王倬晅，姚 曉

常州市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)中心，常州 213000

青娘蟲為芫菁科昆蟲綠芫青Lytta caragane Pallas的干燥蟲體，主產(chǎn)于江蘇、安徽、浙江等省。為國(guó)家28個(gè)毒性藥品管理品種之一，具有攻毒、破瘀、逐水的功效，主治瘰疬、狂犬咬傷、血瘀經(jīng)閉、水腫尿少等病癥?？鼓[瘤活性成分斑蝥素[1-3]既是主要有效成分，又是毒性成分。準(zhǔn)確測(cè)定青娘蟲中斑蝥素的含量，對(duì)監(jiān)控其質(zhì)量，指導(dǎo)臨床用藥安全有非常重要意義。各省的飲片炮制規(guī)范多有收載，且炮制要求各有不同。在江蘇、浙江、湖南等省的中藥飲片炮制規(guī)范中，生品青娘蟲飲片需去除頭足翅，而《上海市中藥飲片炮制規(guī)范》生品青娘蟲飲片只需將原藥除去雜質(zhì)，篩去灰屑，而不需去除頭足翅。米炒青娘蟲則需去除頭足翅。本試驗(yàn)采用氣相色譜法（GC）測(cè)定青娘蟲藥材、生青娘蟲、米炒青娘蟲以及青娘蟲炮制前后頭足翅中斑蝥素的含量，對(duì)青娘蟲炮制前后各樣品斑蝥素的含量進(jìn)行比較分析，以探究炮制對(duì)斑蝥素的影響。

1 儀器與材料

1.1 儀器

Agilent 7890B氣相色譜儀，配置FID檢測(cè)器、CTC自動(dòng)進(jìn)樣器（美國(guó)安捷倫公司）；Mettler Toledo XP105DR電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；GA-380A空氣發(fā)生器；HGL-300H純水式氫氣發(fā)生器；超聲清洗器KQ-5200DE（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 材料

斑蝥素對(duì)照品（批號(hào)110783-200604，中國(guó)食品藥品檢定研究院）； 青娘蟲 （批號(hào) 20150308、20150825，常州市泰和國(guó)藥制品有限公司；批號(hào)20150926，國(guó)藥控股常州醫(yī)藥物流中心有限公司，且由該公司代加工）炮制成米炒青娘蟲（取米置鍋內(nèi)加熱，噴水少許，使米貼鍋上，待冒煙時(shí)，加入凈青娘蟲，輕輕拌炒，至米呈黃棕色，取出，篩去米，放涼，去除頭、翅、足。每100 kg青娘蟲用米 20 kg）；甲醇（色譜純）；二氯甲烷（化學(xué)純）；水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[4]

HP－5毛細(xì)管柱（0.530mm×30m，2.65μm），檢測(cè)器：FID；進(jìn)樣口溫度：200℃；檢測(cè)器溫度：250℃；柱溫：165℃；載氣：氮?dú)?；流速?.5mL·min-1；進(jìn)樣方式：分流進(jìn)樣，分流比：20∶1；進(jìn)樣量：1μL。

理論塔板數(shù)以斑蝥素計(jì)為62 145，斑蝥素與前后雜質(zhì)分離度均大于1.5，符合實(shí)驗(yàn)要求。見(jiàn)圖1。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液 精密稱取斑蝥素對(duì)照品19.26mg，置10mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度作為對(duì)照品貯備液。精密量取1mL對(duì)照品貯備液置10mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，即得。

2.2.2 供試品溶液[4]取樣品粉末約3 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加二氯甲烷超聲處理2次（50mL、50mL），每次15min，合并二氯甲烷液，濾過(guò)，用二氯甲烷少量分次洗滌容器，洗液與濾液合并，回收溶劑至干，固體物加甲醇溶解轉(zhuǎn)移至10mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，過(guò)0.45μm濾膜，即得。

