賈志偉，邢賀楠，劉曉川，褚云香

1應(yīng)急總醫(yī)院消化科，北京 100029

2北京和睦家醫(yī)院內(nèi)鏡室，北京 100016

研究表明，大腸癌的發(fā)病率可達(dá)（252～373）/10萬[1]。大腸癌嚴(yán)重影響了患者的預(yù)后，降低了患者的生存率，對患者的生命健康造成嚴(yán)重威脅[2]。生物學(xué)因素能夠影響腫瘤細(xì)胞的增殖及侵襲能力，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移或浸潤風(fēng)險增加。密封蛋白（claudin）能夠影響細(xì)胞間的連接，提高腫瘤細(xì)胞的變形能力，并促進(jìn)腫瘤細(xì)胞對基底膜組織的浸潤，增加了腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移風(fēng)險[3]。上皮鈣黏素（E-cadherin）可通過影響上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化過程，減少細(xì)胞間質(zhì)中的纖維組織成分，促進(jìn)細(xì)胞間質(zhì)中細(xì)胞骨架成分的降解，從而為腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移提供基礎(chǔ)[4-5]。有研究探討了E-cadherin蛋白在大腸癌組織中的表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)E-cadherin蛋白高表達(dá)是促進(jìn)大腸癌患者臨床預(yù)后惡化的重要因素，且E-cadherin蛋白表達(dá)與大腸癌患者的臨床分期密切相關(guān)[6]。但有關(guān)claudin 1蛋白表達(dá)與大腸癌患者臨床特征關(guān)系的研究較少。本研究收集80例大腸癌患者的大腸癌組織標(biāo)本和癌旁組織標(biāo)本，比較大腸癌組織和癌旁組織中claudin 1和E-cadherin蛋白的表達(dá)情況，并分析大腸癌組織中claudin 1和E-cadherin蛋白表達(dá)與大腸癌患者臨床特征的關(guān)系，旨在為大腸癌的臨床診療提供理論依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2016年1月至2017年1月應(yīng)急總醫(yī)院收治的80例大腸癌患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理學(xué)檢查確診為大腸癌；②年齡＜70歲；③均為原發(fā)性大腸癌，未接受放化療、免疫治療。排除標(biāo)準(zhǔn)：①臨床資料不完整；②合并其他部位惡性腫瘤；③中低位直腸癌。80例患者中，男44例，女36例；年齡39～67歲，平均（51.5±12.8）歲；TNM分期：Ⅰ期22例，Ⅱ期30例，Ⅲ期20例，Ⅳ期8例；分化程度：高分化30例，中分化31例，低分化19例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移28例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移52例。收集患者的大腸癌組織標(biāo)本80例及癌旁組織（距離遠(yuǎn)端大腸癌組織5 cm以上的腸組織）標(biāo)本80例。

1.2 免疫組織化學(xué)染色方法

石蠟切片脫蠟至水，滅活內(nèi)源性過氧化物酶（3%H2O2，室溫避光 10 min），10 mmol/L pH 6.0 枸櫞酸鈉緩沖液洗滌3次，每次3 min，磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered saline，PBS）沖洗5 min，滴加正常山羊或兔血清封閉液，37℃孵育15 min。用濾紙吸去血清，不洗，直接滴加一抗，37℃孵育2 h，滴加生物素化的二抗，37℃孵育40 min，PBS沖洗5 min，二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色，蘇木素復(fù)染，加拿大樹膠（或中性樹膠）封片。

1.3 免疫組織化學(xué)染色結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)

claudin 1蛋白陽性表達(dá)定位于細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞膜，E-cadherin蛋白陽性表達(dá)定位于細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)及細(xì)胞核。根據(jù)染色強(qiáng)度評分：無色為0分，淡黃色為1分，棕黃色為2分，褐色、黑色為3分。根據(jù)陽性細(xì)胞比例評分：陽性細(xì)胞比例≤10%為1分，11%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分。染色強(qiáng)度評分和陽性細(xì)胞比例評分相乘，＜3分為陰性，≥3分為陽性。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS 16.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示；計數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 claudin1和E-cadherin蛋白陽性表達(dá)率的比較

大腸癌組織中claudin 1蛋白的陽性表達(dá)率為65.0%（52/80），明顯高于癌旁組織的27.5%（22/80），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=22.627，P＜0.01）；大腸癌組織中E-cadherin蛋白的陽性表達(dá)率為42.5%（34/80），明顯低于癌旁組織的75.0%（60/80），差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=17.434，P＜0.01）。（圖1）

圖1 claudin1和E-cadherin 蛋白在大腸癌組織和癌旁組織中的表達(dá)情況（免疫組織化學(xué)染色，×400）

2.2 不同臨床特征大腸癌患者大腸癌組織中claudin1蛋白的表達(dá)情況

TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、侵及漿膜的大腸癌患者大腸癌組織中claudin 1蛋白的陽性表達(dá)率均高于TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、中高分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、未侵及漿膜的患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。不同腫瘤直徑的大腸癌患者大腸癌組織中claudin 1蛋白的表達(dá)情況比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。（表1）

