譚海東 夏紅兵 張冠群 王海霞 白會(huì)新 王連英 翟寶庫(kù)*

（1黑龍江省大慶市動(dòng)物疫病預(yù)防與控制中心，黑龍江大慶 163311；2黑龍江省大慶高新區(qū)東風(fēng)農(nóng)場(chǎng)，黑龍江大慶163311；3黑龍江省大慶市畜牧技術(shù)推廣站，黑龍江大慶 163311）

口蹄疫（Foot and mouth disease，F(xiàn)MD）是由口蹄疫病毒（Foot and mouth disease virus，F(xiàn)MDV）引起偶蹄動(dòng)物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，口蹄疫病毒有7個(gè)血清型[1]?？谔阋呤俏：ωi只健康、影響?zhàn)B豬業(yè)發(fā)展的重大疫病之一，也是影響食品安全的重大疫病之一，呈全球分布，國(guó)際動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為A類疫病，我國(guó)將其列為一類疫病。目前只有少數(shù)發(fā)達(dá)國(guó)家已消滅口蹄疫，達(dá)到不實(shí)施免疫的無(wú)疫情狀態(tài)，多數(shù)發(fā)展中國(guó)家仍呈地方性流行或散發(fā)之勢(shì)。近年來(lái)，我國(guó)周邊國(guó)家的豬口蹄疫疫情不斷，國(guó)內(nèi)疫情呈非季節(jié)性散發(fā)，時(shí)高時(shí)低，嚴(yán)重威脅區(qū)域畜牧業(yè)發(fā)展，尤其是口蹄疫病毒新毒株的出現(xiàn)和流行，使疫病防控更趨復(fù)雜。

為了解黑龍江省大慶市不同區(qū)域豬O型口蹄疫疫情的流行態(tài)勢(shì)，本文對(duì)不同養(yǎng)殖方式防控差異及區(qū)域整體防控效果進(jìn)行監(jiān)測(cè)分析，選出更加優(yōu)化的排查和防控疫情的方法，確保免疫密度和質(zhì)量，消除防控隱患。針對(duì)2016—2018年大慶市不同地域、不同時(shí)段、不同群體、不同飼養(yǎng)方式采集的2 464份血清樣品，以及在屠宰場(chǎng)和病豬場(chǎng)采集的278份豬淋巴結(jié)樣品，應(yīng)用RT-PCR和非結(jié)構(gòu)蛋白ELISA方法進(jìn)行病原檢測(cè)，液相阻斷ELISA方法進(jìn)行免疫抗體檢測(cè)。分析豬群口蹄疫流行動(dòng)態(tài)和整體防疫效果，為區(qū)域疫情預(yù)警、免疫防疫提供支持。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品來(lái)源

被檢動(dòng)物血清樣品來(lái)源于大慶市不同區(qū)域的規(guī)模豬場(chǎng)、散養(yǎng)戶和屠宰場(chǎng)，共2 464份；淋巴結(jié)樣品來(lái)源于屠宰場(chǎng)和病豬場(chǎng)，共278份。

1.1.2 疫苗及檢測(cè)試劑

采樣豬場(chǎng)所用豬O型口蹄疫疫苗均來(lái)自政府采購(gòu)。主要檢測(cè)試劑有：口蹄疫病毒通用型檢測(cè)試劑盒（RT-PCR法）、口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體檢測(cè)試劑盒和口蹄疫液相阻斷ELISA檢測(cè)試劑盒，以上檢測(cè)試劑均是政府采購(gòu)。

1.2 方法

1.2.1 樣品采集及制備

隨機(jī)采集規(guī)模豬場(chǎng)、散養(yǎng)戶和屠宰場(chǎng)內(nèi)豬的血清樣品，每頭豬采血1～2 mL，4℃放置1～2 h，3 000 r/min離心10 min， 分離血清，- 20℃保存?zhèn)溆谩ｋS機(jī)采集屠宰場(chǎng)和病豬場(chǎng)的豬淋巴結(jié)樣品，- 20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 檢測(cè)方法

按所購(gòu)檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書的方法進(jìn)行操作和判斷。

2 結(jié)果

2.1 實(shí)時(shí)熒光PCR法 （RT-PCR）檢測(cè)結(jié)果

屠宰場(chǎng)和病豬場(chǎng)的278份淋巴結(jié)樣品，經(jīng)RT-PCR檢測(cè)結(jié)果全部陰性（部分檢測(cè)結(jié)果見圖1）。表明大慶市對(duì)豬O型口蹄疫的防控效果良好，沒有發(fā)生過(guò)該疫情。

