漆愛明,肖樹雄

（廣東省藥品檢驗所，廣東廣州 510300）

在化妝品的生產、使用和保存過程中，為免受致病性和非致病性微生物污染，化妝品生產企業(yè)會添加各類防腐劑，這不僅可以延長保質期和貨架期，還能確保產品的安全性。但研究表明化妝品會引起過敏性和接觸性皮炎[1-2]等一系列副作用，甚至致癌[3-5]。

為加強對化妝品的衛(wèi)生監(jiān)督和日常管理，有必要開展化妝品中防腐劑含量檢測方法的開發(fā)研究，本文采用高效液相色譜法建立了對化妝品中5種防腐劑的快速測定方法，用本方法檢測了非蠟質和蠟質類兩類化妝品的15批次產品。

1 實驗部分

1.1 主要儀器與試劑

Agilent 1200高效液相色譜儀配二極管陣列檢測器、Mettler Toledo XS205 和 Sartorius CPA224S 電 子天平、KQ-300DE型數(shù)控超聲波清洗器、PB-10 pH計、LG10-2.4A離心機、渦流振蕩器（美國IFA公司）。

p-氯 -m-甲酚（Acros Organics，Product of ：BE，109480050）、芐氯酚（東京化成工業(yè)株式會社，C0161）、氯己定（Dr.Ehrenstorfer GmbH，C 11310000）、o-苯基苯酚（Dr.Ehrenstorfer GmbH，C 16070000）、氯二甲酚（東京化成工業(yè)株式會社，C0161）標準品（純度均大于96%）；甲醇和四氫呋喃（色譜純，德國Merck公司），實驗用水為一級水。

1.2 色譜條件

色譜柱：Kromasil 100-5 C18柱，250 mm×4.6 mm，5 μm；醇（2.1）+0.025 mol/L 磷酸二氫鈉水溶液（用磷酸調節(jié)pH至3.8），梯度洗脫。

1.3 5種防腐劑標準物質的線性范圍、回歸方程及相關系數(shù)

用甲醇（色譜純）作溶劑，稱取適量的各物質標準品置于25 mL容量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，配制成5種防腐劑原混合標準儲備液，將原混合標準儲備液逐級稀釋，分別進樣測定，線性范圍，線性方程見表1。

表1 種防腐劑的線性范圍、線性相關系數(shù)

1.4 樣品來源及處理

樣品是在各大超市購買的隨機15種樣品，15種樣品按種類分為非蠟質（液體類、粉類、膏霜類）和蠟質類，按不同類型分類統(tǒng)計分析。

1.4.1 不含蠟質的化妝品

不含蠟質的化妝品包括護膚類、香波、粉等。準確稱取試樣約 0.4 g（精確至 1mg），置 10 mL 具塞比色管中，加甲醇（色譜純）約5 mL，在漩渦混勻器上振蕩1 min，加入飽和氯化鈉溶液2 mL，用甲醇（色譜純）稀釋至 10 mL，混勻，超聲提取 15 min，再以 8 000 r/min離心 15 min，過 0.45 μm 濾膜，待測。

1.4.2 含蠟質的化妝品

含蠟質的化妝品包括唇膏、口紅等。準確稱取試樣約 0.4 g（精確至 1mg），置 10 mL 具塞比色管中，加四氫呋喃（色譜純）1 mL，在漩渦混勻器上振蕩1 min，加飽和氯化鈉溶液1 mL，用甲醇（色譜純）稀釋至10 mL，混勻，超聲提取 15 min，再以 8 000 r/min 離心 15 min，經(jīng)過0.45 μm濾膜，待測。若提取液經(jīng)0.45 μm濾膜過濾后濾液渾濁，則先將提取液用濾紙過濾后再經(jīng)0.45 μm濾膜過濾。

