張斌斌 王湘琦 趙超然 熊愛兵

[摘要]目的：本實(shí)驗(yàn)探討抑制PI3K/AKT/mTOR通路對(duì)順鉑誘導(dǎo)人皮膚黑素瘤細(xì)胞株A375細(xì)胞凋亡作用及其機(jī)制。方法：用順鉑處理人皮膚黑素瘤細(xì)胞株A375細(xì)胞后Western blot檢測(cè)細(xì)胞凋亡、PI3K/AKT/mTOR通路的活化情況以及細(xì)胞增殖-毒性檢測(cè)試劑盒（Cell Counting Kit-8，CCK-8）。用PI3K的抑制劑LY294002（LY）和mTOR的抑制劑雷帕霉素（Rapamycin，Rap）分別預(yù)處理以研究其對(duì)順鉑處理后人皮膚黑素瘤細(xì)胞株A375細(xì)胞凋亡的協(xié)同作用。為進(jìn)一步探索阻斷PI3K/AKT/mTOR通路對(duì)順鉑處理后人皮膚黑素瘤細(xì)胞株A375細(xì)胞凋亡的協(xié)同作用機(jī)制，采用Western blot檢測(cè)阻斷PI3K/AKT/mTOR后聯(lián)用順鉑處理人皮膚黑素瘤細(xì)胞株A375細(xì)胞中Bcl-2、Bcl-xl蛋白表達(dá)。結(jié)果：順鉑處理后的A375黑素瘤細(xì)胞中PARP的活化剪切體表達(dá)量水平呈濃度和時(shí)間依賴性增加，細(xì)胞活力呈濃度和時(shí)間依賴性降低（P<0.05）。順鉑處理A375黑素瘤細(xì)胞后PI3K/AKT/mTOR通路的活化。阻斷PI3K/AKT/mTOR通路再用順鉑聯(lián)合處理A375黑素瘤細(xì)胞后PARP的活化剪切體表達(dá)量明顯上調(diào)以及細(xì)胞活力明顯降低（P<0.05）。阻斷PI3K/AKT/mTOR通路后再用順鉑聯(lián)合處理A375黑素瘤細(xì)胞發(fā)現(xiàn)Bcl-2蛋白和Bcl-xl表達(dá)水平下調(diào)。結(jié)論：阻斷PI3K/AKT/mTOR通路對(duì)順鉑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡具有協(xié)同作用，該協(xié)同作用可能與Bcl-2和Bcl-xl蛋白下調(diào)有關(guān)。

[關(guān)鍵詞]PI3K/AKT/mTOR;Bcl-2;黑素瘤細(xì)胞;A375;順鉑;凋亡

[中圖分類號(hào)]R732.2? ? [文獻(xiàn)標(biāo)志碼]A? ? [文章編號(hào)]1008-6455（2019）08-0072-05

黑素瘤（melanoma）是起源于黑素細(xì)胞的惡性腫瘤，常發(fā)生在皮膚、黏膜等。近年來，黑素瘤的發(fā)病率和死亡率正在逐步增加[1-4]。它的發(fā)生、發(fā)展與紫外線照射時(shí)間延長(zhǎng)、女性激素、砷化物、酒精、輻射和飽和脂肪等有關(guān)[5-6]。目前對(duì)于黑素瘤的治療方案有手術(shù)治療、藥物治療和分子靶向治療。盡管手術(shù)切除治療黑素瘤是一種有效的手段，但是術(shù)后往往容易導(dǎo)致腫瘤的復(fù)發(fā)、患者生存率不盡人意[7-8]。此外，近年來對(duì)于黑素瘤的藥物化療研究逐漸增多，但是由于其腫瘤產(chǎn)生的耐藥性、藥物化療效果并不理想，所以有必要探討新的治療策略。有研究報(bào)道顯示，藥物化療與分子靶向治療在抗腫瘤中具有很好的抑制作用[9-10]。因此，本文探討藥物與分子靶向在黑素瘤中的作用及機(jī)制。

順鉑（cisplatin）是中心以二價(jià)鉑同兩個(gè)氯原子和兩個(gè)氨分子結(jié)合的重金屬絡(luò)合物，類似于雙功能烷化劑，可抑制DNA的復(fù)制過程，也是腫瘤治療中的常用化療藥物，其誘導(dǎo)肝癌、肺癌和卵巢癌等各種腫瘤細(xì)胞凋亡[11-12]。但是，順鉑誘導(dǎo)人皮膚黑素瘤細(xì)胞凋亡及凋亡耐受的具體機(jī)制卻少有人報(bào)道。磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶（phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B/mammalian target of rapamycin，PI3K/AKT/mTOR）是近年來研究較為廣泛的信號(hào)通路之一，該通路可抑制多種毒性刺激誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡，其作用在各類腫瘤細(xì)胞都有所體現(xiàn)[13-17]。因此，探討黑素瘤細(xì)胞耐受順鉑的機(jī)制是否與PI3K/AKT/mTOR通路有關(guān)具有重要意義。

