王超，謝燕娟，鄭秀妍，沈西華，江滕，牛肖，賈薇，龐麗娟，鄒泓

(石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院/新疆地方與民族高發(fā)病教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室,新疆 石河子 832002)

子宮內(nèi)膜癌(endometrial carcinoma，EC)是女性常見的惡性腫瘤之一，可分為I型EC(雌激素依賴型)和II型EC(非雌激素依賴性)[1]，I型EC又稱子宮內(nèi)膜樣癌(endometrioid adenocarcinoma，EA)，約占所有EC的80%[2]，其危險(xiǎn)因素包括雌激素總體濃度較高、絕經(jīng)時(shí)間晚以及肥胖等[3]。

研究顯示脂質(zhì)代謝異常可能促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌雌激素受體(ER)和孕激素受體(PR)的表達(dá)增強(qiáng)[4]，膽固醇是雌孕激素合成的主要原料之一，故我們推測(cè)脂質(zhì)代謝異?？赡軈⑴c其I型EC的發(fā)病機(jī)制。

B類1型清道夫受體(Scavenger receptor class B type 1，SR-B1)是調(diào)節(jié)高密度脂蛋白(HDL)的關(guān)鍵分子[5]，其表達(dá)主要促進(jìn)細(xì)胞對(duì)HDL膽固醇的選擇性吸收，主要分布于依賴HDL游離膽固醇和膽固醇酯的組織。已有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明SR-B1在犬子宮內(nèi)膜表面上皮的正常表達(dá)可能參與受精卵的植入和胚胎發(fā)育[6]，SR-B1的過表達(dá)可能參與乳腺癌、前列腺癌、腎癌等的發(fā)生與進(jìn)展[7-10]。

故我們推測(cè)SR-B1可能在I型EC中表達(dá)異常且與ER、PR及Ki-67表達(dá)相關(guān)，但國(guó)內(nèi)外均未見SR-B1在EC中表達(dá)的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。

本研究擬通過檢測(cè)SR-B1、ER、PR、Ki-67蛋白在I型EC與增生改變子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)，比較表達(dá)差異，結(jié)合臨床病理資料，探討SR-B1在I型子宮內(nèi)膜樣癌中發(fā)生、發(fā)展的意義。

1 材料與方法

1.1 試劑免疫組化相關(guān)試劑

兔抗人SR-B1多克隆抗體(克隆號(hào)1556Y，Abcam公司)，ER、PR、Ki-67單克隆抗體(克隆號(hào)分別為6F11，EP2，UMAB107，北京中杉金橋公司)；免疫組化Envision法試劑盒(北京中杉金橋)、PBS緩沖液(上海生物工程)，DAB顯色試劑(ZLI-9019，丹麥Dako公司)。

1.2 研究樣本

收集80例2011年至2016年新疆石河子大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院病理科存檔資料中診斷為“I型子宮內(nèi)膜樣癌”(EC)的臨床及病理資料，并選取47例診斷為增生改變子宮內(nèi)膜作為對(duì)照組。腫瘤患者需滿足：(1)初次手術(shù)；(2)所選患者術(shù)前均未接受放、化治療；(3)均為原發(fā)性子宮內(nèi)膜癌患者。年齡36-76歲，平均年齡約54.24歲。采用2014年國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟(FIGO)制定的手術(shù)-病理分期對(duì)全部腫瘤進(jìn)行分級(jí)分期[11]。

1.3 免疫組織化學(xué)

本實(shí)驗(yàn)采用Envision二步法，檢測(cè)SR-B1、ER、PR、Ki-67蛋白表達(dá)情況，工作液濃度比均為(1∶150)，PBS無菌液代替一抗作為空白對(duì)照。

1.4 染色結(jié)果判斷

SR-B1蛋白定位于胞漿/膜，陽性表達(dá)顯示為棕褐色顆粒物。每張切片隨機(jī)選取5個(gè)視野(×40)，根據(jù)細(xì)胞染色強(qiáng)度與陽性細(xì)胞數(shù)綜合打分，陽性細(xì)胞數(shù)<5%為0分，6%-25%為1分，26%-50%為2分，51%-75%為3分，76%-100%為4分[12]。著色強(qiáng)度，無著色為0分，黃色為1分，棕黃色為2分，棕色為3分。所得分?jǐn)?shù)<3為(-)；3-5為(+)；6-9為(++)；>9為(+++)[13]。

SR-B1總分由陽性細(xì)胞百分比及著色強(qiáng)度綜合判斷(由兩項(xiàng)計(jì)分相乘所得)，其中(-)為陰性，(+)為陽性，(++/+++)為強(qiáng)陽性；Ki-67指數(shù)判讀中，根據(jù)樣本總體表達(dá)情況，將<30%為+，≥30%為++，≥60%為+++，以便于比較。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

計(jì)數(shù)資料用構(gòu)成比表示，比較兩組差異采用卡方檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用非參數(shù)檢驗(yàn)的spearman，所有數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行分析和處理，P<0.05(雙側(cè))為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 臨床病理學(xué)觀察