圖1 氣相色譜圖

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線及線性范圍

分別精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液配制成斑蝥素濃度分別為 0.03852、0.09630、0.1926、0.3852、0.9630mg·mL-1的對(duì)照品溶液，分別進(jìn)樣1μL，記錄峰面積，以濃度C為橫坐標(biāo)，以峰面積A為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，回歸方程為 A=7.03×10-3C-16.6（r=0.999 9），結(jié)果表明，斑蝥素對(duì)照品濃度在0.03852～0.9630mg·mL-1范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系。

2.4 檢測(cè)限和定量限

將對(duì)照品儲(chǔ)備液用甲醇進(jìn)行多次稀釋，信噪比S/N為10時(shí)，斑蝥素定量限為2.5 ng；信噪比S/N為3時(shí)，斑蝥素檢測(cè)限為1.1ng。

2.5 進(jìn)樣精密度試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液（批號(hào)20150926）1μL，按照“2.1”項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，記錄斑蝥素峰面積，其相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）為0.81%。表明精密度良好。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一樣品6份，按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定。結(jié)果斑蝥素含量平均值為0.076%，RSD為1.2%，說(shuō)明在此色譜條件下重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

取同一供試品溶液（批號(hào)20150926）分別于0 h、0.5、3、20、32 h 進(jìn)樣， 結(jié)果峰面積的 RSD 為1.4%，表明樣品在32h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取樣品（批號(hào)20150926，含量0.076%）約1.5 g，精密加入“2.2.1”項(xiàng)下斑蝥素對(duì)照品溶液（1.002mg·mL-1） 1mL，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，并按“2.1”色譜條件測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 斑蝥素加樣回收率（n=6）

2.9 樣品測(cè)定

取樣品（批號(hào)20150926）炮制前后不同部位，按“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定，用外標(biāo)法分別計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表2。表明米炒青娘蟲的頭足翅中斑蝥素低于檢測(cè)限。

表2 同一批次青娘蟲不同部位炮制前后斑蝥素的含量測(cè)定（n=3）

分取3批青娘蟲（去頭足翅）及其米炒品，按照“2.2.2”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”色譜條件分別測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 不同批次青娘蟲（去頭足翅）炮制前后斑蝥素的含量測(cè)定（n=3）

3 討 論

青娘蟲中斑蝥素的測(cè)定曾參考《中國(guó)藥典》[5]斑蝥中斑蝥素HPLC法，但由于青娘蟲中斑蝥素含量低，接近定量限，因此采用GC法[4]測(cè)定，考慮到配備了全自動(dòng)進(jìn)樣器的氣相色譜儀精密度良好，為了減少操作步驟、簡(jiǎn)化計(jì)算，進(jìn)行外標(biāo)法測(cè)定，通過(guò)方法學(xué)驗(yàn)證，該方法可行，重復(fù)性好，檢測(cè)靈敏，能較好地控制青娘蟲飲片及藥材的質(zhì)量。

由表2顯示，青娘蟲及其不同部位炮制后斑蝥素均下降。其中，生青娘蟲中斑蝥素含量為0.076%，米炒后含量下降到43.42%；去頭足翅生青娘蟲中斑蝥素含量為0.094%，米炒后為0.076%；青娘蟲頭足翅中斑蝥素含0.034%，米炒后未檢出。同等重量下炮制前后的青娘蟲中斑蝥素的含量均低于去頭足翅的青娘蟲中斑蝥素含量。

米炒青娘蟲炮制減毒原理與米炒斑蝥相類似，斑蝥素在84℃開(kāi)始升華，其升華點(diǎn)為110℃，米炒時(shí)鍋溫為128℃，適合于斑蝥素的升華，又不至于溫度太高致使斑蝥焦化[1]。當(dāng)青娘蟲與米同炒時(shí)，由于青娘蟲均勻受熱，使斑蝥素部分升華而含量降低，從而使其毒性降低。因此青娘蟲內(nèi)服用其炮制品，而米炒后青娘蟲的頭足翅中未檢出斑蝥素，故可以認(rèn)為其為非藥用部位；表2顯示，生青娘蟲中頭足翅含只有少量斑蝥素，因此認(rèn)為，外用生品可以整蟲入藥。