導(dǎo)致實驗的結(jié)果不理想［2］?，F(xiàn)在已經(jīng)基本淘汰，但對于普通手術(shù)可采用此類方法進行手術(shù)。

1.2 麻醉自然法

結(jié)果見圖2。

操作需要物品準(zhǔn)備：除橡皮筋及燕尾夾外，余同上。本操作的優(yōu)點：未行束縛，干擾因素較少，減少應(yīng)激刺激，穴位選取方便。缺點：不如束縛下穴位暴露充分，麻醉可能導(dǎo)致死亡，影響經(jīng)氣感傳，對實驗針刺刺激減弱，可能影響較大。現(xiàn)在已經(jīng)基本淘汰。

2 非麻醉狀態(tài)下

2.1 高空孤立法

結(jié)果見圖3。

圖3 高空孤立法

操作需要物品準(zhǔn)備：礦泉水瓶或飲料瓶，透明膠帶，小木板 9 cm×7 cm，1.5～2 L容積的瓶子，瓶高約43 cm，直徑約7.5 cm。先將空瓶灌滿自來水，再將另外1個空瓶剪掉頭部，留下底座，罩在有水的瓶子上方，最后用膠布把空瓶與灌滿水的瓶子粘住。為使頂部平穩(wěn)，放上提前制作好的木板或紙板，然后用膠布粘住固定。

利用大鼠膽小的特性，讓大鼠脫離地面，用一個小型平板支撐，使大鼠盡量不動。治療過程當(dāng)中，大鼠會有大小便排出，最終會影響其固定。優(yōu)點：讓大鼠背部及頭部充分暴露，大鼠的人為刺激較少。缺點：腹部穴位不宜針刺；高臺固定通過膠布黏附大鼠［3］，造成大鼠的恐懼心理，可能造成大鼠的條件反射和軀體感覺誘發(fā)電位發(fā)生改變［4］，對實驗結(jié)果可能造成影響。

2.2 束縛法

結(jié)果見圖4。

圖4 非麻醉束縛法

操作需要物品準(zhǔn)備：利用木板、釘子6枚、繃帶，對大鼠進行束縛，最后綁成8字型。進行針刺治療部分穴位受束縛影響，但大部分背部及頭部穴位不受影響。木板長約18 cm、寬約7 cm、高約3.5 cm。中間有直徑約為5 cm的空心，與下方距離6 cm，上方距離11 cm，束縛繩長（紗布繃帶）約為1～1.5 m。優(yōu)點：較容易控制大鼠肢體，沒有麻醉帶來的可能影響，有利于背部穴位及四肢穴位暴露，不容易逃脫，有利于針刺。缺點：捆綁后，由于木板抵擋，不容易取胸腹部的穴位；大鼠束縛后掙扎可能導(dǎo)致胸廓壓迫縮小，最終導(dǎo)致窒息后死亡。隨著時間的推移，慢性束縛可能通過調(diào)節(jié)大鼠下丘腦弓狀核CART通路，對大鼠的食欲造成影響，體質(zhì)量下降［5］。束縛應(yīng)激可以使大鼠免疫功能顯著降低［6］。

2.3 鼠筒法

操作需要物品準(zhǔn)備：圓柱筒長18.5 cm，直徑5.5 cm，前后有閥門，可根據(jù)大鼠的體型大小進行調(diào)整。對大鼠進行針刺固定治療，較為方便快捷。優(yōu)點：利用大鼠鉆洞習(xí)性，可迅速使大鼠入內(nèi)，單獨一人即可完成。缺點：主要是穴位選取較為局限。牢籠稍微欠缺，因為型號固定，部分體型較小的大鼠可在內(nèi)部翻轉(zhuǎn)運動，而體型過大則不能塞入筒內(nèi)，李洋洋等［7］設(shè)計的大鼠頭部可能被卡住導(dǎo)致窒息死亡，落地后網(wǎng)筒易變形等缺點。結(jié)果見圖5。