2.3 不同臨床特征大腸癌患者大腸癌組織中E-cadherin 蛋白的表達(dá)情況

有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、侵及漿膜的大腸癌患者大腸癌組織中E-cadherin蛋白的陽性表達(dá)率均明顯低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、未侵及漿膜的患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。不同TNM分期、分化程度、腫瘤直徑的大腸癌患者大腸癌組織中E-cadherin蛋白的表達(dá)情況比較，差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。（表2）

表1 不同臨床特征大腸癌患者大腸癌組織中claudin 1蛋白表達(dá)情況的比較（n=80）

表2 不同臨床特征大腸癌患者大腸癌組織中E-cadherin蛋白表達(dá)情況的比較（n=80）

3 討論

飲食習(xí)慣因素尤其是長期的高蛋白飲食及家族性腸道上皮惡性病變病史，均能夠增加大腸癌的發(fā)生率[7]。手術(shù)治療或術(shù)后聯(lián)合放化療雖然能夠改善大腸癌患者的生存預(yù)后，提高5年生存率，但其對患者的遠(yuǎn)期生存情況仍然無明顯的改善[8-9]。目前，靶向治療已成為臨床上輔助治療惡性腫瘤的重要手段，對于相關(guān)生物學(xué)因子的表達(dá)情況進(jìn)行分析，能夠?yàn)榇竽c癌的免疫靶向治療或生物學(xué)治療提供理論基礎(chǔ)。

claudin 1蛋白是重要的細(xì)胞間連接蛋白，能夠提高腫瘤細(xì)胞對鄰近正常上皮組織的浸潤能力和對基底膜組織的黏附能力，為腫瘤細(xì)胞的擴(kuò)散和轉(zhuǎn)移提供基礎(chǔ)。研究表明，claudin 1蛋白能夠影響腫瘤細(xì)胞的增殖特性，提高腫瘤細(xì)胞DNA持續(xù)性擴(kuò)增的風(fēng)險[10]。E-cadherin蛋白能夠維持上皮細(xì)胞的極性和形態(tài)，抑制上皮細(xì)胞突破基底膜，E-cadherin蛋白表達(dá)水平降低可導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞間質(zhì)成分的分解增加，增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力，還能夠促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的浸潤過程[11-12]。有研究探討了E-cadherin蛋白在生殖系統(tǒng)、消化系統(tǒng)惡性腫瘤發(fā)生過程中的作用，認(rèn)為E-cadherin蛋白表達(dá)水平降低是腫瘤細(xì)胞生物學(xué)特征的重要影響因素[13]。

本研究結(jié)果顯示，claudin 1和E-cadherin蛋白在大腸癌組織中均存在明顯的異常表達(dá)，其中claudin 1蛋白在大腸癌組織中的陽性表達(dá)率明顯高于癌旁組織，而E-cadherin蛋白在大腸癌組織中的陽性表達(dá)率明顯低于癌旁組織，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.01）。提示claudin 1和E-cadherin蛋白均可影響大腸癌的發(fā)生發(fā)展過程。筆者認(rèn)為主要原因如下[14]：①claudin 1蛋白能夠提高大腸癌細(xì)胞中黏附分子的表達(dá)水平，提高大腸癌細(xì)胞對血管內(nèi)皮或淋巴結(jié)的黏附能力，促進(jìn)大腸癌細(xì)胞的轉(zhuǎn)移；②E-cadherin蛋白表達(dá)下降可導(dǎo)致大腸癌細(xì)胞上皮排列極性的改變，破壞大腸癌細(xì)胞基底膜的完整性，提高大腸癌的浸潤性。趙鵬等[15]研究也發(fā)現(xiàn)，E-cadherin蛋白陽性表達(dá)可影響大腸癌患者的病情進(jìn)展速度。本研究結(jié)果顯示，TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、侵及漿膜的大腸癌患者大腸癌組織中claudin 1蛋白的陽性表達(dá)率均高于TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、中高分化、無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、未侵及漿膜的患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。這主要是由于claudin 1蛋白能夠促進(jìn)大腸癌細(xì)胞對鄰近正常上皮組織的浸潤，導(dǎo)致大腸癌細(xì)胞分化成熟障礙，并影響大腸癌細(xì)胞淋巴結(jié)黏附分子的表達(dá)。本研究結(jié)果還顯示，有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、侵及漿膜的大腸癌患者大腸癌組織中E-cadherin蛋白的陽性表達(dá)率均明顯低于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、未侵及漿膜的患者，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。這主要是由于E-cadherin蛋白能夠影響細(xì)胞基底膜的完整性。

綜上所述，E-cadherin蛋白在大腸癌組織中低表達(dá)，claudin 1蛋白在大腸癌組織中高表達(dá)，并且與大腸癌的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。