馬子君，姜文月*，曲佳樂(lè)，蘇 婷 ，崔憲利

(1.吉林省現(xiàn)代中藥工程研究中心有限公司，吉林長(zhǎng)春 130012；2.吉林長(zhǎng)白山藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，吉林白山 134300)

精芪雙參膠囊，主要治療心腦血管疾病。精選黃芪、丹參、人參、黃精四味中藥組方，心腦同治，具有補(bǔ)氣養(yǎng)陰、活血化瘀、養(yǎng)心安神之功效，用于心腦血管疾病平穩(wěn)期治療兼預(yù)防，尤其對(duì)于亞健康人群心腦血管病的預(yù)防及心腦血管病引起的腦血栓等癥的后期治療，療效確切，反饋良好。

中藥組方遵循傳統(tǒng)的君臣佐使配伍原則，處方各藥味配伍協(xié)同發(fā)揮療效。本研究采用現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)，論證組方各藥味的藥效支撐作用，通過(guò)處方藥味敲除法分別制備同工藝陰性樣品，利用亞硝酸鈉中毒引起的小鼠組織缺氧模型，從提高機(jī)體抗缺血缺氧能力的角度分析處方中各藥味補(bǔ)氣養(yǎng)陰功效；利用鹽酸腎上腺素所致大鼠急性血瘀模型，從改善血液黏度、延長(zhǎng)凝血時(shí)間的角度分析處方中各藥味活血化瘀功效。通過(guò)研究，首次以現(xiàn)代藥理實(shí)驗(yàn)闡述精芪雙參膠囊抗缺氧、活血化瘀的藥效作用，以及組方各藥味協(xié)同配伍的藥效支撐作用，為產(chǎn)品藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升提供支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)藥物

精芪雙參膠囊(批號(hào)：150819，有效期36個(gè)月)，由吉林長(zhǎng)白山藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司提供。

1.2 動(dòng)物

Wistar大鼠(SPF級(jí)，體重180～220 g)、ICR小鼠(SPF級(jí)，體重18～22 g)，動(dòng)物合格證為SCXK(吉)-2016-0003，購(gòu)自長(zhǎng)春市億斯實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限責(zé)任公司。

1.3 試劑

乙醇(批號(hào)：170512)、羧甲基纖維素鈉(批號(hào)：170608)、亞硝酸鈉(批號(hào)：170512)，購(gòu)自北京化工廠；氯化鈉注射液(批號(hào)：1509290509，購(gòu)自吉林省都邦藥業(yè)股份有限公司)；鹽酸腎上腺素注射液(批號(hào)：1605201，購(gòu)自天津金耀藥業(yè)有限公司)。

1.4 儀器

RE52CS旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀(上海亞榮生化儀器廠)；XMTD-7000電熱恒溫水浴鍋(天津天泰儀器有限公司)；真空干燥箱(上海一恒科學(xué)儀器有限公司)；ME204E電子天平(梅特勒-托利多儀器(上海)有限公司)；超聲清洗機(jī)(寧波新芝生物科技股份有限公司)；HH-S4數(shù)顯恒溫水浴鍋(寧波新芝生物科技股份有限公司)；電子天平(JY2003，舜宇恒平儀器)；血液流變儀(LBY-N6，普利生公司)。

1.5 實(shí)驗(yàn)方法

1.5.1 樣品制備 精芪雙參膠囊處方：黃芪、丹參、人參、黃精。

精芪雙參生產(chǎn)工藝：以上四味，取50%量人參、黃芪粉碎成細(xì)粉，過(guò)篩，混勻；其余黃芪、黃精加水煎煮2次，第一次2 h，第二次1.5 h，合并煎液，濾過(guò)，濾液濃縮至相對(duì)密度為1.20(80 ℃)，加入乙醇使含醇量達(dá)到65%，放置過(guò)夜，濾過(guò)，濾液備用；丹參加70%乙醇回流2次，第一次3 h，第二次2 h，合并提取液，濾過(guò)，與上述濾液合并，回收乙醇，并濃縮至相對(duì)按照上述生產(chǎn)工藝，以1倍處方量，分別制備缺少黃芪、丹參、人參、黃精的陰性樣品，依次標(biāo)記為黃芪陰性密度為1.20(50 ℃)的稠膏，加入50%量的人參、黃芪細(xì)粉，混勻，干燥后粉碎，過(guò)篩，再干燥，加入余下的人參黃芪細(xì)粉，混勻，制粒，裝膠囊，制成1 000粒，即得。

按照上述生產(chǎn)工藝，以1倍處方量，分別制備缺少黃芪、丹參、人參、黃精的陰性樣品，依次標(biāo)記為黃芪陰性、丹參陰性、人參陰性、黃精陰性，各樣品制備相對(duì)得率，見(jiàn)表1，置于干燥器內(nèi)陰涼處存儲(chǔ)。

