宮子惠 李?yuàn)W 張英杰 張京偉 孫紀(jì)霞 劉學(xué)慶

摘要：蝴蝶蘭花型獨(dú)特且高度進(jìn)化，是單子葉植物中研究花發(fā)育生物學(xué)的理想材料。近年來隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷提高，蝴蝶蘭成花基因的研究取得重大進(jìn)展。本研究從蝴蝶蘭開花轉(zhuǎn)換和花器官形成兩方面對近年來國內(nèi)外有關(guān)蝴蝶蘭花發(fā)育分子機(jī)理的研究進(jìn)展進(jìn)行整理與歸納， 并對蝴蝶蘭花發(fā)育需解決的問題進(jìn)行探討，以期為加快分子生物學(xué)技術(shù)在蝴蝶蘭研究中的應(yīng)用提供參考。

關(guān)鍵詞：蝴蝶蘭;花器官發(fā)育;成花誘導(dǎo);基因;開花整合子

中圖分類號：S682.31文獻(xiàn)標(biāo)識號：A文章編號：1001-4942（2019）07-0161-06

蝴蝶蘭（Phalaenopsis aphrodite Rchb. F.）為蘭科蝴蝶蘭屬，又稱蝶蘭[1]，原產(chǎn)于亞熱帶雨林地區(qū)。蝴蝶蘭素有“洋蘭王后”之稱，尤其在新春時(shí)節(jié)，葉腋抽出長長的花梗，開出形如蝴蝶飛舞般的花朵，花形美麗別致、色彩艷麗、花期長，深受花迷們的青睞[2]。

蝴蝶蘭起源古老，花型獨(dú)特且結(jié)構(gòu)高度特化，具有花瓣?duì)畹妮嗥?、特異的唇瓣，其雌雄蕊合生成合蕊柱并且子房發(fā)育須由授粉來啟動，是單子葉植物中研究花發(fā)育進(jìn)程的理想材料[3，4]。隨著研究的不斷深入，傳統(tǒng)手段已難以對蝴蝶蘭進(jìn)行更深入的探索，分子育種技術(shù)的應(yīng)用顯得尤為重要?；ㄆ谡{(diào)控技術(shù)是近年來研究的熱點(diǎn)，但對于蝴蝶蘭成花機(jī)理和誘導(dǎo)途徑還不夠清晰。因此深入了解各類型蝴蝶蘭花芽分化基因的表達(dá)模式，分析其成花誘導(dǎo)的基本途徑以及各途徑間的交叉影響關(guān)系，對于豐富蝴蝶蘭成花理論、解決生產(chǎn)中的問題、推動其在中國的發(fā)展具有重要的價(jià)值和意義。

1 蝴蝶蘭花芽誘導(dǎo)相關(guān)基因的研究進(jìn)展

植株在外界環(huán)境和遺傳因子的雙重作用下，控制成花的相關(guān)基因在時(shí)間和空間上按一定順序表達(dá)，莖頂端分生組織由營養(yǎng)生長轉(zhuǎn)變?yōu)樯成L的過程稱為成花誘導(dǎo)。這不僅僅是植物生長發(fā)育過程中的重要轉(zhuǎn)折時(shí)期，也是對生產(chǎn)產(chǎn)生直接影響的重要時(shí)期[5]。近年來，開花調(diào)控逐漸成為植物分子生物學(xué)研究的熱點(diǎn)。目前已知的高等植物成花誘導(dǎo)途徑共有7種，分別是光周期途徑、春化途徑、溫敏途徑、自主途徑、赤霉素途徑、年齡途徑和環(huán)境溫度途徑 [6-9]，它們既彼此獨(dú)立，又相互交織?，F(xiàn)已證實(shí)擬南芥中存在3個(gè)開花途徑整合因子SOC1、LFY和FT，其成花誘導(dǎo)途徑主要通過調(diào)節(jié)FT、SOC1和LFY等開花信號整合因子的表達(dá)水平來精確地調(diào)控花分生組織中相關(guān)基因的表達(dá)，進(jìn)而調(diào)節(jié)成花轉(zhuǎn)換、控制開花時(shí)間和啟動植物的開花過程。它們擁有共同的下游目標(biāo)調(diào)節(jié)基因CO和FLC，其中CO是光周期途徑的中心關(guān)鍵基因，而FLC是春化途徑和自主途徑的集合點(diǎn)[10]。