本實(shí)驗(yàn)通過Western blotting、CCK-8等方法分析順鉑對(duì)A375黑素瘤細(xì)胞的影響，阻斷PI3K/AKT/mTOR通路后再用順鉑對(duì)A375黑素瘤細(xì)胞的凋亡和細(xì)胞活力影響及阻斷PI3K/AKT/mTOR通路增強(qiáng)順鉑對(duì)A375黑素瘤細(xì)胞凋亡的機(jī)制進(jìn)行研究。

1? 材料和方法

1.1 藥品與抗體：PI3K抑制劑（LY294002，LY）、mTOR抑制劑Rapamycin（Rap）購自美國Santa Cruz公司，順鉑（Cisplatin）購自美國Selleck Chemicals公司?？筆ARP（PARP，poly ADP-ribose polymerase）、p-AKT（Ser473） 、AKT、p-P70S6K、P70S6K、Bcl-2、Bcl-xl一抗購自美國Cell Signaling Technology公司，GAPDH一抗購自美國Santa Cruz公司，CCK-8試劑盒購自碧云天生物技術(shù)有限公司。人皮膚黑素瘤細(xì)胞株A375購自中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)：人皮膚黑素瘤細(xì)胞用含10%胎牛血清、1%青霉素/鏈霉素的DMEM完全培養(yǎng)基培養(yǎng)于5% CO2，37℃孵箱。視細(xì)胞生長(zhǎng)情況換液，待細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)到對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期時(shí)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究。

1.3 Western blot分析：十二烷基硫酸鈉-聚丙烯凝膠（ SDS-PAGE）電泳分離蛋白質(zhì)，采用hoefer半干電轉(zhuǎn)移將蛋白分子轉(zhuǎn)移到PVDF膜上，轉(zhuǎn)膜后將PVDF膜加入5%牛血清白蛋白進(jìn)行封閉，室溫輕搖封閉1h。待封閉結(jié)束后，1×TBST洗滌3次（5min/次）后，PVDF膜與一抗稀釋液室溫下輕搖動(dòng)孵育30min，4℃冰箱過夜，回收一抗，1×TBST洗滌3次（5min/次）。PVDF膜與熒光二抗稀釋液于室溫下輕搖動(dòng)孵育1h，回收二抗，1×TBST洗滌3次（5min/次） 。Odyssey-CLX掃描顯影。

1.4 蛋白提取：采用不同濃度順鉑（0、5、10、20mg/ml）刺激A375黑素瘤細(xì)胞24h后提取蛋白;采用順鉑（10mg/ml）處理A375黑素瘤細(xì)胞12h、24h、36h，分別提取每個(gè)時(shí)間點(diǎn)的蛋白;LY294002（PI3K通路抑制劑）預(yù)處理黑素瘤細(xì)胞A375中1h后聯(lián)用順鉑（10mg/ml）處理12h，24h，提取蛋白;Rap（mTOR通路抑制劑）預(yù)處理黑素瘤細(xì)胞A375中1h后聯(lián)用順鉑（10mg/ml）處理12h，24h，提取蛋白;依據(jù)以上實(shí)驗(yàn)分組情況，待藥物處理達(dá)到預(yù)定時(shí)間后，棄掉六孔板中培養(yǎng)液，PBS沖洗3次，隨即向各孔中加入適量含蛋白酶抑制劑的IP裂解液（約100μl），輕微晃動(dòng)，使IP裂解液覆蓋所有細(xì)胞，將六孔板置于冰上約15min。用細(xì)胞刮將細(xì)胞刮下并用1.5ml EP管收集，用超聲波細(xì)胞粉碎冰上超聲破碎細(xì)胞，超聲3次（5s/次）。用4℃低溫離心機(jī)12 000rpm離心15min，取離心后上清液裝入新的1.5ml EP管中，置于冰上。樣品變性：根據(jù)EP管中取得的蛋白樣品總體積，加入1/5總體積的5×蛋白loading buffer，充分混勻后，在100℃蜂窩爐煮變性5～10min，最后放在冰上約3min。

1.5 細(xì)胞活力檢測(cè)（CCK-8）：①根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)將不同濃度順鉑（0、5、10、20mg/ml）刺激A375黑素瘤細(xì)胞24h后，取出培養(yǎng)板;②倒掉培養(yǎng)基，向待檢測(cè)孔中加20?l的CCK-8溶液;③將CCK-8溶液處理后的培養(yǎng)板，直接放入37℃孵箱繼續(xù)培養(yǎng)2h;④采用多功能微孔板檢測(cè)儀測(cè)定每孔490nm處的吸光度，得到每孔的OD值;⑤測(cè)得的每個(gè)孔中OD值，制作時(shí)間點(diǎn)-活細(xì)胞率曲線圖。實(shí)驗(yàn)重復(fù)至少3次。

