上海中醫(yī)藥大學(xué) 上海 201203

五行學(xué)說作為中醫(yī)理論體系中的一個組成部分[1]，是一種能夠闡釋人體的生理、病理及其與外在環(huán)境的相互聯(lián)系，并指導(dǎo)臨床診斷與治療的獨特理論。在中醫(yī)美容實踐中，五行歸類、臟腑相關(guān)理論對美容輔助產(chǎn)品的研發(fā)和應(yīng)用具有重要價值[2]。中醫(yī)理論認(rèn)為，“肝、心、脾、肺、腎”這五臟狀態(tài)的微小變化，都能夠直接影響人體皮膚狀態(tài)[3]。筆者在中醫(yī)五行理論指導(dǎo)下，選取對應(yīng)人體五臟的五種中藥材[4-5]，按照一定比例浸泡在植物油中制備成五行按摩油，通過中醫(yī)推拿與經(jīng)絡(luò)按摩手法，試圖探索自制五行按摩油在提高皮膚彈性及保濕等方面的功效，同時評價了自制五行按摩油的外用安全性，現(xiàn)報道如下。

1 對象和方法

1.1 儀器 皮膚彈性測量儀Cutometer MPA580（配有Corneometer探頭）、經(jīng)皮水分散失度（transepidermal water loss,TEWL）測量儀TewameterTM300均購于德國Courage-Khazaka公司；AT210型電子天平購于瑞士梅特勒-托利多公司；TC-6K型電子天平購于美國雙杰兄弟有限公司。

1.2 藥品和試劑 藏紅花、蘇木、枸杞、蟬蛻、何首烏均購于上海康橋中藥飲片有限公司（批號：141185-201469、141009-201463、141096-201416、141003-201452、141062-201485）；葡萄籽油購自上海浦恩生化科技有限公司（批號：20180109875）；乙醇（分析純）購于沃凱公司（批號：201705674）；水為蒸餾水。

1.3 實驗動物 普通級雌性新西蘭大白兔4只，體質(zhì)量2.0～2.5kg，飼養(yǎng)于上海中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心[實驗動物使用許可證號：SYXK（滬）2014-0008]。

1.4 自制五行按摩油的制備 具體制備方法參考文獻[6-7]，稱取藏紅花、蘇木、枸杞、蟬蛻、何首烏各50g，置于錐形瓶中，加入1 000mL葡萄籽油，使其完全浸沒飲片。將錐形瓶密封放置于陽光下，倒置容器7d，待浸提完成后，將飲片及油取出加熱，待油溫達(dá)50℃時停止加熱，立即撈出藥渣，待油冷卻至室溫后過濾，置于容器內(nèi)密封備用。

1.5 對象 2017年5月至6月選擇年齡30～56歲、皮膚代謝速率相對穩(wěn)定的女性作為受試者，隨機抽取16例女性，平均年齡（45.7±8.8）歲，按隨機分配原則分為自制五行按摩油組和葡萄籽油對照組，每組8例。自制五行按摩油組受試者平均年齡（45.3±9.3）歲，葡萄籽油對照組平均年齡（46.1±8.8）歲，兩組受試者年齡無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。所有受試者均自愿參與本研究，并簽署知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）妊娠期或哺乳期女性；（2）易過敏體質(zhì)；（3）有心腦血管、肝、腎、造血系統(tǒng)性疾病和精神病史者；（4）短期內(nèi)使用其他背部護膚品或按摩產(chǎn)品者；（5）非志愿參加者或不能按要求完成規(guī)定內(nèi)容者。

1.6 測試方法 分別進行短期和長期功效測試[8]。同一受試者的測試由同一測試人員采用同一儀器完成。所有測試均在恒溫恒濕（溫度20～22℃，相對濕度40%～60%）的環(huán)境下進行。

1.6.1 短期功效測試 受試者充分暴露后背部皮膚，在測試人員的幫助下對其進行簡單清潔，用四功能美容蒸汽機熱噴5min，并用無屑紙巾擦干，測試人員在其背部用記號筆標(biāo)記直徑約為3cm的圓圈，用皮膚彈性測量儀Cutometer MPA580和TEWL測量儀分別測試標(biāo)記部位皮膚角質(zhì)層的水分含量[9]、TEWL和皮膚彈性值。隨后由測試人員分別使用自制五行按摩油和葡萄籽油5mL按摩背部20min，2、4h后測試相應(yīng)部位皮膚的水分含量和TEWL值。在進行皮膚水分含量測試時，每一皮膚區(qū)域重復(fù)測試5次，TEWL測試40s。皮膚彈性值測試采用恒定負(fù)壓模式，共2個循環(huán)，每個循環(huán)6s，結(jié)果以R值表示。

1.6.2 長期功效測試 兩組受試者每周分別使用自制五行按摩油、葡萄籽油2次，連續(xù)使用4周，分別測試使用前和使用2、4周后相應(yīng)位置皮膚彈性值[10-11]。

1.7 動物皮膚刺激性實驗 選擇雌性新西蘭大白兔4只，實驗前背部兩側(cè)剃毛，兩側(cè)去毛面積各3cm×3cm左右，剃毛后恢復(fù)24h備用。給藥前目視檢查有無因剃毛而破損的皮膚，若有破損，則不宜進行實驗。采用自身左右對照，左側(cè)為葡萄籽油對照組，右側(cè)為自制五行按摩油組。分別取0.5mL受試物涂布于兩側(cè)已剃毛的皮膚，立即用玻璃紙覆蓋，再以3cm×3cm的兩層紗布包裹，最后用繃帶及膠帶固定。