1.1 FT基因

FT基因是重要的開花促進(jìn)基因，在植物成花過程中發(fā)揮著不可替代的作用，有‘開花素之稱。FT基因在擬南芥晚花突變體中首次被發(fā)現(xiàn)，它是植物開花調(diào)控途徑的中心結(jié)點(diǎn)基因，能夠整合來源于光周期途徑、春化途徑和自主途徑的花發(fā)育信號。在光周期調(diào)控途徑中，F(xiàn)T基因是關(guān)鍵因子CO下游的直接靶基因，它在葉片中表達(dá)，進(jìn)而激活莖頂花序分生組織基因，從而促進(jìn)花的形成。在環(huán)境溫度途徑、年齡途徑中能促進(jìn)下游LFY基因的表達(dá)，在春化途徑和自主途徑中，F(xiàn)T基因是FLC基因的靶基因。由此可見FT基因在植物成花途徑的交匯節(jié)點(diǎn)發(fā)揮著重要作用[11-13]。

目前在蝴蝶蘭中已分離到FT的同源基因PHFT和PaFT1。Li等[14]研究發(fā)現(xiàn)蝴蝶蘭的FT同源基因PHFT主要在根、葉片、花等部位表達(dá)，其中在花的心皮和花瓣中的表達(dá)量最高，且幼花中的表達(dá)量高于成熟花，并且在ft-1突變擬南芥中超表達(dá)PhFT基因會導(dǎo)致早花及角果缺失。而Jang等[15]發(fā)現(xiàn)FT同源基因PaFT1主要在白蝴蝶蘭花梗和花芽中表達(dá)，且低溫能夠誘導(dǎo)PaFT1的表達(dá)量顯著上升，但光周期處理對其表達(dá)量無明顯影響。

1.2 SOC1基因

SOC1基因廣泛存在于單子葉和雙子葉植物中，大多含有7個(gè)外顯子和6個(gè)內(nèi)含子，編碼一個(gè)MADS結(jié)構(gòu)域蛋白，具有典型MIKC類的MADS-box基因家族的結(jié)構(gòu)特征[16]。研究表明，SOC1是一個(gè)多功能蛋白，主要調(diào)節(jié)開花時(shí)間，并且對花的類型及分生組織的發(fā)育也有調(diào)節(jié)作用[17]。前人通過基因突變及蛋白亞細(xì)胞定位技術(shù)已初步了解 SOC1所編碼蛋白的功能。SOC1基因與其它基因蛋白共同作用，在植物生長發(fā)育過程中發(fā)揮著不可替代的作用。崔波等[18]研究發(fā)現(xiàn)，SOC1基因在蝴蝶蘭不同時(shí)期不同部位的表達(dá)量不同，根中SOC1基因表達(dá)量在營養(yǎng)生長期達(dá)到最高，葉中則是抽葶期的表達(dá)水平最高，而在子房發(fā)育期只有微量表達(dá)，但在盛花期、抽葶期、子房發(fā)育期的花葶中表達(dá)量均達(dá)到較高水平，表明SOC1基因不但調(diào)控蝴蝶蘭的營養(yǎng)生長，也參與調(diào)控生殖生長，包括促進(jìn)開花和影響蕊柱和子房的發(fā)育，但對花器官外輪的形成幾乎無影響。李思誼[19]從姬蝴蝶蘭（Phal.equestris）中分離到1個(gè)SOC1同源基因PeSOC1并對其表達(dá)量進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)該基因在植株開花后2周葉片中的表達(dá)最強(qiáng)，花中最微弱;將此基因轉(zhuǎn)入野生型擬南芥與SOC1、FT突變株后發(fā)現(xiàn)T1、T2子代均能提早開花，推測PeSOC1基因能夠正向調(diào)控開花時(shí)間。