本組I型EC中，年齡36-76歲，中位年齡54歲。腫瘤大體表現(xiàn)為內(nèi)膜隆起、粗糙或乳頭狀，切面灰紅灰白，質(zhì)中或質(zhì)略脆。鏡下，腫瘤表現(xiàn)為明顯的腺體復(fù)雜性，呈分支腺管狀或篩狀結(jié)構(gòu)，可見乳頭形成，腫瘤腺體被覆柱狀上皮細(xì)胞，核相對(duì)一致，間質(zhì)顯著減少或纖維化(圖1)。

A—I型EC組織(HE×200)； B—增生改變子宮內(nèi)膜組織(HE×200)；C—I型EC組織中SR-B1蛋白的表達(dá)(×200, 膜/漿著色)； D—增生改變子宮內(nèi)膜組織中SR-B1蛋白的表達(dá)(×200倍, 膜/漿著色)；E—I型EC組織中ER蛋白的表達(dá)(×200倍)； F—I型EC組織中PR蛋白的表達(dá)(×200)倍； G—I型EC組織中Ki-67蛋白的表達(dá)(×200)倍。圖1 Ⅰ型EC中SR-B1、ER、PR、Ki-67表達(dá)Fig.1 The positive expression of SR-B1 ER PR Ki-67 in type I endometrial carcinoma

2.2 SR-B1、ER、PR和Ki-67在I型EC與對(duì)照增生改變子宮內(nèi)膜組織中的表達(dá)狀況

SR-B1、Ki-67在I型EC組織中陽性率分別為67.6%(50/74)、61.6%(45/73)，表達(dá)情況見表1，圖1-C、圖1-G，與對(duì)照組相比，有顯著性差異(P<0.05)；ER、PR在增生改變子宮內(nèi)膜組織中的陽性表達(dá)率分別為97.8%(44/45)、100%(42/42)，高于I型子宮內(nèi)膜樣癌組織中陽性表達(dá)率67.1%(49/73)、83.1%(59/71)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表達(dá)情況見表1、圖1E、圖1F。

表1 SR-B1、ER、PR和Ki-67在子宮內(nèi)膜中的表達(dá)Tab.1 The express of SR-B1、ER、PR and Ki-67 in endometrium

注：*P<0.05代表有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.3 SR-B1蛋白的表達(dá)與ER、PR、Ki-67蛋白在Ⅰ型EC中表達(dá)的相關(guān)性

為了探討SR-B1蛋白與ER、PR、Ki-67表達(dá)的相關(guān)性，將SR-B1、ER、PR按細(xì)胞染色強(qiáng)度分成兩組，一組為陰性和弱陽性(-/+)，另一組為中等陽和強(qiáng)陽性(++/+++)，Ki-67以<30%和≥30%分為兩組，結(jié)果顯示SR-B1的表達(dá)與ER、PR、Ki-67之間呈明顯正相關(guān)，且具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(圖1、表2)。

表2 在I型EC中SR-B1蛋白表達(dá)與ER、PR、Ki-67蛋白之間的關(guān)系Tab.2 Relationship between SR-B1 protein expression and ER, PR, Ki-67 of type I endometrial carcinoma

注：*P<0.05代表有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.4 SR-B1、ER、PR和Ki-67蛋白在Ⅰ型EC中的表達(dá)與臨床病理參數(shù)的關(guān)系

在本組Ⅰ型子宮內(nèi)膜樣癌中，顯示隨著FIGO分級(jí)級(jí)別增加，SR-B1表達(dá)的陽性率增高趨勢(shì)。FIGO分期中盡管顯示出II期SR-B1陽性率(69.2%，9/13)較I期SR-B1陽性率(50%，21/42)增高的現(xiàn)象，但不同F(xiàn)IGO分級(jí)與分期Ⅰ型子宮內(nèi)膜樣癌組織中SR-B1蛋白的表達(dá)無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)(表3)。

而且，Ⅰ型EC中SR-B1蛋白表達(dá)與其他臨床參數(shù)(年齡、絕經(jīng)期前后、腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、FIGO分級(jí))比較亦無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。在本組I型EC高分化癌中ER的表達(dá)高于中分化、低分化癌，且中分化癌的表達(dá)低于低分化癌，差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；I型EC中ER表達(dá)與其他臨床參數(shù)(年齡、絕經(jīng)期前后、腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、FIGO分期)比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。在本組I型EC中PR、Ki-67表達(dá)與臨床參數(shù)(年齡、絕經(jīng)期前后、腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、FIGO分級(jí)、分期)比較無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)(表3)。

表3 在Ⅰ型EC中SR-B1、ER、PR和Ki-67表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系Tab.3 Relationship between the expression of SR-B1、ER、PR、Ki-67 and clinicopathological factors of type I endometrial carcinoma

表3續(xù)

