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        改良冠脈結扎術制備大鼠慢性心衰模型

        2019-09-04 08:35:08趙倩倩
        生物化工 2019年4期
        關鍵詞:結扎術存活率左室

        趙倩倩

        (山西醫(yī)科大學晉祠學院,山西太原 030025)

        前言

        慢性心力衰竭為各種心血管疾病的終末階段,是一種較為復雜的臨床綜合征,其發(fā)生率及致死率均較高,對人類健康與安全的威脅極大[1-2]。有數(shù)據(jù)顯示[3],慢性心力衰竭的發(fā)生率可達0.4%~2.0%,而慢性心力衰竭患發(fā)病后4年內死亡率則可達到50%左右。有研究對我國50家醫(yī)院的住院患者進行了調查分析,結果顯示慢性心衰患者住院率僅為同期心血管患者的20%左右,但其死亡率則占40%左右,其對人類健康的威脅已不容小覷。動物實驗模型的建立可為該病的深入研究提供較好的途徑,而冠脈結扎法則是目前臨床上制備慢性心衰模型的常用方式之一,通過該術式制備的模型和臨床相關疾病病理發(fā)展、發(fā)生機制等的相似度均較高,故而逐漸在臨床上得到推廣與應用[4]。但冠脈結扎術制備大鼠模型的難度較高,操作較為復雜,且易受外界因素的影響,致使大鼠成活率較低。因此,如何提高造模成功率及大鼠存活率一直是臨床關注的重點。冠脈結扎術是一種常用的大鼠慢性心衰模型制備方式,但因大鼠死亡率較高而對其臨床研究造成了極大困擾[5]。為彌補傳統(tǒng)冠脈結扎術制備大鼠慢性心衰模型的不足,本次研究中以改良冠脈結扎術進行大鼠慢性心衰模型指標,并就其應用情況進行了如下分析。

        1 材料及方法

        1.1 動物

        選取66只雄性SD大鼠,體重平均200 g左右;所有大鼠均由中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院實驗動物中心提供,許可證號:SCXK(京)2009-0019。所有大鼠均進行為期2周的適應性喂養(yǎng),然后以隨機分組方式將其分為兩組,13只為假手術組,53只為手術組。

        1.2 方法

        1.2.1 儀器與試劑

        試劑:水合氯醛(上海生工生物工程有限公司提供)、注射用青霉素鈉(華北制藥股份有限公司提供);儀器:HX-100E小動物呼吸機(由成都太盟軟件有限公司提供)、經(jīng)高溫滅菌得到手術器械、Power Lab八通道生理記錄儀(由ADInstruments公司提供)。

        1.2.2 動物麻醉

        術前12 h禁食禁水;術前對大鼠進行稱重,以碘伏消毒大鼠左下腹,進行水合氯醛(0.3 mL/100 g)腹腔注射麻醉;在合適的鼠板上固定大鼠,連接心電圖,排除心電圖不正常者。取大鼠頭高腳低位,以止血鉗夾住大鼠舌尖,促使口腔得到充分暴露,然后操作者左手拿壓舌板按壓大鼠舌根部,待聲門張開時,以右手將氣管插管置入氣道,然后與呼吸機連接,設置呼吸時比為1∶1,呼吸頻率:70次/min,潮氣量:6 mL/min;插管成功后以膠布固定,以防氣管脫出。

        1.2.3 冠脈結扎

        取大鼠仰臥位,以左胸2~5肋、胸骨至腋前線間為備皮區(qū),以碘伏進行局部消毒,逐層分離皮膚、肌層、肋骨,直至暴露心臟,肌層分離采取鈍性分離處理,從而使肋骨暴露;于心臟搏動最明顯的肋間隙,以彎鉗將肋間肌及胸膜扎破,在肋間隙處放入合適的開胸器,促使視野得到充分暴露,對心臟及左側肺葉進行觀察。于心臟與左肺間放生理鹽水浸潤的無菌棉球,將肺壓向左側胸腔,以防損傷。隨后以彎鑷子挑破心包膜,找到冠狀動脈左前降支的位置(約在肺動脈圓錐和左心耳之間),然后以6-0縫合線進行結扎處理,進針深度控制為1 mm左右,寬度為1~2 mm。結扎后,將心臟歸位,并取出放置在胸腔內的棉球,及時對心電圖情況進行觀察。

        假手術組僅于左心耳根部下方進針穿線,無需行結扎處理,其余各操作步驟均同手術組。

        1.2.4 關胸與術后處理

        待大鼠心臟節(jié)律規(guī)整后,對肋骨進行縫合,然后以注射器將胸腔內的氣體與血液吸出,促使胸腔負壓恢復,然后對肌層及皮層進行逐層縫合,最后用碘伏進行皮膚消毒。撤掉呼吸機,并進行胸外按壓處理,促使大鼠恢復自主呼吸,待大鼠生命體征恢復平穩(wěn)后,拔下氣管插管,觀察無異常后,將其置于單籠中室溫飼養(yǎng)。術后三天內給予大鼠青霉素腹腔注射處理以防術后感染。