1.3 LFY基因

LFY是花分生組織基因，廣泛表達(dá)于營養(yǎng)器官與生殖器官，并與調(diào)控開花時(shí)間的基因密切相關(guān)。它是整合環(huán)境信號與內(nèi)源信號的開花控制因子，能夠啟動植物開花過程，并且控制花的生長發(fā)育?，F(xiàn)已在蝴蝶蘭中鑒別出LFY的同源基因，如Zhang等[20]從蝴蝶蘭中克隆出LFY的同源基因PhapLFY，其在營養(yǎng)器官與生殖器官中均有表達(dá)，且在營養(yǎng)生長向生殖生長轉(zhuǎn)換時(shí)，莖中的表達(dá)量呈逐漸升高趨勢，尤其在花發(fā)育過程中，花序分生組織、花分生組織和花原基中均有較強(qiáng)表達(dá)，說明PhapLFY基因可能參與蝴蝶蘭生殖發(fā)育的調(diào)控;白蝴蝶蘭中LFY的同源基因PhapLFY則主要在花原基和處于發(fā)育時(shí)期的花序中表達(dá)，可以緩解擬南芥lfy突變體的花器官畸形[21]。

2 蝴蝶蘭花器官發(fā)育相關(guān)基因的研究進(jìn)展

花發(fā)育的ABC模型在1990年被提出，隨后科學(xué)家又發(fā)現(xiàn)了D類基因[22]和E類基因[23]，并衍生出“ABCDE”模型，即花發(fā)育是由A、B、C、D、E同源異型基因所調(diào)控。其中每個(gè)字母表示一類功能，A+E控制花萼發(fā)育，A+B+E控制花瓣發(fā)育，B+C+E控制雄蕊發(fā)育，C+E控制心皮發(fā)育，D+E控制胚珠發(fā)育[24，25]。

2.1 A類基因

蝴蝶蘭A類基因的研究相對較少.主要包括FUL-like和AP1基因。袁秀云等[26]從朵麗蝶蘭中克隆出1個(gè)A類基因AP1，發(fā)現(xiàn)其主要在根和葉中表達(dá)，在花器官中痕量表達(dá)，推測其可能參與調(diào)控植株開花進(jìn)程，而不參與花器官的形態(tài)建成。研究發(fā)現(xiàn)，AP1基因在蝴蝶蘭營養(yǎng)器官與生殖器官中均有表達(dá)，且在盛花期花葶中表達(dá)量最高，推測其與調(diào)控開花有密切關(guān)系[27]。另外，Chang等[28]證實(shí)FUL-like基因ORAP11和ORAP13在蝴蝶蘭營養(yǎng)器官和生殖器官均有表達(dá)，ORAP11僅在蕊柱中有表達(dá)，而ORAP13在花器官中均不表達(dá)，但二者在植株的成花轉(zhuǎn)變及形態(tài)構(gòu)建過程中均起到重要作用。

2.2 B類基因

B類基因具有調(diào)控第2、3輪花器官（花瓣和雄蕊）發(fā)育的功能，以PI和AP3為代表，它們相互結(jié)合發(fā)生作用，并存在自動調(diào)控機(jī)制?，F(xiàn)已在蝴蝶蘭中分離到多個(gè)B類基因的同源基因。

Tsai等[29]對從小蘭嶼蝴蝶蘭中分離出的4個(gè)DEF-like基因PeMADS2、PeMADS3、PeMADS4、PeMADS5進(jìn)行分析，得到PeMADS基因的作用貫穿于整個(gè)花發(fā)育過程，但表達(dá)方式存在較大差異;PeMADS2、PeMADS3、PeMADS4、PeMADS5基因在野生型蝴蝶蘭的整個(gè)花器官中均有表達(dá)，其中PeMADS2基因在花萼、花瓣中表達(dá)量最高，在蕊柱中弱表達(dá)，在唇瓣中不表達(dá)，證明其與花被片發(fā)育密切相關(guān);PeMADS3基因在花瓣、唇瓣、蕊柱中表達(dá)，而在花萼和花粉中無表達(dá)，證明其與花瓣發(fā)育密切相關(guān);PeMADS4基因僅在唇瓣、蕊柱中高表達(dá)，表明其與唇瓣發(fā)育有關(guān);PeMADS5基因在花瓣中高表達(dá)，而在萼片、唇瓣、蕊柱中僅微量表達(dá)，表明其與側(cè)瓣發(fā)育有關(guān)。此外還分離到1個(gè)GLO/PI-like基因PeMADS6，其在除花粉塊外的花器官中均有表達(dá)，在花衰老進(jìn)程中，花中PeMADS6基因的表達(dá)量降低，但只有在由授粉誘導(dǎo)的花衰老過程中，子房中PeMADS6基因的表達(dá)量才會減弱，可見授粉會調(diào)控該基因在子房中抑制表達(dá)。