臨床病理特征NPR陽性X2PNKi-67陽性X2P年紀(jì)/歲絕經(jīng)期腫瘤侵潤(rùn)深度淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移FICO分級(jí)FICO分期<50歲≥50歲前后<1/2肌層>1/2肌層無有無有C1C2C3ⅠⅡⅢⅣ1934102230164944672327336125017(89.5)32(94.1)10(100)20(90.9)29(96.7)14(87.5)45(91.8)4(100)42(91.3)7(100)22(95.7)25(92.6)2(66.7)33(91.7)11(91.7)5(100)00.61210.274110.21411935102230164954772327437116011(57.9)24(68.6)7(70)14(63.6)18(60)12(75)31(63.3)4(80)29(6.17)6(85.7)14(60.9)19(70.4)2(50)25(67.6)5(45.5)5(83.3)00.53310.3520.6460.40.6070.408

注：*P<0.05代表有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討論

本項(xiàng)研究結(jié)果證實(shí)了假說，研究結(jié)果顯示，I型EC中SR-B1的表達(dá)顯著高于對(duì)照增生改變子宮內(nèi)膜，在I型EC中SR-B1高表達(dá)時(shí)，ER、PR、Ki-67的表達(dá)也相對(duì)較高，SR-B1與ER、PR、Ki-67的表達(dá)之間存在正相關(guān)，這提示SR-B1的過表達(dá)可能通過增加腫瘤細(xì)胞的膽固醇吸收，提高子宮內(nèi)膜癌雌激素受體(ER)和孕激素受體(PR)的表達(dá)，促進(jìn)癌細(xì)胞的增殖，參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展，這與I型EC的重要危險(xiǎn)因素為雌激素總體濃度較高、絕經(jīng)時(shí)間晚以及肥胖等[3]較一致，值得深入探討其相互作用的可能分子機(jī)制。

本研究顯示ER、PR在I型EC中較增生改變子宮內(nèi)膜相對(duì)低表達(dá)，ER在FIGO3級(jí)(低分化)中表達(dá)最低，這與Wik ER等發(fā)現(xiàn)EC的ER、PR表達(dá)存在一定缺陷一致[14]，Jeon YT等亦報(bào)道的女性生殖器官癌變且惡性程度到達(dá)一定程度后，女性生殖器官會(huì)失去相應(yīng)的性激素受體的結(jié)論一致[15]。若ER表達(dá)率較高時(shí)，往往采用性激素治療法較好[14]，SR-B1的表達(dá)與ER、PR正相關(guān)，提示若SR-B1的表達(dá)能夠誘導(dǎo)低分化EC恢復(fù)ER、PR的表達(dá)，可能提高EC對(duì)激素化療藥物治療的敏感性，值得深入研究。

目前有研究證實(shí)，SR-B1可能成為納米HDL遞送治療藥物(重組高密度脂蛋白納米粒子)的良好靶向通道[16-17]并提高靶向化療藥物療效；那么，是否可以在SR-B1陽性的I型子宮內(nèi)膜樣癌中，應(yīng)用HDL納米粒子，通過SR-B1通道遞送激素類治療藥物(甲地孕酮、他莫昔芬等)，從而提高癌細(xì)胞對(duì)藥物的精準(zhǔn)攝取，減少藥物的毒副作用，值得進(jìn)一步的探討。

結(jié)合臨床病理資料，我們分析了SR-B1、ER、PR、Ki-67蛋白表達(dá)與臨床病理參數(shù)(年齡、絕經(jīng)期、腫瘤浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、3級(jí)分類法、FIGO分期等)之間的關(guān)系。有文獻(xiàn)報(bào)道，SR-B1的高表達(dá)與腫瘤侵襲性、低存活率和預(yù)后不良相關(guān)[16,18,19]，而與I型子宮內(nèi)膜樣癌臨床參數(shù)的相關(guān)性暫無報(bào)道。此次研究結(jié)果顯示，隨著FIGO分級(jí)和組織分化程度的增加，SR-B1陽性率升高，提示在I型EC中，SR-B1的過表達(dá)可能參與I型EC的進(jìn)展，雖然不同分級(jí)與分期EC的SR-B1蛋白的表達(dá)無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，可能是由于樣本例數(shù)太少，存在偏倚和個(gè)體差異等，需要加大樣本進(jìn)一步分析。另外，本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在I型EC中ER的表達(dá)隨著FIGO的分級(jí)增高而降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，ER的低表達(dá)提示雌激素受體的丟失與EC更差的分化。Torres A等研究顯示ER、PR、的表達(dá)與患者的預(yù)后密切相關(guān)[20-21]，Ki-67的表達(dá)增高與FIGO分期、腫瘤浸潤(rùn)深度和組織分化程度相關(guān)[22]，但本研究結(jié)果與之不符，提示可能是樣本中高FIGO分級(jí)與分期樣本較少導(dǎo)致，尚需擴(kuò)大樣本分析總結(jié)。

綜上所述，SR-B1的過表達(dá)可能參與Ⅰ型子宮內(nèi)膜樣癌的發(fā)生發(fā)展，ER的低表達(dá)可能提示腫瘤更差的分化，值得深入研究其分子機(jī)制。