采用CCK-8分別檢測(cè)：順鉑（10mg/ml）處理A375黑素瘤細(xì)胞0h、24h、48h、72h的OD值;LY294002（PI3K通路抑制劑）預(yù)處理黑素瘤細(xì)胞A375中1h后聯(lián)用順鉑（10mg/ml）處理0h、24h、48h、72h的OD值;Rap（mTOR通路抑制劑）預(yù)處理黑素瘤細(xì)胞A375中1h后聯(lián)用順鉑（10mg/ml）處理0h、24h、48h、72h的OD值;根據(jù)測(cè)得的OD值制作時(shí)間點(diǎn)-活細(xì)胞率曲線圖。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：所有結(jié)果均采用SPSS 23.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2? 結(jié)果

2.1 順鉑誘導(dǎo)黑素瘤A375細(xì)胞凋亡具有濃度和時(shí)間依賴性：為研究黑素瘤A375細(xì)胞在不同濃度順鉑（0、5、10、20mg/ml）刺激24h下的凋亡情況，筆者采用Western blot檢測(cè)不同濃度順鉑（0、5、10、20mg/ml）刺激下黑素瘤A375細(xì)胞PARP的活化剪切體表達(dá)，發(fā)現(xiàn)隨著順鉑濃度的增加，剪切的PARP表達(dá)增加，這說明細(xì)胞凋亡增加（圖1A）。與此同時(shí)，用順鉑（10mg/ml）處理黑素瘤A375細(xì)胞12h、24h、36h，結(jié)果顯示隨著時(shí)間的推移，PARP的活化剪切體表達(dá)水平增加，說明順鉑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡隨著時(shí)間的推移而增加（圖1B）。 此外，為了進(jìn)一步驗(yàn)證順鉑對(duì)黑素瘤A375具有抑制作用，采用CCK-8試劑盒檢測(cè)不同濃度順鉑（0、5、10、20mg/ml）處理黑素瘤24h后的細(xì)胞活性影響，發(fā)現(xiàn)隨著濃度的增加，細(xì)胞活性減弱，這提示細(xì)胞凋亡（圖1C）。同時(shí)采用順鉑（10mg/ml）處理黑素瘤A375細(xì)胞0h、24h、48h、72h，結(jié)果提示隨著時(shí)間的推移，細(xì)胞活力也減弱（圖1D）。這些進(jìn)一步論證順鉑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡隨著時(shí)間的推移而增加。

2.2 順鉑誘導(dǎo)黑素瘤A375細(xì)胞PI3K/AKT/mTOR通路的活化：為研究順鉑（10mg/ml）處理黑素瘤A375細(xì)胞在不同時(shí)間點(diǎn)（12h、24h）后的PI3K/AKT/mTOR通路的影響，筆者通過Western blot檢測(cè)黑素瘤A375細(xì)胞在順鉑（10mg/ml）處理12h、24h后，p-AKT（S473） 、p-P70S6K均表達(dá)上調(diào)。說明順鉑誘導(dǎo)PI3K/AKT/mTOR通路的活化，見圖2。

2.3 抑制PI3K/AKT/mTOR通路增強(qiáng)順鉑在黑素瘤A375細(xì)胞中誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡：為了研究PI3K/AKT/mTOR通路在順鉑誘導(dǎo)黑素瘤A375細(xì)胞的細(xì)胞凋亡中的作用，采用PI3K抑制劑LY294002預(yù)處理1h阻斷PI3K/AKT通路后再用順鉑（10mg/ml）處理黑素瘤A375細(xì)胞24h，36h，Western blot結(jié)果顯示，預(yù)處理后聯(lián)用順鉑組與順鉑組相比，PARP蛋白的活化剪切表達(dá)量明顯上調(diào)，說明阻斷PI3K/AKT增強(qiáng)順鉑誘導(dǎo)的細(xì)胞死亡。（圖3）。與此同時(shí)，用mTOR的抑制劑Rap預(yù)處理1h阻斷mTOR通路后再用順鉑（10mg/ml）處理黑素瘤A375細(xì)胞24h，36h，Western blot結(jié)果顯示，預(yù)處理后聯(lián)用順鉑組與順鉑組相比PARP蛋白的活化剪切表達(dá)量明顯上調(diào)。