Guo等[30]從蝴蝶蘭中克隆得到3個(gè)PI-like基因PhPI9、PhPI10、PhPI15和1個(gè)PhAP3基因，研究結(jié)果表明3個(gè)PI-like基因均在生殖發(fā)育階段表達(dá)，在營養(yǎng)生長階段不表達(dá);PhPI9、PhPI10僅在唇瓣中表達(dá)，PhPI15與PhAP3在所有花器官中均有表達(dá)，PhAP3在藥帽處高表達(dá)，且與雄性不育相關(guān)。張浩等[31，32]通過對蝴蝶蘭PhAP3基因的研究發(fā)現(xiàn)，其在營養(yǎng)器官和花器官中均有表達(dá)，在花芽、萼片、捧瓣中高表達(dá)，在根和葉中微量表達(dá)，證實(shí)PhAP3在花發(fā)育過程中起重要作用，且與蝴蝶蘭的萼片花瓣化有關(guān)。

袁秀云等[33]從蝴蝶蘭花瓣中克隆了一個(gè)B類BGLO/PI轉(zhuǎn)錄因子PhalPI，分析結(jié)果表明PhalPI基因僅在生殖器官中表達(dá)，且在授粉后的子房中表達(dá)量降低，這與PeMADS6基因表達(dá)模式相同;PhalPI基因的表達(dá)量在萼片唇瓣化突變體的萼片和蕊柱中顯著升高，在雄蕊花瓣化突變體的萼片和側(cè)瓣中降低，在唇瓣和蕊柱中的表達(dá)水平顯著升高，在側(cè)瓣合柱化突變體的蕊柱中也顯著升高，但在側(cè)瓣唇瓣化和側(cè)瓣花藥化突變體中的表達(dá)水平無明顯變化。由此可見，PhalPI基因與花器官形態(tài)突變密切相關(guān)，而與側(cè)瓣唇瓣化和側(cè)瓣花藥化突變無關(guān)。

2.3 C類和D類基因

C、D類基因具有較高的同源性，與植物生殖發(fā)育密切相關(guān)。擬南芥中C類功能基因主要有AG，主要參與調(diào)控雄蕊與雌蕊發(fā)育;D類基因主要有STK、SHP1和SHP2，主要調(diào)控胚珠發(fā)育。

Song等[34]在蝴蝶蘭中分離鑒定出2個(gè)AG-like基因PhalAG1和PhalAG2，分別屬于C類和D類基因，兩基因具有相似的表達(dá)模式，在唇瓣、蕊柱和胚珠中均表達(dá)，且僅在花芽中表達(dá)，在營養(yǎng)器官中均無表達(dá)。陳佑亦[35]從姬蝴蝶蘭中分離鑒定出1個(gè)C類基因PeMADS1和1個(gè)D類基因PeMADS7，發(fā)現(xiàn)它們在合蕊柱和胚珠發(fā)育均起到重要作用且具有一定的協(xié)同作用。