2.2 口蹄疫病毒非結(jié)構(gòu)蛋白抗體檢測(cè)結(jié)果

按地理位置和養(yǎng)殖形式，將大慶市劃分為兩肇區(qū)（肇州縣和肇源縣）、林杜區(qū)（林甸縣和杜爾伯特蒙古族自治縣）、紅大區(qū)（紅崗區(qū)和大同區(qū)）及市中心區(qū)4個(gè)區(qū)域。2016—2018年共抽檢746份血清樣品，非結(jié)構(gòu)蛋白抗體檢測(cè)結(jié)果全部陰性，表明目前大慶市沒有豬口蹄疫疫情發(fā)生（表1）。

圖1 口蹄疫病毒實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增結(jié)果

表1 豬口蹄疫非結(jié)構(gòu)蛋白抗體檢測(cè)結(jié)果

2.3 免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2.3.1 不同年份豬O型口蹄疫免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2016—2018年連續(xù)3年共檢測(cè)豬血清樣品2 464份，豬O型口蹄疫免疫抗體合格率在74.26%～82.70%之間，均超過(guò)農(nóng)業(yè)主管部門要求的70%最低臨界點(diǎn)，按年份比較，抗體合格率逐年遞增（表2）。

表2 不同年份豬O型口蹄疫免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2.3.2 不同地區(qū)豬O型口蹄疫免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2016—2018年所檢測(cè)的2 464份血清樣品中，按區(qū)域分紅大區(qū)抗體合格率為77.11%、林杜區(qū)抗體合格率為78.78%、兩肇區(qū)抗體合格率為81.13%、中心區(qū)抗體合格率為78.20%（表3）。以上抗體合格率均大于70%的抗體合格臨界點(diǎn)，兩肇區(qū)抗體合格率最高，紅大區(qū)最低，但區(qū)域間差異不顯著（＞0.05）。

表3 不同地區(qū)豬O型口蹄疫免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2.3.3 不同來(lái)源豬O型口蹄疫免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

2016—2018年的2 464份血清樣品中，按照血清來(lái)源檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，規(guī)模場(chǎng)的豬O型口蹄疫疫苗抗體合格率為84.89%、散養(yǎng)戶豬血清的抗體合格率為76.54%、屠宰場(chǎng)豬血清的抗體合格率為68.42%（表4）。由此可知，規(guī)模場(chǎng)豬的抗體合格率最好、散養(yǎng)戶次之、屠宰場(chǎng)較差。屠宰場(chǎng)豬血清的抗體合格率已低于70%臨界點(diǎn)，說(shuō)明屠宰前的豬群抗體保護(hù)不合格。

表4 不同來(lái)源豬O型口蹄疫免疫抗體檢測(cè)結(jié)果

3 討論

口蹄疫是威脅養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展的多種動(dòng)物共同感染的烈性疫病，宿主較為廣泛。目前我國(guó)采取強(qiáng)制監(jiān)測(cè)和強(qiáng)制免疫方式防控。按農(nóng)業(yè)農(nóng)村部要求，各級(jí)動(dòng)物疫病控制單位按月進(jìn)行日常監(jiān)測(cè)，每年春秋2季進(jìn)行集中監(jiān)測(cè)，評(píng)估疫情流行動(dòng)態(tài)和免疫保護(hù)效率，提高預(yù)警、預(yù)報(bào)能力。在各級(jí)政府和業(yè)務(wù)部門的共同努力下，我國(guó)口蹄疫疫情雖然沒有完全凈化，卻也沒有造成地方性流行，始終處在點(diǎn)式散發(fā)狀態(tài)，年發(fā)病率忽高忽低，不同程度威脅區(qū)域畜牧業(yè)生產(chǎn)。據(jù)農(nóng)業(yè)農(nóng)村部網(wǎng)站公布的數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，2010年6月21日至2019年4月2日全國(guó)共發(fā)生口蹄疫疫情96起，其中O型口蹄疫71起，占73.96%，其中豬疫情31起，占43.66%。在全國(guó)疫情中，口蹄疫疫情多發(fā)于西北、西南地區(qū)，東北地區(qū)發(fā)生疫情較少，僅2012年遼寧大連發(fā)生1起，2019年內(nèi)蒙古赤峰發(fā)生1起。2010年6月21日至今我國(guó)發(fā)生的疫情中，僅2018年就有27起疫情，占近年發(fā)生疫情的28.13%，有明顯抬頭之勢(shì)。雖然，大慶市近幾年的豬O型口蹄疫抗體檢測(cè)中合格率達(dá)標(biāo)，但受周邊國(guó)家和國(guó)內(nèi)疫情增加的威脅，以及疫點(diǎn)地理位置的影響，大慶市區(qū)域防控壓力明顯增加，現(xiàn)階段加大強(qiáng)制監(jiān)測(cè)密度對(duì)區(qū)域疫情防控及預(yù)警有積極意義。

