余春梅，鄭小鋒，楊秀麗，周成林，王正鳳

(西南藥業(yè)股份有限公司藥物研究所，重慶 400038)

硫酸氫氯吡格雷(clopidogrel bisulfate)是法國Sanofi－Aventis公司研制的血小板聚集抑制劑，1998年首次在美國和英國上市，臨床用于治療動(dòng)脈粥樣硬化和急性冠狀動(dòng)脈綜合征等[1－2]?！秶宜幤窐?biāo)準(zhǔn)·新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)》及藥品檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)均采用頂空進(jìn)樣法測定硫酸氫氯吡格雷殘留有機(jī)溶劑的含量[3－4]，但該法對儀器有必須配置頂空設(shè)備的特殊要求，不利于方法的推廣。筆者按照2010年版《中國藥典(二部)》與人用藥品注冊技術(shù)規(guī)范國際協(xié)調(diào)會(ICH)[5]的相關(guān)要求，建立了樣品溶解后直接進(jìn)樣的氣相色譜法，同時(shí)測定硫酸氫氯吡格雷中丙酮、乙酸乙酯和二氯甲烷3種溶劑殘留量，并對方法進(jìn)行了研究?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

Agilent GC6890型氣相色譜儀(安捷倫科技有限公司，F(xiàn)ID檢測器);AB204 E型電子天平(梅特勒公司)。硫酸氫氯吡格雷(西南藥業(yè)股份有限公司，批號為120801，120802，120803);N，N－二甲基甲酰胺(色譜純，美國Tedia);丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷(分析純，重慶川東化工廠)

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

以聚乙二醇為固定液如 HP－Innowax毛細(xì)管柱(30 m×0.53 mm，1.00 μm)為色譜柱，進(jìn)樣口溫度 200 ℃，檢測器溫度220℃，采用程序升溫，初始溫度為40℃，維持5 min，以60℃ /min迅速升溫至200℃，維持3 min。取系統(tǒng)適用性溶液1 μL注入氣相色譜儀，記錄色譜圖。丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷3個(gè)成分峰之間的分離度不得小于2.0，理論板數(shù)均不得低于5 000。3種溶劑的限度分別為二氯甲烷0.06%，丙酮0.5%，乙酸乙酯0.5%。

2.2 溶液配制

混合對照品貯備液:分別取二氯甲烷0.1 mL、乙酸乙酯1 mL、丙酮1 mL，精密稱定，一并置100 mL容量瓶中，用N，N－二甲基甲酰胺(色譜純)溶解并定容，冷藏放置;對照品及系統(tǒng)適用性溶液:取貯備液1 mL，用N，N－二甲基甲酰胺稀釋至20 mL，即得;供試品溶液:取樣品1.000 g，精密稱定，置10 mL容量瓶中，用N，N－二甲基甲酰胺溶解并稀釋至刻度，即得;對照品加供試品溶液:精密稱取樣品 1.000 g，并準(zhǔn)確量取混合對照品貯備液0.5 mL，一并置10 mL容量瓶中，溶解即得。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn):取N，N－二甲基甲酰胺(空白溶劑)、3種成分定位溶液、混合對照品溶液和供試樣品溶液各1份，進(jìn)行氣相色譜分析，結(jié)果見圖1，表明空白溶劑無干擾，丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷3個(gè)成分峰之間的分離度均大于2.0，供試品溶液圖譜也未見干擾峰，可見方法的專屬性符合要求。

檢測限與定量限確定:取混合對照品溶液，逐步稀釋后進(jìn)行色譜分析。結(jié)果丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷峰的信噪比(S/N)為2～3時(shí)，檢測限分別為 1.6 ×10－6，2.5 ×10－6，6.0 ×10－6，信噪比為 10 時(shí)定量限分 別 為 5.0 ×10－6，10.0 ×10－6，18.0 ×10－6，均遠(yuǎn)低于殘留溶劑控制濃度，表明方法靈敏度符合要求。

線性關(guān)系考察:分別取混合對照品貯備液 2，4，6，8，10 mL，置 100 mL容量瓶中，用N，N－二甲基甲酰胺稀釋至刻度，進(jìn)樣分析，記錄色譜圖。以峰面積為Y軸、濃度為X軸進(jìn)行線性回歸。結(jié)果丙酮回歸方程為Y=261 176X+39.66(r=0.999 9，n=5)，線性范圍為 0.02% ～0.1%;乙酸乙酯回歸方程為Y=253 282X+22.40(r=0.999 9，n=5)，線性范圍為 0.02% ～0.1%;二氯甲烷為Y=114 296X－13.29(r=0.9998，n=5)，線性范圍為 0.0024% ～0.012%。