袁秀云等[36，37]從蝴蝶蘭中克隆到2個(gè)C類MADS-box基因PhAG1a和PhAG1b，研究表明PhAG1a基因與PhalAG1、PeMADS7基因關(guān)系相近，且只在植物蕊柱和子房中表達(dá)，在營養(yǎng)器官中不表達(dá)。在5類花器官突變體中，PhAG1a基因在3類花器官突變體（退化雄蕊變異為側(cè)瓣、蕊柱合生和側(cè)萼片變異為唇瓣與側(cè)瓣退化）中的表達(dá)沒有變化，但在2類花器官突變體（側(cè)瓣變異為唇瓣和側(cè)瓣頂端長出花藥）蕊柱中的表達(dá)水平明顯降低，因而推測其在調(diào)控蝴蝶蘭合蕊柱發(fā)育中起重要作用。PhAG1b基因只在蕊柱和子房中表達(dá)，在營養(yǎng)器官與花器官的萼片、側(cè)瓣和唇瓣中均不表達(dá)，在授粉后的子房中和2類花器官突變體（側(cè)萼和側(cè)瓣變異為唇瓣）蕊柱中的表達(dá)水平明顯降低，在退化雄蕊變異為花瓣的花器官突變體中表達(dá)沒有明顯變化，而在另2類花器官突變體（側(cè)瓣退化與蕊柱合生、側(cè)瓣頂端長出花藥）蕊柱中的表達(dá)顯著升高。表明PhAG1b基因主要參與調(diào)控花器官中蕊柱和子房發(fā)育，其功能或與B類基因的功能互為消長。

2.4 E類基因

E類基因與AP1/FUL基因相同，只存在于被子植物中，主要包括SEP1、SEP2、SEP3、SEP4等基因。SEP基因和A類、B類、C類基因同時(shí)表達(dá)，能夠使?fàn)I養(yǎng)葉轉(zhuǎn)變?yōu)榛ㄆ鞴賉38]。鄭至勤[39]從姬蝴蝶蘭中克隆到2個(gè)E類基因PeMADS8、PeMADS9，證實(shí)它們在唇瓣中特異表達(dá)，與B類基因PeMADS4相似，推測其可能與唇瓣發(fā)育有關(guān)。同時(shí)也從姬蝴蝶蘭的EST庫中篩選到PeEREBP1、PeEREBP2、PebHLHL1，均與PeMADS4的表達(dá)特性相似，可能也與唇瓣發(fā)育相關(guān)。

Pan等[40]證實(shí)從小蘭嶼蝴蝶蘭分離到的PeSEP1、PeSEP2、PeSEP3、PeSEP4基因均與蝴蝶蘭花器官的形成有關(guān)。羅云汝[41]認(rèn)為AGL6-like基因在營養(yǎng)和生殖器官中均有表達(dá)，能促進(jìn)植株開花。

3 其它相關(guān)基因的研究進(jìn)展

CONSTANS（CO）是光周期調(diào)控途徑中的關(guān)鍵基因之一，作為光周期下游基因可以將光信號轉(zhuǎn)換為開花信號傳遞給FT基因，從而促進(jìn)植物開花[42，43]。Zhang等[20]通過研究蝴蝶蘭中分離的CO-like基因PhalCOL發(fā)現(xiàn)，它在所有器官中均有表達(dá)，且在營養(yǎng)生長向生殖生長轉(zhuǎn)換過程中莖中的表達(dá)量較高，而過度表達(dá)會導(dǎo)致早花，同時(shí)還發(fā)現(xiàn)花芽發(fā)育會影響PhalCOL基因的表達(dá)。由此可推測PhalCOL基因與蝴蝶蘭花芽誘導(dǎo)密切相關(guān)。

EFL4基因?qū)儆诠庵芷谕緩秸{(diào)控植物成花的基因，在植物成花中起著關(guān)鍵作用。DhEFL2、DhEFL3、DhEFL4基因是朵麗蝶蘭光周期途徑上游基因EFL4的同源基因，Chen等[44，45]研究發(fā)現(xiàn)其在營養(yǎng)器官與生殖器官中均有表達(dá)，且在花芽形成初期表達(dá)量最高;在長日照條件下，DhEFL2、DhEFL3、DhEFL4基因的日表達(dá)規(guī)律較為相似，而在短日照條件下，基因DhEFL3的表達(dá)規(guī)律與DhEFL2、DhEFL4存在一定差異;在擬南芥中3個(gè)基因超量表達(dá)均會出現(xiàn)晚花現(xiàn)象。