強(qiáng)制免疫是在現(xiàn)有飼養(yǎng)條件、防控技術(shù)和國(guó)民經(jīng)濟(jì)承受能力下，養(yǎng)殖業(yè)受到重大動(dòng)物疫病威脅時(shí)國(guó)家采取的一種防控舉措。動(dòng)物免疫抗體水平反映的是機(jī)體本身抗擊同類病原的感染能力，在評(píng)價(jià)群體動(dòng)物群內(nèi)抗感染能力時(shí)，免疫抗體合格率是一項(xiàng)重要指標(biāo)。在確定抗體保護(hù)臨界標(biāo)準(zhǔn)情況下，免疫合格率越高，動(dòng)物群內(nèi)抗感染能力越強(qiáng)，發(fā)生疫病風(fēng)險(xiǎn)越低；反之，群內(nèi)抗感染能力越低，發(fā)生疫病風(fēng)險(xiǎn)越高。因此，在現(xiàn)有防控條件下，加強(qiáng)免疫抗體檢測(cè)，盡早發(fā)現(xiàn)免疫抗體合格率低下動(dòng)物，及時(shí)補(bǔ)免，可明顯提高免疫抗體合格率，增強(qiáng)群體抗感染能力。

我國(guó)規(guī)定在豬O型口蹄疫、豬瘟等重大疫病防控中，動(dòng)物群體的免疫抗體合格率應(yīng)在70%以上，這樣動(dòng)物群體才能有較好的抗感染能力，絕大部分個(gè)體能夠抵御同型野毒的攻擊，可防止疫病暴發(fā)。經(jīng)多年免疫防控，當(dāng)前我國(guó)絕大多數(shù)地區(qū)口蹄疫免疫效果較好。據(jù)楊國(guó)麗等[2]報(bào)道，2012—2015年遼寧省豬O型口蹄疫免疫總合格率在84.72%～89.99%之間。孫玉霜等[3]報(bào)道2014年天津地區(qū)種豬場(chǎng)、規(guī)模場(chǎng)和散養(yǎng)戶豬O型口蹄疫免疫抗體合格率分別為93.37%、84.89%、82.68%，總合格率為84.97%。黃剛等[4]報(bào)道2015年甘肅寧縣規(guī)模場(chǎng)、散養(yǎng)戶和市場(chǎng)豬O型口蹄疫免疫抗體合格率分別為89.50%、81.25%、91.67%，總合格率為87.47%。說(shuō)明在強(qiáng)制免疫和持續(xù)監(jiān)測(cè)下，我國(guó)現(xiàn)階段大部分地區(qū)豬O型口蹄疫的免疫抗體合格率已在80%以上，基本保證了絕大多數(shù)地區(qū)處在免疫無(wú)疫情狀態(tài)，很好地維護(hù)了畜牧業(yè)生產(chǎn)。本次監(jiān)測(cè)大慶市2016—2018年規(guī)模場(chǎng)、散養(yǎng)戶和屠宰場(chǎng)抗體合格率分別為84.89%、76.54%、68.42%，總合格率為78.81%。與以上報(bào)道相比，總合格率偏低，這主要是個(gè)別批次抗體合格率偏低所致，尤其散養(yǎng)戶和屠宰場(chǎng)，有的批次抗體合格率僅30%左右，說(shuō)明在現(xiàn)有技術(shù)條件下，大慶市的豬O型口蹄疫防控還需要完善和提升。

