蘭慧 陽敬

摘 要：目的：本文以仙鶴草為主要原材料進行回流提取，對其主要所含的總黃酮含量測定。方法：采取乙醇回流提取，對仙鶴草中的總黃酮進行提取，然后配成溶液在紫外分光光度計下測量其吸光度。本為重點以乙醇的濃度對仙鶴草中總黃酮提取率的影響進行了探索，單因素實驗考察了醇濃度、料液比、提取時間以及提取次數(shù)四因素對仙鶴草中總黃酮提取率的影響。結(jié)果：仙鶴草中總黃酮的最佳單因素提取工藝條件為分別是乙醇濃度為60%、料液比為1：20、提取時間為2h、提取次數(shù)為2次，在此條件下仙鶴草中總黃酮的提取率為20.99%。結(jié)論：采用上述提取工藝，既可以節(jié)省提取工藝的成本，又可以提高提取工藝的效率，并能最終為粗仙鶴草的綜合利用提供社會經(jīng)濟效益的新用途。

關(guān)鍵詞：仙鶴草；總黃酮；回流提??；回流法；含量

中圖分類號：R284.2 文獻標識碼：A 文章編號：1671-2064（2019）15-0204-03

0 引言

仙鶴草為薔薇科龍芽草屬植物龍芽草Agrimonia pilosa Ledeb.的全草[1]。仙鶴草全草入藥，中醫(yī)臨床主要用于止血、降糖、抗腫瘤、泌尿道、呼吸道、消化道等疾病的治療[2]。研究發(fā)現(xiàn)，仙鶴草中含有槲皮素、山奈酚、木犀草素等多種黃酮類化合物[3]，黃酮類化合物有降脂、抗氧化、降糖等生物活性[4]，日益成為醫(yī)藥工作者的研究熱點。

本文主要對仙鶴草中總黃酮的提取工藝進行了研究，先采用乙醇回流法提取出仙鶴草中的總黃酮，再以蘆丁為對照品對仙鶴草黃酮含量進行測定，考察乙醇濃度、料液比、提取時間、提取次數(shù)四單因素對仙鶴草中總黃酮提取率的影響；得出仙鶴草中黃酮提取的最佳工藝條件，為開發(fā)利用仙鶴草資源提供理論依據(jù)。

1 實驗材料與儀器

仙鶴草，來自于河北同仁堂；蘆丁，生化試劑，中國醫(yī)藥（集團）上?；瘜W試劑公司；無水乙醇，NaNO2，Al （NO3）3，NaOH，甲醇，丙酮均為分析純；HS-3120型超聲波清洗器， 上海楚定分析儀器有限公司；TU-1901雙光束紫外可見分光光度計，北京普析通用儀器有限責任公司生產(chǎn)；分析天平：FA1004型；調(diào)溫電熱套：KDM-6020型。

2 仙鶴草中黃酮的提取方法

2.1 仙鶴草的預(yù)處理

將干燥的仙鶴草放入研缽中碾碎、過篩，得到仙鶴草渣與粉末分別放入燒杯中備用。

2.2 仙鶴草中黃酮的提取

（1）工藝流程：取干燥仙鶴草若干→研磨、過篩→精確稱取粉末1.000g→乙醇回流→過濾→棄去濾渣→下清液冷卻→定容50ml容量瓶中。（2）操作步驟：準確稱取研磨后干燥的仙鶴草1.000g于50ml燒瓶中加入設(shè)定條件下濃度的乙醇組建回流裝置在設(shè)定條件時間下進行回流，待回流液冷卻后進行過濾，濾渣用少量乙醇洗滌多次，洗液同樣進行過濾，濾液定容至50ml容量瓶。

3 仙鶴草中總黃酮含量的測定

3.1 樣品溶液的制備

準確稱取研磨后干燥的仙鶴草1.000g于50ml燒瓶中，加入設(shè)定條件下濃度的乙醇組建回流裝置在設(shè)定條件時間下進行回流，待回流液冷卻后進行過濾，濾渣用少量乙醇洗滌多次，洗液同樣進行過濾，濾液合并轉(zhuǎn)移至50ml容量瓶中，乙醇定容，即得樣品溶液。

3.2 標準溶液的制備

準確稱取干燥恒重的蘆丁6mg于精確稱取干燥恒重的蘆?。S酮標準對照品）置于10ml容量瓶中，加甲醇適量溶解稀釋至刻度，搖勻。精密量取10ml，置于25ml容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，即得蘆丁溶液，濃度為0.24mg/ml。

3.3 標準曲線的制備

精確吸取1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 、6.0、7.0mL 蘆丁標準品溶液（0.24mg/ml）分別置于25mL容量瓶中，分別加入水使為6mL，各精確加入5%亞硝酸鈉溶液1mL，搖勻，放置6min，再分別加入10%硝酸鋁溶液1mL，搖勻，放置6min，加1mol/ml氫氧化鈉溶液10mL，搖勻，分別用水稀釋至刻度，搖勻，室溫放置15min，置比色皿中，用紫外分光光度計在510nm波長處測定吸光度。以吸光度（A）為縱坐標，仙鶴草中總黃酮濃度（C）為橫坐標做標準曲線。蘆丁溶液的濃度與吸光度的關(guān)系見表1，蘆丁溶液標準曲線圖1所示。

3.4 仙鶴草中黃酮含量的測定

用移液管準確吸取樣品溶液1ml，按照2.3.3項方法操作，測定吸光度，如果吸光度值在線性范圍內(nèi)，從而由該線性回歸方程式可以準確的計算出仙鶴草中黃酮的含量（以蘆丁計）：