Zhang等[46，47]分離出兩個(gè)與植物自主途徑調(diào)控開花的關(guān)鍵基因DhPRP39、DhFVE，發(fā)現(xiàn)其參與蝴蝶蘭的成花誘導(dǎo)過程，推測其在花序啟動過程中發(fā)揮著重要作用。同時(shí)還發(fā)現(xiàn)過量表達(dá)的DhPRP39和DhFVE基因均會不同程度地延遲擬南芥開花。

Bui等[48]發(fā)現(xiàn)3種ACC合成酶基因在蝴蝶蘭受粉后的子房發(fā)育過程中起著重要作用，生長素、乙烯均可誘導(dǎo)該基因與ACC氧化酶的mRNA在花器官中積累，而去雄蕊后則無法誘導(dǎo)其在花器官中表達(dá)。

4 前景與展望

蝴蝶蘭成花過程的分子生物學(xué)研究已取得很大進(jìn)展，但目前的研究大多是針對單一因素進(jìn)行，很少有綜合多種因素的研究，因此，綜合多種因素對蝴蝶蘭成花分子機(jī)制進(jìn)行研究并探索不同類型成花基因的互作關(guān)系，是未來蝴蝶蘭分子生物學(xué)研究的重要方向。同時(shí)，目前國內(nèi)外對蝴蝶蘭基因的研究主要集中在花啟動、花發(fā)育等方面，對花色和香氣基因的研究報(bào)道較少，花色、香氣是蝴蝶蘭等蘭科植物的重要品質(zhì)因素，因此對花色素苷合成中的調(diào)控因子和相關(guān)香味基因的研究應(yīng)加強(qiáng)。

深入研究蝴蝶蘭成花過程中的相關(guān)基因，將有利于通過基因工程改善蝴蝶蘭花品質(zhì)及更好地進(jìn)行花期調(diào)控，同時(shí)為我們利用基因改造花部性狀、改變花的育性提供可能。這對推動蝴蝶蘭分子育種進(jìn)程具有重要意義，同時(shí)可結(jié)合溫度、光照、濕度等環(huán)境因素為蝴蝶蘭產(chǎn)業(yè)提供新的理論依據(jù)。

參 考 文 獻(xiàn)：

[1]陳宇勒.洋蘭欣賞與栽培圖說[M].北京：金盾出版社， 2004：140.

[2]黃秋婷.中國大陸蝴蝶蘭市場現(xiàn)狀與對策研究[D]. 武漢：華中農(nóng)業(yè)大學(xué)，2008.

[3]田云芳，蔣素華，袁秀云，等.蘭科植物花發(fā)育相關(guān)基因的研究進(jìn)展[J].北方園藝，2014（12）：168-172.

[4]景襲俊，胡鳳榮.蘭科植物分子生物學(xué)研究進(jìn)展[J].分子植物育種，2018，16（17）：5835-5848.

[5]周琴，張思思，包滿珠，等.高等植物成花誘導(dǎo)的分子機(jī)理研究進(jìn)展[J].分子植物育種，2018，16（11）：3681-3692.

[6]Mouradov A， Cremer F， Coupland G. Control of flowering time：interacting pathways as a basis for diversity[J]. Plant Cell， 2002， 14（Suppl.）： S111-S130.

[7]Boss P K， Bastow R M， Mylne J S， et al. Multiple pathways in the decision to flower： enabling， promoting， and resetting[J]. Plant Cell， 2004， 16（Suppl.）： S18-S31.

[8]Zhou C M， Zhang T Q， Wang X， et al. Molecular basis of age-dependent vernalization in Cardamine flexuosa[J]. Science， 2013， 340（6136）： 1097-1100.

[9]黃玉婷. 蝴蝶蘭光周期和自主成花途徑相關(guān)基因表達(dá)譜分析[D].杭州：浙江農(nóng)林大學(xué)，2015.

[10]付艷茹. 朵麗蝶蘭成花關(guān)鍵基因DhCOL的克隆及功能驗(yàn)證[D].杭州：浙江農(nóng)林大學(xué)，2014.