據(jù)王海軍等[5]報(bào)道，2014—2015年吉林延邊地區(qū)部分規(guī)模豬場(chǎng)母豬、哺乳仔豬和育肥豬O型口蹄疫免疫抗體合格率分別為72.22%、63.16%和93.44%，總合格率80.34%。與本文監(jiān)測(cè)結(jié)果比較，規(guī)模豬場(chǎng)母豬和哺乳仔豬的免疫抗體合格率偏低，育肥豬的免疫抗體合格率偏高，總合格率基本一致，說(shuō)明在我國(guó)各地應(yīng)用現(xiàn)有防控體系中，群內(nèi)抗體安全保護(hù)水平不能平穩(wěn)維持到一個(gè)飼養(yǎng)周期，疫苗保護(hù)力存在半衰期，這是現(xiàn)階段各地存在散發(fā)病例的重要因素。因此，豬場(chǎng)在疫苗免疫和抗體監(jiān)測(cè)中，需要關(guān)注哺乳期、疫苗免疫前期以及出欄前期幾個(gè)節(jié)點(diǎn)的抗體水平，同時(shí)注意加強(qiáng)管理，避免漏免或免疫劑量不足現(xiàn)象的發(fā)生。

豬群整個(gè)飼養(yǎng)周期的抗體保護(hù)水平與母豬免疫、仔豬初免時(shí)間和抗體持續(xù)期有關(guān)。做好母豬免疫，合理確定初免和加強(qiáng)免疫規(guī)劃，解決程序缺陷是保持群體免疫合格率持續(xù)平穩(wěn)的關(guān)鍵。仔豬哺乳期抗體保護(hù)來(lái)源于母體，做好母豬免疫可使仔豬獲得足夠的母源抗體；合理實(shí)施母豬免疫，掌握仔豬母源抗體安全保護(hù)邊界，及時(shí)免疫可平穩(wěn)過(guò)渡抗體保護(hù)狀態(tài)。當(dāng)前，應(yīng)用的豬O型口蹄疫疫苗，母源抗體對(duì)免疫抗體產(chǎn)生影響較小，說(shuō)明在母源抗體較高的情況下對(duì)仔豬進(jìn)行初免口蹄疫疫苗是可行的，效果也較好，這一結(jié)果在另一個(gè)試驗(yàn)[6]中得到證實(shí)。

免疫效果與疫苗本身有關(guān)，豬口蹄疫疫苗已研究多年，生產(chǎn)工藝有了明顯改善，疫苗質(zhì)量顯著提高，免疫原性較好，免疫副反應(yīng)明顯降低。據(jù)覃勇等[7]報(bào)道，豬O型口蹄疫滅活疫苗單次頸部注射免疫，散養(yǎng)村免疫抗體合格率為91.7%。筆者研究團(tuán)隊(duì)發(fā)現(xiàn)，單次免疫，一般在免疫28天后達(dá)到高峰期，抗體合格率為90%～100%，但免疫維持期較短，育肥豬出欄前需加強(qiáng)免疫。以上多數(shù)報(bào)道的免疫程序是按傳統(tǒng)的春秋2季免疫加補(bǔ)免程序，在免疫1個(gè)月左右抽樣檢測(cè)，即在高峰期檢測(cè)，合格率較高。免疫抗體合格率的高低與采樣時(shí)間有關(guān)，按月統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)免疫合格率呈現(xiàn)遞減趨勢(shì)，出欄前期免疫抗體合格率較低。

口蹄疫防控比較復(fù)雜，這與口蹄疫病毒血清型和亞型較多有關(guān)，不同血清型之間交叉保護(hù)較低，同型內(nèi)不同亞型之間交叉保護(hù)不高，在毒株的進(jìn)化中，新舊毒株之間交叉保護(hù)差異也較大，這就要求在實(shí)施免疫中，應(yīng)用的疫苗要有針對(duì)性。一般在口蹄疫疫病流行過(guò)程中，毒株并不一定是單一一種，一個(gè)地方可能同時(shí)或交錯(cuò)流行幾個(gè)毒株，這使防控形勢(shì)非常嚴(yán)峻。豬O型口蹄病毒流行毒株，舊毒株以O(shè)R/80等為代表，新毒株以90年代的TW/97和20世紀(jì)初的GX/09-7等為代表，以及東南亞傳入的Mya-98株等。豬場(chǎng)在選擇口蹄疫疫苗時(shí)要根據(jù)當(dāng)?shù)丶爸苓叺貐^(qū)流行狀態(tài)確定，做到有目的的實(shí)施。