1.5.2 給藥劑量及配制 精芪雙參臨床用藥劑量為一次4粒(0.23 g/粒)、一日3次，即2.76 g/人/d，折算至小鼠為0.42 g/kg/d、大鼠0.29 g/kg/d。本文采用臨床給藥劑量的2.5倍進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，即精芪雙參膠囊組小鼠給藥劑量為1.00 g/kg，大鼠給藥劑量為0.72 g/kg。黃芪陰性組、丹參陰性組、人參陰性組、黃精陰性組，按全方減藥味后的制備量進(jìn)行給藥，各組給藥劑量，見(jiàn)表1。各組樣品溶于0.5%羧甲基纖維素鈉的生理鹽水中，充分混懸，每次灌胃給藥前新配置，灌胃體積10 mL/kg。

表1 樣品制備及給藥劑量

1.5.3 小鼠亞硝酸鈉中毒缺氧藥效篩選模型 雌性ICR小鼠，隨機(jī)分為模型組、精芪雙參組、黃芪陰性組、丹參陰性組、人參陰性組、黃精陰性組，每組8只。模型組每日灌胃0.5%羧甲基纖維素鈉的生理鹽水，其余各組灌胃對(duì)應(yīng)樣品，連續(xù)給藥7 d，末次灌胃給藥30 min后，各組分別腹腔注射亞硝酸鈉溶液0.2 g/kg，造成小鼠中毒性組織缺氧模型，立即記錄從腹腔注射開(kāi)始至小鼠腹式呼吸消失的時(shí)間，即為小鼠存活時(shí)間[1-4]。

1.5.4 大鼠急性血瘀藥效篩選模型 雌性Wistar大鼠，隨機(jī)分為空白組、模型組、精芪雙參組、黃芪陰性組、丹參陰性組、人參陰性組、黃精陰性組，每組8只。空白組、模型組每日灌胃0.5%羧甲基纖維素鈉的生理鹽水，其余各組灌胃對(duì)應(yīng)樣品，連續(xù)給藥27 d，于第27天大鼠皮下注射鹽酸腎上腺素注射液0.8 mg/kg，連續(xù)注射2次，間隔時(shí)間為4 h，并于第一次皮下注射2 h后，將大鼠置于0～2 ℃冰水中游泳4 min，造成大鼠急性血瘀模型，禁食不禁水，于最后一次皮下注射鹽酸腎上腺素12 h后，10%水合氯醛麻醉，腹主動(dòng)脈取血，測(cè)全血黏度(150 s-1、60 s-1、10 s-1、5 s-1)[5-8]。

采用玻片法測(cè)定凝血時(shí)間：取各組大鼠腹主動(dòng)脈血0.1 mL，滴于玻片中央，立即計(jì)時(shí)，每隔30 s，用針頭將血滴由外向內(nèi)輕輕挑動(dòng)一次，直至血滴挑出血絲為止，記錄時(shí)間，即為凝血時(shí)間。如凝血時(shí)間超過(guò)30 min，按30 min計(jì)算[9-11]。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié)果與討論

2.1 小鼠亞硝酸鈉中毒缺氧模型藥效評(píng)價(jià)結(jié)果

經(jīng)灌胃給藥7 d后，各給藥組及模型組動(dòng)物狀態(tài)均良好，毛發(fā)順滑，飲水飲食及大小便正常，腹腔亞硝酸鈉中毒后，各給藥組小鼠存活時(shí)間結(jié)果，見(jiàn)表2。

組別劑量(g/kg)存活時(shí)間(min)模型組-26.06±3.60精芪雙參組1.0534.09±3.23##黃芪陰性組0.8928.74±6.05△丹參陰性組0.4227.25±3.54△△人參陰性組0.9533.83±7.03#黃精陰性組0.9233.61±6.43#

注：與模型組比較：# #P<0.01，#P<0.05；與精芪雙參組比較：△△P<0.01，△P<0.05。

精芪雙參膠囊藥效分析：與模型組比較，精芪雙參組極顯著延長(zhǎng)亞硝酸鈉中毒小鼠的存活時(shí)間(P<0.01)，表明精芪雙參膠囊具有抗組織缺氧的功能。

缺少黃芪、丹參的陰性處方組藥效分析：與精芪雙參組小鼠存活時(shí)間比較，黃芪陰性組、丹參陰性組具有顯著性差異(P均<0.05)；與模型組比較，黃芪陰性組、丹參陰性組小鼠存活時(shí)間略長(zhǎng)，但無(wú)顯著差異(P>0.05)；實(shí)驗(yàn)表明缺少黃芪或丹參的陰性處方與精芪雙參膠囊相比藥效顯著降低，不具備延長(zhǎng)亞硝酸鈉中毒小鼠存活時(shí)間的作用，無(wú)明顯抗組織缺氧功能，提示處方中黃芪、丹參是精芪雙參膠囊抗組織缺氧的主要藥味。