[11]黃瑋婷，吳博文，方中明. 墨蘭FT同源基因的時(shí)空表達(dá)及功能分析[J].安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2017，44（1）：135-141.

[12]Tamaki S， Matsuo S， Wong H L， et al. Hd3a protein is a mobile flowering signal in rice[J]. Science， 2007， 316（5827）： 1033-1036.

[13]Lin M K， Belanger H， Lee Y J， et al. FLOWERING LOCUS T protein may act as the long-distance florigenic signal in the cucurbits[J]. Plant Cell， 2007， 19（5）： 1488-1506.

[14]Li D M， Lǚ F B， Zhu G F， et al. Molecular characterization and functional analysis of a Flowering locus T homolog gene from a Phalaenopsis orchid[J].Genetics and Molecular Research，2014，13（3）：5982-5994.

[15]Jang S， Choi S C， Li H Y，et al. Functional characterization of Phalaenopsis aphrodite flowering genes PaFT1 and PaFD[J]. PLoS One，2015，10（8）：e0134987.

[16]Liu C， Zhou J， Bracha-Drori K， et al. Specification of Arabidopsis floral meristem identity by repression of flowering time genes[J]. Development， 2007，134（10）： 1901-1910.

[17]Liu C， Xi W， Shen L， et al. Regulation of floral patterning by flowering time genes[J]. ?Developmental Cell， 2009， 16（5）： 711-722.

[18]崔波， 王潔瓊， 宋彩霞， 等.蝴蝶蘭SOC1基因的克隆及表達(dá)分析[J].分子植物育種，2016，14（3）：548-553.

[19]李思誼.姬蝴蝶蘭開花時(shí)間相關(guān)基因（PeSOC1）之選殖與特性分析[D].臺南：成功大學(xué)，2006.

[20]Zhang J X， Wu K L， Zeng S J， et al. Characterization and expression analysis of Phal LFY，a homologue in Phalaenopsis of FLORICAULA/LEAFY genes[J].Scientia Horticulturae， 2010， 124 （4）： 482-489.

[21]Jang S. Functional characterization of PhapLEAFY， a FLORICAULA/LEAFY ortholog in Phalaenopsis aphrodite[J]. Plant and Cell Physiology， 2015， 56（11）：2234-2247.

[22]Schneitz K. The molecular and genetic control of ovule development[J]. Curr. Opinion Plant Biol.， 1999， 2（1）：13-17.

[23]Ferrario S， Immink R G， Shchennikova A， et al. The MADS box gene FBP2 is required for SEPALLATA function in Petunia[J]. Plant cell，2003， 15（4）： 914-925.

[24]Thesissen G， Saedler H. Plant biology： floral quartets[J]. Nature， 2001， 409（6819）： 469-471.

[25]Theissen G. Development of floral organ identity：stories from the MADS house [J].Current Opinion in Plant Biology， 2001， 4（1）：75-85.

[26]袁秀云，田云芳，蔣素華，等.朵麗蝶蘭MADS-box基因DtpsMADS1的克隆與表達(dá)特性[J].植物研究，2014， 34（1）： 53-61.

[27]袁秀云，蔣素華，田云芳，等.1個(gè)蘭花MADS-box基因的克隆與表達(dá)分析[J]. 河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，11（6）： 683-690.

[28]Chang Y Y， Chiu Y F， Wu J W， et al. Four orchid（Oncidium Gower Ramsey） AP1/AGL9-like MADS box genes show novel expression patterns and cause different effects on floral transition and formation in Arabidopsis thaliana[J]. Plant and Cell Physiol.， 2009， 50（8）： 1425-1438.

[29]Tsai W C， Kuoh C S， Chuang M H， et al. Four DEF-like MADS box genes displayed distinct floral morphogenetic roles in Phalaenopsis orchid[J]. Plant and Cell physiol.， 2004， 45（7） ： 831-844.

[30]Guo B， Hexige S， Zhang T， et al. Cloning and characterization of a PI like MADS box gene in Phalaenopsis orchid [J]. Journal of Biochemistry & Molecular Biology， 2007， 40（6）：845-852.