圖5 鼠筒法

2.4 懸掛法

結(jié)果見圖6。

圖6 懸掛法

操作需要物品準(zhǔn)備：布或紗網(wǎng)狀織物、燕尾夾若干、掛繩，剪刀，布長約19 cm、寬約17 cm、離上方2 cm，用剪刀剪出前肢洞口長約2 cm，后肢長約3 cm，前肢和前肢兩者之間約4 cm，前后肢相距約12 cm。穿前肢后夾住上方，再穿后肢，用夾子夾住，最后夾在電線上。這是利用大鼠不能著力，并且掙脫困難的特點而制作的。優(yōu)點：減少對大鼠的人為刺激，穴位選取不受影響，必要時可以提前按穴位定位后剪一約0.5 cm大小的洞。缺點：穴位暴露稍受限制，部分大鼠束縛過松可造成大鼠掙脫，存在大鼠掉入地面受傷的風(fēng)險；針刺針在大鼠治療過程可能出現(xiàn)脫落狀況；在抓握過程中存在被大鼠咬傷的風(fēng)險。

3 結(jié)論

讓大鼠處于完全放松狀態(tài)下進行針刺治療，就目前水平而言基本上很難做到。初次接受針刺大鼠躁動不安較為明顯，一般隨著固定次數(shù)越多，后期大鼠較為適應(yīng)這種刺激，固定時相對較為安靜，較為配合固定。根據(jù)針刺的部位來選擇適合的固定方法，以腰背部腧穴為主，選擇順序為孤立高臺法>牢籠法>懸掛法>木板捆綁法>麻醉非束縛法>麻醉束縛法；以胸腹部選穴為主，選擇順序為優(yōu)化牢籠法>懸掛法>麻醉束縛法>麻醉非束縛法>木板束縛法。牢籠法及懸掛法較為實用，操作簡便，其他固定方法使選穴局限。高臺法除了胸腹取穴不方便外，在固定方法中大鼠相對處于較為放松的狀態(tài)；捆綁法大鼠死亡率最高，逃脫也較高；麻醉法因麻醉狀態(tài)而導(dǎo)致死亡率最高，其他方法逃脫率較大。固定方法可根據(jù)大鼠的大小靈活設(shè)計。

4 討論

根據(jù)大鼠的生理學(xué)特性，大鼠天性膽小，容易受外界刺激的干擾和影響；針刺對大鼠來說是一種相對較為強烈的傷害性刺激，加之市面上的一些大鼠使用的針具及艾灸材料不夠完善，匹配程度較差，就體格來講，對大鼠來說相對較大；由于大鼠的伸縮性較好，皮膚及肌肉之間錯開的范圍相對較大，束縛后造成穴位定位稍有偏差，可能影響到治療效果，最終可能會對實驗數(shù)據(jù)造成影響。

固定器械的設(shè)計目的應(yīng)主要滿足以下幾點要求：第一、治療時穴位要充分暴露；第二、盡量讓大鼠處于放松狀態(tài)，減少應(yīng)激刺激，避免干擾和影響；第三、總體時間需要維持到治療結(jié)束；第四、避免在抓握過程當(dāng)中被大鼠咬傷，實驗過程安全性第一；第五、治療過程中盡量降低大鼠死亡率，以便實驗最終順利進行，以不影響實驗為目的等。部分實驗需進一步研究，以高度為例，在多少范圍內(nèi)才為最佳高度，未能做出較為客觀依據(jù)，對大鼠應(yīng)激最小，在實驗過程當(dāng)中對大鼠外界干擾因素較少；為此，通過多方面的評估，以及所在實驗室所能夠就地取材，為廣大科研工作者及教學(xué)實踐者提供更具有科學(xué)及實用性的方法，為針刺實際操作過程中提供較為客觀的指導(dǎo)方針。

固定方法同時可以為尾部采血［8］、尾部注射、紅外照射［9］等提供合理的要求，因此可以拓展其應(yīng)用范圍，不僅局限于針刺干預(yù)。固定器本身的材質(zhì)要求，主要以牢固、原材料容易獲取、價格較為低廉、制作簡便、實用等，上方描述的六大類方法，基本能夠滿足目前實際運用操作。

固定方法的具體設(shè)計還需要科學(xué)的進一步制定，就布料而言就是一個比較大的問題，及其四肢洞的距離，離地面懸空高度等，以哪種最為合適，通過大量的動物實驗，檢測對其體內(nèi)物質(zhì)水平改變，從多方面考慮選取影響最小的固定方法，來得出較為科學(xué)嚴(yán)緊的結(jié)論，為最佳大鼠固定方法提供依據(jù)。