加樣回收試驗(yàn):取混合對照品貯備液加入樣品中，定容使含對照品80%，100%，120%的溶液，平行配制3份，分別進(jìn)樣分析，記錄色譜圖，計(jì)算含量。結(jié)果丙酮的回收率為98.9%～101.5% ，RSD=1.11%(n=9);乙酸乙酯的回收率為 98.8% ～101.6% ，RSD=1.09%(n=9);二氯甲烷的回收率為 97.9% ～103.0%，RSD=1.81%(n=9)。

重復(fù)性試驗(yàn):取對照品加入供試品溶液6份，重復(fù)進(jìn)樣，記錄色譜圖。結(jié)果峰面積的RSD分別為丙酮0.63%，乙酸乙酯0.63%，二氯甲烷 1.14%。

圖1 方法專屬性氣相色譜圖

中間精密度試驗(yàn):另配制濃度相同的對照品加供試品溶液6份，于不同時(shí)間、更換人員進(jìn)行測定。結(jié)果峰面積的RSD分別為丙酮0.95% ，乙酸乙酯 0.90%，二氯甲烷 0.90%。

耐用性試驗(yàn):取對照品加供試品溶液和混合對照品溶液，考察進(jìn)樣口溫度、柱溫初始溫度以及檢測器溫度在標(biāo)準(zhǔn)條件和溫度變動(dòng)情況下的測定結(jié)果(每個(gè)條件2次)。結(jié)果進(jìn)樣口溫度變化在10℃以下時(shí)，丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷的RSD分別為0.27%，0.21%，0.84%;柱溫初始溫度變化在5℃以下時(shí)，丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷的RSD分別為0.39%，0.87%，1.82%;檢測器溫度變化在10℃以下時(shí)，丙酮、乙酸乙酯、二氯甲烷的RSD分別為0.16%，0.22%，0.80%?？梢?，RSD均小于2.0%，方法耐用性符合要求。

2.4 樣品檢測

照擬訂方法連續(xù)對3批樣品進(jìn)行殘留溶劑測定，結(jié)果3批樣品均未檢出丙酮、乙酸乙酯和二氯甲烷或該3種溶劑峰均低于檢測限，說明樣品的相關(guān)工藝控制符合要求。

3 討論

使用涂布聚乙二醇的強(qiáng)極性HP－Innowax毛細(xì)管柱，較容易地實(shí)現(xiàn)了3種成分的良好分離。在溶劑N，N－二甲基甲酰胺色譜圖中，在初始溫度維持的色譜區(qū)間內(nèi)，發(fā)現(xiàn)了1個(gè)明顯的雜質(zhì)峰。該雜質(zhì)峰雖并未干擾到本法測定的有機(jī)溶劑峰，但仍提示了配制對照品及供試品溶液時(shí)，需使用純度要求比較高的色譜級溶劑以避免可能的干擾。

使用樣品溶解后直接進(jìn)樣進(jìn)行毛細(xì)管氣相色譜分析，對硬件設(shè)備的要求較頂空進(jìn)樣法低，且操作簡單、耗時(shí)少、靈敏度高，測定結(jié)果準(zhǔn)確、可靠，適合用于硫酸氫氯吡格雷的有機(jī)殘留量控制。

[1]賈國強(qiáng)，張信紅.新型的ADP受體拮抗劑硫酸氫氯吡格雷[J].中國藥物應(yīng)用與監(jiān)測，2002，17(5):52 －53.

[2]鄒 江，遲曉巍，王龍山，等.硫酸氫氯吡格雷位置異構(gòu)體的合成 [J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2010，41(1):6 －8.

[3]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(二部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社，2010:61.

[4]田 勇，唐素芳.硫酸氫氯吡格雷中有機(jī)溶劑殘留量的頂空毛細(xì)管氣相色譜法測定[J].中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2012，43(2):134－136.

[5]人用藥物注冊技術(shù)要求國際協(xié)調(diào)會.殘留溶劑指導(dǎo)原則[M].北京:人民衛(wèi)生出版社，2000:236.