韓 勇 李 英 劉玉潔

1.山東省日照市畜牧獸醫(yī)管理服務(wù)中心，山東日照276800；

2.山東省五蓮縣畜牧獸醫(yī)管理服務(wù)中心叩官畜牧獸醫(yī)站，山東五蓮262300

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起的急性、熱性、高度接觸性的傳染病，主要感染豬、羊、牛等動物，尤其以牛、羊發(fā)病率為多。本病具有流行性快、傳播廣、發(fā)病急、危害大等流行病學(xué)特點。病畜和帶毒畜是主要的傳染源，它們既能通過直接接觸傳染，又能通過間接接觸傳給易感動物。口蹄疫發(fā)生有嚴(yán)格的季節(jié)性，它可以發(fā)生在全年的任何月份[1]。

目前，我國主要采取以免疫注射為主的綜合性防控措施來預(yù)防和控制口蹄疫。通過免疫監(jiān)測，可以及時了解口蹄疫免疫后的效果，準(zhǔn)確掌握疫情動態(tài)，根據(jù)免疫抗體水平科學(xué)地進(jìn)行綜合免疫預(yù)防，以便預(yù)測疫病的動態(tài)，控制疫病的發(fā)展。為此，日照市動物疫病預(yù)防控中心在全市牛羊場進(jìn)行隨機抽樣，開展免疫效果監(jiān)測，以掌握全市牛羊場O 型口蹄疫抗體水平。

1 材料與方法

1.1 試驗時間、地點

本試驗研究于2019年7月7—10日在日照市動物疫病預(yù)防控中心進(jìn)行。

1.2 血清樣品

為配合日照市春季防疫檢查工作，進(jìn)行牛羊口蹄的免疫效果監(jiān)測，日照市動物疫病預(yù)防控制中心于2019年6月下旬對全市4 個區(qū)縣共8 家規(guī)?；Ｑ驁鲞M(jìn)行了抽樣檢測，共抽查240 份血清。

1.3 檢測試劑

O 型口蹄疫抗體液相阻斷ELISA 試劑、標(biāo)準(zhǔn)陽性血清和標(biāo)準(zhǔn)陰性血清均購自中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所，生產(chǎn)批號為20190610101-1。

1.4 儀器設(shè)備

MultIIskan GO 酶標(biāo)儀，美國賽默飛（Thermo-Fisher）公司；GZX9140 恒溫培養(yǎng)箱，上海博迅公司；移液器，德國賽多利斯（Sartorius）公司。

1.5 口蹄疫抗體的檢測

1）抗原抗體反應(yīng)：在U 型血凝板上將待檢血清從1∶16 倍比稀釋至1∶128，然后每孔加稀釋的病毒抗原50 μL，封板，4 ℃過夜。

2）ELISA 板洗5 次，將抗原抗體混合物50 μL移至ELISA 板上，37 ℃1 h。

3）洗5 次，加入50 μL 豚鼠抗血清，37 ℃30 min。

4）洗5 次，加入50 μL 酶結(jié)合物，37 ℃30 min。

5）洗5 次，加入50 μL 底物，37 ℃15 min。

6）加入50 μL 終止液，立即在波長450 nm 處讀取光吸收值（OD 值）。

7）結(jié)果判定：陽性對照效價≥1∶（1 024±1），陰性對照效價≤1∶8。臨界值=抗原對照OD 值/2。被檢樣品大于臨界值為陰性，小于臨界值為陽性。

2 牛羊O 型口蹄疫檢測結(jié)果

O 型口蹄疫抗體檢測結(jié)果見表1。由表1可見，血清檢測240 份，免疫合格220 份，抗體總體合格率91.7%。其中奶牛、肉牛、羊三者的免疫合格率分別為100.0%、83.3%和75.0%。

表1 O 型口蹄疫抗體檢測結(jié)果

3 討 論

3.1 檢測總體情況分析

抽檢了全市4 個區(qū)縣8 家規(guī)?；Ｑ驁?，其中奶牛場5 家，肉牛場1 家，羊場2 家。樣品共240份。從檢測結(jié)果來看，O 型口蹄疫總體免疫合格率為91.7%，符合國家要求。其中奶牛、肉牛、羊三者的免疫合格率分別為100.0%、83.3%和75.0%。

3.2 抗體水平差異原因

奶牛的抗體水平最高，免疫合格率達(dá)到100%，這是因為奶牛生長周期長，一般經(jīng)過多次免疫，抗體水平普遍高。肉牛和羊由于飼養(yǎng)周期短，僅免疫1～2 次，抗體水平明顯低于奶牛。

3.3 疫苗免疫效果分析

通過養(yǎng)殖戶了解到有些動物群體在接種疫苗后的整體狀況較差，對疫苗的刺激反應(yīng)比較大。表明不同個體即使是相同的免疫程序，所產(chǎn)生的免疫效果也不一樣，主要與群體先天狀況和養(yǎng)殖場環(huán)境、飼養(yǎng)管理水平有關(guān)。

3.4 口蹄疫液相阻斷ELISA 試驗分析

所采取的口蹄疫液相阻斷ELISA 試驗，不僅能判定口蹄疫抗體的陰陽性，還能判定口蹄疫抗體的滴度，從而可以根據(jù)滴度制定科學(xué)的免疫程序?？谔阋咭合嘧钄郋LISA 試驗檢測1 個樣品可以設(shè)計4～8 個滴度，而1 個ELISA 板只能檢測10～20 個樣品，成本較高[2]。因此，實驗室可以根據(jù)具體的實際情況，自行設(shè)計布局，增加檢測樣品數(shù)量。

目前，日照市進(jìn)行免疫的豬口蹄疫疫苗主要有2 種，一是口蹄疫O 型滅活苗，二是口蹄疫合成肽疫苗。在進(jìn)行口蹄疫免疫抗體檢測時，對豬免疫口蹄疫合成肽疫苗，要使用專門的口蹄疫合成肽ELISA 試劑盒進(jìn)行檢測，不能使用液相阻斷ELISA 試劑盒。