2 結果與討論

2.1 提取溶劑的選擇

化妝品基質復雜，尤其是唇膏和口紅化妝品采用低極性有機溶劑（如乙醚、正己烷等）提取時，樣品極難溶解甚至不溶；采用較強極性（甲醇、乙醇、四氫呋喃等）提取時，甲醇和乙醇分別作為提取試劑溶提取效果相當，但樣品上機后用甲醇作為提取劑的峰形比乙醇作為提取劑的峰形更尖銳，靈敏度更高。用四氫呋喃作為提取劑的效果和峰形都很好，尤其對甲醇難容的含蠟質的膏霜樣品效果顯現(xiàn)，但四氫呋喃對儀器管路的侵蝕比較厲害，綜合考慮以上情況，最終采取不含蠟質的化妝品如護膚類、香波、粉等用甲醇提取；含蠟質的化妝品如唇膏、口紅等先加1 mL四氫呋喃（色譜純）溶解樣品，再用甲醇定容萃取。

2.2 色譜柱的選擇

分析p-氯-m-甲酚、芐氯酚、氯己定、o-苯基苯酚、氯二甲酚5種物質的本身性質，同時考察了 RP-AMIDE C16、 資 生 堂 CAPCELL PAK C8 和Kromasil 100-5 C18三條柱子的柱效和耐酸堿度，Kromasil柱效及峰形對稱性好，化學穩(wěn)定性好，耐酸在 pH 1.5 ～ 9.5，最終選擇 Kromasil 100-5 C18 作為使用柱。

2.3 檢出限及定量限

將標準曲線的下限濃度逐級稀釋進樣分析檢測，p-氯-m-甲酚檢出信噪比為3∶1時，p-氯-m-甲酚的檢出限濃度為0.188mg/L；芐氯酚檢出信噪比為3∶1時，芐氯酚的檢出限濃度為0.084mg/L；氯己定檢出信噪比為3∶1時，氯己定的檢出限濃度為0.327mg/L；o-苯基苯酚檢出信噪比為3∶1時，o-苯基苯酚的檢出限濃度為0.147mg/L；氯二甲酚檢出信噪比為3∶1時，氯二甲酚的檢出限濃度為0.196mg/L。p-氯-m-甲酚、芐氯酚、氯己定、o-苯基苯酚、氯二甲酚檢出信噪比10∶1時為定量下限，定量下限濃度分別為0.564mg/L、0.252 mg/L、0.981mg/L、0.441mg/L、0.441mg/L、0.588mg/L。檢出限，定量下限的進樣體積分別為10μL，檢出限，定量下限的計算結果見表2。以樣品稱樣量為0.4 g，稀釋10倍計算本方法的檢出濃度與最低定量濃度，結果見表2。

2.4 實驗的精密度的考察

分別平行測定高濃度（標準系列溶液4的濃度）6次作為本實驗的精密度，本方法高濃度對應的組分精密度都很好，相對偏差在0.4～1.1%，結果見表3。

2.5 加標回收實驗和實驗的重復性考察

加入量為高濃度(混合標準系列溶液濃度4)時，5種成分的回收率范圍為103.7%～113.7%，相對標準偏差為0.5%～2.5%。加入量為低濃度(混合標準系列溶液濃度2)時，5種成分的回收率范圍為108.7%～119.8%，相對標準偏差為0.9%～3.4%，結果見表4。

表2 五種成分液相測定的檢出限、定量限、檢出濃度、定量濃度

表3 5種限用防腐劑高濃度精密度(n=6)

表4 2種基質(非蠟狀和蠟質類)的加標回收率及重復性(n=6)

2.6 實際樣品的檢測

應用所建立的方法，對實際樣品進行了分析，樣品 1#、3#、4#、9#、10#、11#、12#、13#、14#、15#、16#均未檢出氯己定、芐氯酚、o-苯基苯酚、氯二甲酚和p-氯-m-甲酚。5#檢出有氯二甲酚、6#檢出o-苯基苯酚、7#檢出氯己定、8#檢出氯二甲酚，其它組分5#、6#、7#、8#均未檢出，結果如表5所示。

3 結論

采用HPLC同時測定2種不同基質類型化妝品中的15批次化妝品的5種限用防腐劑的含量，該方法操作簡便，分離效果好，重現(xiàn)性好，各項指標能夠滿足分析檢測化妝品中p-氯-m-甲酚、芐氯酚、氯己定、o-苯基苯酚、氯二甲酚5種限用防腐劑的需要。

表5 實際樣品檢測結果