總黃酮得率（%）=

4 仙鶴草中總黃酮提取工藝條件的研究

實驗選擇乙醇濃度、料液比、提取時間以及提取次數(shù)作為單因素實驗，進行仙鶴草中總黃酮提取率影響因子的分析。

（1）乙醇濃度對仙鶴草中總黃酮提取的影響。假設(shè)提取時間0.5h、料液比1：20、提取次數(shù)1次條件下提取率最佳，分別在乙醇濃度為60%、70%、80%、90%下，進行提取，濾渣用少量乙醇洗滌多次，洗液同樣進行過濾，濾液定容至50ml容量瓶。

（2）料液比對仙鶴草中總黃酮提取的影響。假設(shè)提取時間0.5h、乙醇濃度為60%、提取次數(shù)1次條件下提取率最佳，分別在料液比1：10、1：15、1：20、1：25條件下，進行仙鶴草中總黃酮的提取；濾渣用少量乙醇洗滌多次，洗液同樣進行過濾，濾液定容至50ml容量瓶。

（3）提取時間對仙鶴草中總黃酮提取的影響。假設(shè)乙醇濃度為60%、提取次數(shù)1次，料液比1：20的條件下提取率最佳，分別在回流提取時間為0.5h、1h、1.5h、2h、進行仙鶴草中總黃酮的提??；濾渣用少量乙醇洗滌多次，洗液同樣進行過濾，濾液定容至50ml容量瓶。

（4）提取次數(shù)對仙鶴草中總黃酮提取的影響。假設(shè)提取時間1.5h、料液比1：20、乙醇濃度為60%的條件下提取率最佳，分別在提取次數(shù)為1次、2次、3次、4次條件下，進行仙鶴草中總黃酮的提取；濾渣用少量乙醇洗滌多次，洗液同樣進行過濾，濾液定容至50ml容量瓶。

5 結(jié)果與分析

5.1 考察乙醇濃度對仙鶴草中總黃酮提取率的影響

不同乙醇濃度條件下仙鶴草中總黃酮提取率見表2，乙醇濃度對仙鶴草中總黃酮提取率的影響見圖2。

本文通過討論了乙醇濃度對仙鶴草中總黃酮提取率的影響，由圖2可知，乙醇濃度對總黃酮的提取率較為顯著，隨濃度值的升高，黃酮的提取率呈現(xiàn)下降的趨勢。

5.2 考察料液比對仙鶴草中總黃酮提取率的影響

不同料液比條件下仙鶴草中總黃酮提取率見表3，料液比對仙鶴草中黃酮提取率的影響見圖3。

由圖3可知，在料液比1：10-1：20之間，隨著溶液的增加黃酮的提取率迅速增加。在1：20-1：25之間黃酮的提取率幾乎保持不變。故對仙鶴草中總黃酮提取時最適料液比應(yīng)為1：20。

5.3 考察提取時間對仙鶴草中總黃酮提取率的影響

不同提取時間條件下仙鶴草中總黃酮提取率見表4，提取時間對仙鶴草中總黃酮提取率的影響見圖4。

由圖4可知，在0.5h-1h水平，隨著時間的延長，黃酮的提取率迅速上升，但從1h-1.5h，黃酮的提取率緩慢增加但總體變化不大，最后在1.5h-2h之間。黃酮的提取率幾乎不變；由此可見仙鶴草中總黃酮最適宜提取時間為2h。

5.4 考察提取次數(shù)對仙鶴草中總黃酮提取率的影響

不同提取次數(shù)條件下仙鶴草中總黃酮提取率見表5，提取次數(shù)對仙鶴草中總黃酮提取率的影響見圖5。

本文重點探討了提取次數(shù)對黃酮提取率的影響，由圖5可知，提取次數(shù)對黃酮的提取率影響較為顯著，隨提取次數(shù)的增加，黃酮的提取率累積呈現(xiàn)增加趨勢，在1-2次之間增加迅速；但在2-4次之間黃酮得率幾乎保持水平，得出仙鶴草中總黃酮的提取最佳次數(shù)為2次。

5.5 單因素考察仙鶴草中總黃酮得率最佳組合

經(jīng)上述仙鶴草中總黃酮的提取，隨機取總黃酮提取率在10%左右組的仙鶴草，進行仙鶴草中總黃酮含量測定實驗，精密稱取1.000g，其余步驟同標準曲線的繪制。優(yōu)化單因素下仙鶴草中總黃酮提取率如表6。

6 結(jié)語

通過以上分析，我們得到的主要結(jié)論為：考查單因素實驗，可知乙醇的濃度為60%時，仙鶴草中黃酮的提取率較高；所以仙鶴草中總黃酮提取率最佳乙醇濃度條件為60%；由實驗數(shù)據(jù)與分析得知，料液比為1：20時，仙鶴草中總黃酮的提取率最佳，所以仙鶴草中總黃酮提取率最佳料液比條件為1：20；提取時間為1.5h時，仙鶴草中總黃酮的提取率最高；所以仙鶴草中總黃酮提取率最佳提取時間1.5h；當提取次數(shù)為4次時，仙鶴草中黃酮的提取率最高；但從實際操作及各類因素考慮，實驗中進行2次提取最佳，所以仙鶴草中總黃酮提取率最佳提取次數(shù)條件為2次。

參考文獻

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典.2015年版一部[S].北京：化學工業(yè)出版社，2015.

[2] 洪閣，戴永紅，劉培勛，等.仙鶴草化學成分與藥理研究進展[J].藥學服務(wù)與研究，2008，8（5）：262-266.

[3] 張健泓，陳優(yōu)生.仙鶴草降糖活性研究[J].中藥材，2009，23（10）：17-19.

[4] 裴月湖，李銑，朱延儒.仙鶴草根芽中新鞣花酸甙的結(jié)構(gòu)研究[J].藥學學報，2009，25（10）：798-800.