[31]張浩. 蝴蝶蘭花發(fā)育相關(guān)B族和C族MADS盒基因的功能研究[D]. 上海： 復(fù)旦大學(xué)， 2009：1-51.

[32]張浩， 郭濱， 李敏， 等. 蝴蝶蘭phap3基因的表達(dá)特性研究[J].復(fù)旦學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版）， 2010，49（1）：16-20，28.

[33]袁秀云， 許申平， 王瑩博， 等.蝴蝶蘭PhalPI基因的克隆及在花器官突變體中的表達(dá)分析[J].植物研究， 2017， 37（3）：416-423.

[34]Song I J， Nakamura T， Fukuda T， et al. Spatiotemporal expression of duplicate AGAMOUS orthologues during floral development in Phalaenopsis[J]. Development Genes and Evolution， 2006， 216（6）：301-313.

[35]陳佑亦.姬蝴蝶蘭D-群MADS-box基因PeMADS7之功能探討[D]臺南： 成功大學(xué)， 1999.

[36]袁秀云， 許申平， 雷志華， 等.蝴蝶蘭PhAG1b基因的克隆及在突變體花器官中的表達(dá)分析[J]. 核農(nóng)學(xué)報(bào)， 2018， 32（3）：438-447.

[37]袁秀云， 許申平， 雷志華， 等.蝴蝶蘭C類花器官發(fā)育基因PhAG1a的克隆及表達(dá)分析[J]. 熱帶作物學(xué)報(bào)， 2017， 38（12）：2294-2301.

[38]崔榮峰， 孟征. 花同源異型MADS-box基因在被子植物中的功能保守性和多樣性[J]. 植物學(xué)通報(bào)， 2007， 24（1）： 31-41.

[39]鄭至勤. 參與蝴蝶蘭唇瓣發(fā)育之轉(zhuǎn)錄因子與研究[D]. 臺南： 成功大學(xué)， 2007.

[40]Pan Z J， Chen Y Y， Du J S， et al. Flower development of Phalaenopsis orchid involves functionally divergent SEPALLATA-like genes[J]. New Phytol.， 2014， 202（3）： 1024-1042.

[41]羅云汝. AGL6-like基因參與蝴蝶蘭花被發(fā)育之探討[D].臺南： 成功大學(xué)， 2009.

[42]Jang S， Marchal V， Panigrahi K C， et al. Arabidopsis COP1 ?shapes the temporal pattern of CO accumulation conferring a photoperiodic flowering response[J]. Embo Journal， 2008， 27（8）： 1277-1288.

[43]Takase T， Yasuhara M， Geekiyanage S， et al. Overexpression of the chimeric gene of the floral regulator CONSTANS and the EAR morif repressor causes late flowering in Arabidopsis[J]. Plant Cell Reports， 2007， 26（6）： 815-821.

[44]Chen W， Qin Q， Zheng Y， et al. Overexpression of Doritaenopsis hybrid EARLY FLOWERING 4-like4 gene， DhEFL4， postponesflowering in transgenic Arabidopsis[J]. Plant Molecular Biology Reporter， 2016， 34（1）：103-117.

[45]Chen W W， Qin Q P， Zhang C， et al. DhEFL2， 3 and 4， the three EARLY FLOWERING4-like genes in a Doritaenopsis hybridregulate floral transition[J]. Plant Cell Reports， 2015， 34 （12）： 2027-2041.

[46]Zhang C， Sun X M， Qin Q P， et al. Cloning and characterization of a Doritaenopsis hybrid PRP39 gene involved in flowering time[J]. Plant Cell Tiss. Organ Cult， 2012， 110（3）： 347-357.

[47]Zhang C， Sun X M， Qin Q P， et al. Isolation and characterization of the FVE gene of a Doritaenopsis hybrid involved in the regulation of flowering[J]. Plant Growth Regul.， 2012， 68（1）：77-86.

[48]Bui A Q， O'neill S D. Three 1-aminocyclopropane-l-carboxylate syn-thase genes ?regulated by primary and secondary pollination signals in orchid flowers[J].Plant ??Physiology，1998， 116（1）： 419-428.