根據(jù)臨床實際應(yīng)用情況，每只動物每次給藥4h，連續(xù)給藥3d。給藥前用溫水清洗給藥部位，于每次給藥后1h、再次給藥前及給藥第3天去除藥物后1、24、48和72h分別觀察并記錄兩側(cè)皮膚狀況，包括有無紅斑及水腫等，對其進行評分，觀察期限內(nèi)每天進行評價。

參照《化學(xué)品急性皮膚刺激性/腐蝕性試驗方法》[12]中皮膚刺激反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)對藥物刺激性進行評價。見表1、2。

1.8 統(tǒng)計學(xué)分析 應(yīng)用SPSS 18.0統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析，計量資料以表示，兩組受試者的皮膚水分含量、TEWL和皮膚彈性值組間比較采用獨立樣本t檢驗，同組治療前后比較采用配對t檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

表1 皮膚刺激反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)

表2 刺激強度評價標(biāo)準(zhǔn)

2 結(jié)果

2.1 兩組受試者治療前后皮膚水分含量比較 兩組受試者治療前皮膚水分含量無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。與治療前比較，治療后2h后兩組受試者皮膚水分含量均增加（P＜0.05），自制五行按摩油組治療后4h皮膚水分含量仍高于治療前（P＜0.05）；而葡萄籽油對照組治療后4h皮膚水分含量下降，與治療前差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。自制五行按摩油組治療2、4h后皮膚水分含量均高于同時點葡萄籽油對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。見表3。表明自制五行按摩油有更好的保濕效果，并可持久保濕4h以上。

2.2 兩組受試者治療前后TEWL比較 兩組受試者治療前及治療后2、4h的TEWL差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。與治療前比較，自制五行按摩油組治療2、4h后水分流失差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表4。表明單次使用自制五行按摩油對皮膚TEWL的影響不大，效果與葡萄籽油相似。

表3 兩組受試者治療前后皮膚水分含量比較

2.3 兩組受試者皮膚治療前后彈性值比較 兩組受試者治療前皮膚彈性值差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。治療后，自制五行按摩油組受試者皮膚彈性值呈現(xiàn)逐漸上升的趨勢，治療2、4周皮膚彈性值均高于治療前，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）；葡萄籽油對照組治療4周后，皮膚彈性值與治療前比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。組間比較，治療2、4周后自制五行按摩油組受試者皮膚彈性值高于同時點葡萄籽油對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。見表5。綜上所述，自制五行按摩油提高皮膚彈性的功效優(yōu)于葡萄籽油，預(yù)示其具有減緩衰老的作用[13]。

表5 兩組受試者皮膚彈性值比較

2.4 皮膚刺激性實驗結(jié)果 自制五行按摩油多次給藥，對家兔完整皮膚均無刺激性，無明顯紅斑和水腫發(fā)生；葡萄籽油多次給藥，對家兔完整皮膚也無刺激性，也未見明顯紅斑和水腫。見表6、圖1。

3 討論

皮膚老化是由自然因素或非自然因素造成的皮膚衰老現(xiàn)象，從老化機制上可以分為自然老化與光老化，主要體現(xiàn)在皮膚干燥、彈性減低、皺紋增加、雀斑產(chǎn)生等方面[14-15]。本研究表明，自制五行按摩油具有較好的保濕作用并能保持皮膚的彈性，皮膚刺激性實驗顯示該油對皮膚無刺激性，為該產(chǎn)品的后期開發(fā)提供了實驗數(shù)據(jù)。

表6 動物皮膚刺激反應(yīng)評分（分）

自制五行按摩油由5種中草藥制成，何首烏味苦、澀、甘，性溫，入腎經(jīng)，能養(yǎng)血潤燥、祛風(fēng)止癢，可治血虛生風(fēng)之皮膚瘙癢；蘇木味咸、甘、微辛，性平，入脾經(jīng)，可有助于改善皮損或皮膚局部炎癥[16]；蟬蛻味甘，微苦，入肺肝經(jīng)，可補充角質(zhì)層的脂質(zhì)成分，并能夠修復(fù)損傷的皮脂膜，有助于恢復(fù)皮膚的屏障功能[17]，三者相互配合，皮損問題可以有效得到控制和緩解。藏紅花味甘、性平，入心經(jīng)，其提取物被證明具有促進血液循環(huán)、改善面部膚色及增強免疫功能等作用[18]；枸杞味甘，入肝經(jīng)，其提取物有抗氧化活性[19]，兩者相結(jié)合，能夠提高機體免疫選擇力，增強皮膚光澤度。方中五味中藥對應(yīng)歸經(jīng)為五臟，合用能夠全面調(diào)理和保養(yǎng)皮膚，對于增強皮膚彈性有較好功效。

中藥材以基底油浸泡后，藥材中的脂溶性成分與油充分融合，具有良好的成型性、黏附性，同時具有載藥量大，釋藥性好和無毒無刺激性等優(yōu)點，皮溫下即可充分吸收，藥物有效成分在皮膚滯留時間長，而且其pH在5～7，無刺激性，使用安全可靠，在美容護膚方面應(yīng)用廣泛。本研究發(fā)現(xiàn)，自制五行按摩油能夠增加皮膚水分含量、減緩經(jīng)表皮失水，并提高皮膚彈性值，效果優(yōu)于葡萄籽油，說明自制五行按摩油具有一定的抗衰老作用。進一步研究將擴大樣本量，深入研究其作用機制，為自制五行按摩油用于輔助美容治療提供更充分的參考依據(jù)。

圖1 動物皮膚刺激性實驗