缺少人參、黃精的陰性處方組藥效分析：與精芪雙參組比較，人參陰性組、黃精陰性組延長(zhǎng)亞硝酸鈉中毒小鼠存活時(shí)間略低，但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與模型組比較，人參陰性組、黃精陰性組顯著延長(zhǎng)小鼠存活時(shí)間(P<0.05)，實(shí)驗(yàn)表明缺少人參、黃精的陰性處方仍具有顯著的抗組織缺氧藥效作用，且與精芪雙參膠囊相當(dāng)，僅有輕微下降(P>0.05)，提示處方中人參、黃精兩味藥在精芪雙參膠囊抗組織缺氧藥效方面貢獻(xiàn)較小。

2.2 大鼠急性血瘀模型藥效評(píng)價(jià)結(jié)果

經(jīng)灌胃給藥27 d后，動(dòng)物狀態(tài)良好，毛發(fā)順滑，飲水飲食及大小便正常，急性血瘀造模后，各組藥效實(shí)驗(yàn)結(jié)果，見(jiàn)表3。

組別劑量(g/kg)全血黏度(mPa·s)150s-160s-110s-15s-1凝血時(shí)間(min)空白組———3.34±0.214.30±0.196.30±0.127.82±0.076.79±0.12模型組———4.30±0.12**5.30±0.46**8.71±0.17**11.78±0.13**3.89±0.40**精芪雙參組0.753.65±0.18##4.40±0.10##7.91±0.44##9.85±0.72##4.74±0.40##黃芪陰性組0.604.22±0.08△△4.93±0.31△△8.70±0.12△△11.63±0.25△△3.80±0.10△△丹參陰性組0.304.27±0.07△△4.99±0.32△△8.74±0.13△△11.74±0.10△△4.02±0.55△△人參陰性組0.653.74±0.13##4.50±0.22##7.94±0.11##10.00±0.23##4.57±0.09##黃精陰性組0.623.76±0.11##4.50±0.20##7.96±0.01##9.97±0.18##4.69±0.08##

注：與模型組比較：##P<0.01，#P<0.05；與精芪雙參組比較：△△P<0.01，△P<0.05。

結(jié)果顯示，大鼠經(jīng)過(guò)注射鹽酸異丙腎上腺素聯(lián)合冰浴造模后，全血黏度不同切率(150 s-1、60 s-1、10 s-1、5 s-1)與空白組相比，均顯著升高(P<0.01)，凝血時(shí)間顯著降低(P<0.01)，表明急性血瘀模型復(fù)制成功。

精芪雙參膠囊藥效分析：與模型組比較，精芪雙參組各切率下全血黏度及凝血時(shí)間均顯著降低(P<0.01)，表明精芪雙參膠囊顯著降低鹽酸腎上腺素引起急性血瘀大鼠全血黏度，延長(zhǎng)凝血時(shí)間表明產(chǎn)品具有活血化瘀的功能。

缺少黃芪、丹參的陰性處方組藥效分析：與精芪雙參組相比，黃芪陰性組、丹參陰性組各切率下全血黏度及凝血時(shí)間差異顯著(P<0.01)；與模型組比較，黃芪陰性組、丹參陰性組大鼠各切率下全血黏度及凝血時(shí)間無(wú)顯著差異(P>0.05)，表明缺少黃芪或丹參的陰性處方與精芪雙參膠囊相比藥效顯著降低，已不具備改善急性血瘀狀態(tài)下機(jī)體的全血黏度及凝血時(shí)間的顯著藥效作用，提示處方中黃芪、丹參是精芪雙參膠囊活血化瘀的主要藥味。

缺少人參、黃精的陰性處方組藥效分析：與精芪雙參組比較，人參陰性組、黃精陰性組對(duì)全血黏度及凝血時(shí)間存在一定改善趨勢(shì)，但不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；與模型組比較，兩組各切率下全血黏度顯著降低(P<0.01)、凝血時(shí)間顯著延長(zhǎng)(P<0.01)，證明缺少人參、黃精的陰性處方仍具有顯著的活血化瘀藥效作用，與精芪雙參膠囊相當(dāng)，僅有輕微下降(P>0.05)，提示處方中人參、黃精兩味藥在精芪雙參膠囊活血化瘀藥效方面貢獻(xiàn)較小。

3 結(jié)論

精芪雙參膠囊在抗組織缺氧、活血化瘀方面療效顯著，通過(guò)處方藥味敲除法，將缺少各味藥的陰性處方分別作用于亞硝酸鈉中毒引起的缺氧模型、鹽酸腎上腺素引起急性血瘀模型，結(jié)果表明精芪雙參膠囊黃芪、丹參兩味君臣藥的藥效支撐作用突出，可作為產(chǎn)品藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升的主要研究對(duì)象。