        1.3 觀察指標

        (1)比較結扎前后大鼠心電圖變化情況,以心電圖顯示標準肢體Ⅱ導聯(lián)ST段明顯抬高為冠脈結扎成功;(2)對兩組大鼠術后6周存活率進行統(tǒng)計對比;(3)觀察大鼠血流動力學變化情況,術后喂養(yǎng)6周進行比較,觀察指標包括左室收縮壓(LVSP)、左室舒張末壓(LVEDP)、最大上升速率(+dp/dtmax)、大下降速率(-dp/dtmax)等;(4)心質量指數(shù)和左室質量指數(shù)變化情況。

        分別稱取大鼠體重(g),全心的量(mg)及左心室的量(mg),并計算心質量指數(shù)和左室質量指數(shù),其中質量指數(shù)=心臟質量(mg)/重量(g);左室質量指數(shù)=左心室質量(mg)/重量(g)。

        1.4 統(tǒng)計學分析

        大鼠資料均以SPSS19.0處理,采用獨立樣本t檢驗進行數(shù)據(jù)分析,p<0.05為有統(tǒng)計學意義。

        2 結果與分析

        2.1 術后6周存活率比較

        手術組53只大鼠中共8只死亡,其中3只因術中心室顫動死亡、2只因呼吸衰竭死亡、1只因呼吸道阻塞死亡、2只為術后1天因心衰死亡,存活率為84.9%;假手術組中1只因心律失常死亡,存活率為92.3%。

        2.2 心電圖變化分析

        圖1 手術組術前、結扎5min之后II導聯(lián)心電圖

        手術組大鼠可見冠脈結扎后心電圖ST段明顯抬高現(xiàn)象,而假手術組則無明顯改變;提示手術組結扎成功。

        2.3 心體比及血流動力學改變對比

        兩組大鼠比較LVSP、LVEDP、+dp/dtmax、-dp/dtmax均存在明顯差異(p<0.05),具體見表1。

        2.4 心質量指數(shù)和左室質量指數(shù)變化情況

        兩組心質量指數(shù)及左室指數(shù)比較均存在明顯差異(p<0.05),見表2。

        表1 心體比及血流動力學改變對比

        表2 心質量指數(shù)和左室質量指數(shù)變化情況

        3 討論

        本次研究中以改良冠脈結扎術進行大鼠慢性心衰模型制備,結果顯示手術組大鼠術后6周存活率為84.9%,與既往臨床研究所指出的改良冠脈結扎術大鼠模型制備過程中大鼠死亡率比較,大鼠存活率明顯升高;且術后飼養(yǎng)6周分析兩組大鼠情況,觀察組大鼠可見冠脈結扎后心電圖ST段明顯抬高現(xiàn)象,而假手術組則無明顯改變;兩組大鼠比較LVSP、LVEDP、+dp/dtmax、-dp/dtmax均存在明顯差異(p<0.05),觀察組大鼠各項觀察指標均符合慢性心衰診斷標準,提示改良冠脈結扎術為慢性心衰模型指標成功率的提高提供了有效途徑。分析其原因,可能與下述三點有關。第一,有研究顯示適應性喂養(yǎng)14天的大鼠在行冠脈結扎術時,其存活率明顯升高,且術中心率失常風險下降;故而,本次選用適應性喂養(yǎng)2周的大鼠進行結扎,為提高大鼠存活率提供了有效幫助。第二,目前,術中呼吸管理方式主要分為三種,即不插管、經(jīng)口腔無創(chuàng)插管、有創(chuàng)插管;有學者研究結果指出,術中不插管對術者操作技術要求較高,且難以保證大鼠成活率。而有創(chuàng)插管中器官切開法插管易因氣道出血及分泌物增多而引發(fā)窒息,且術后易引發(fā)感染;而口腔無創(chuàng)插管則可減少對大鼠氣道的損傷,且術中通氣穩(wěn)定,有利于促進大鼠術后恢復。第三,本次研究以帶線棉球替代普通棉球或紗布,放置于心臟與左肺間,行結扎出后可直接將棉球拉出,可有效避免因利用鑷子取出棉球而損傷心臟、血管的現(xiàn)象發(fā)生,安全性較高,且操作更為方便[6]。

        綜上所述,改良冠脈結扎術制備大鼠心衰模型效果更為理想,可為慢性心衰模型制備提供有效參考。

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