此外，為了進(jìn)一步驗(yàn)證PI3K/AKT/mTOR通路在順鉑誘導(dǎo)黑素瘤A375細(xì)胞的細(xì)胞凋亡中的作用，采用PI3K抑制劑LY294002預(yù)處理1h阻斷PI3K/AKT通路后再用順鉑（10mg/ml）處理黑素瘤A375細(xì)胞0h、24h，48h、72h，CCK-8結(jié)果顯示預(yù)處理后聯(lián)用順鉑組與順鉑組相比，細(xì)胞的活力明顯減弱（圖3A）。與此同時(shí)，用mTOR的抑制劑Rap預(yù)處理1h阻斷mTOR通路后再用順鉑（10mg/ml）處理黑素瘤A375細(xì)胞0h、24h，48h、72h，CCK-8結(jié)果顯示預(yù)處理后聯(lián)用順鉑組與順鉑組相比，細(xì)胞的活力明顯減弱（圖3B）。總之，抑制PI3K/AKT/mTOR通路增強(qiáng)順鉑在黑素瘤A375細(xì)胞中誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。

2.4 抑制PI3K/AKT/mTOR通路增強(qiáng)了順鉑在黑素瘤A375細(xì)胞凋亡，可能與Bcl-2、Bcl-xl表達(dá)水平下調(diào)有關(guān);為了研究抑制PI3K/AKT/mTOR通路增強(qiáng)了順鉑在黑素瘤A375細(xì)胞凋亡的可能機(jī)制，筆者在黑素瘤A375細(xì)胞中先用LY294002和Rap分別預(yù)處理1h分別阻斷PI3K/AKT和mTOR通路后，再用順鉑處理24h，36h，Western blot檢測(cè)Bcl-2、Bcl-xl蛋白表達(dá)。結(jié)果顯示，LY294002/Rap預(yù)處理聯(lián)用順鉑組與單用順鉑組相比，Bcl-2和Bcl-xl表達(dá)量明顯下調(diào)，說明阻斷PI3K/AKT/mTOR通路可能通過下調(diào)Bcl-2和Bcl-xl蛋白增強(qiáng)的順鉑誘導(dǎo)的凋亡，見圖4。

3? 討論

黑素瘤是好發(fā)于皮膚的惡性腫瘤，目前的治療方案有手術(shù)治療、放化療、免疫治療、分子靶向治療等[18-19]。對(duì)于藥物化療治療黑素瘤往往缺乏有效的藥物靶點(diǎn)，且對(duì)靶向藥物的耐藥性限制了黑素瘤患者長(zhǎng)期治療的療效[20]。盡管有報(bào)道一些藥物在一定程度上改善了黑素瘤的治療效果，但是黑素瘤對(duì)藥物的敏感性下降往往是化療藥物耐藥的關(guān)鍵原因之一，其與PI3K/AKT/mTOR作用于黑素瘤細(xì)胞息息相關(guān)[21-24]。本研究證實(shí)順鉑在A375黑素瘤細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡，實(shí)驗(yàn)在不同濃度順鉑處理下PARP的活化剪切表達(dá)隨著濃度的增加而增加，剪切的parp還隨時(shí)間推移而增加;此外，CCK-8細(xì)胞活力檢測(cè)分析表明隨著順鉑濃度增加和時(shí)間的推移A375黑素瘤細(xì)胞活力減弱（P<0.05）。這說明順鉑在A375黑素瘤細(xì)胞中誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。這與他人報(bào)道的順鉑在多種癌細(xì)胞中的細(xì)胞毒性作用結(jié)論一致[25-26]。本實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了阻斷PI3K/AKT/mTOR通路對(duì)順鉑誘導(dǎo)的A375細(xì)胞具有協(xié)同作用，本實(shí)驗(yàn)采用PI3K/AKT/mTOR通路的抑制劑與順鉑聯(lián)合處理A375細(xì)胞，與單獨(dú)使用順鉑組相比，剪切的PARP蛋白表達(dá)量明顯上調(diào)，CCK-8實(shí)驗(yàn)檢測(cè)分析細(xì)胞活力減弱（P<0.05），這說明阻斷PI3K/AKT/mTOR通路增強(qiáng)順鉑誘導(dǎo)A375細(xì)胞凋亡[27]。為了進(jìn)一步探索該協(xié)同作用的機(jī)制，采用PI3K/AKT/mTOR通路抑制劑與順鉑聯(lián)合處理A375細(xì)胞后檢測(cè)Bcl-2和Bcl-xl蛋白表達(dá)，發(fā)現(xiàn)Bcl-2和Bcl-xl蛋白表達(dá)明顯下調(diào)。因此推測(cè)阻斷PI3K/AKT/mTOR通路對(duì)順鉑誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡中的協(xié)同作用可能與Bcl-2和Bcl-xl下調(diào)有關(guān)。

本研究揭示了阻斷PI3K/AKT/mTOR對(duì)順鉑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡具有協(xié)同作用，這種保護(hù)作用可能與Bcl-2和Bcl-xl蛋白下調(diào)有關(guān)。

[參考文獻(xiàn)]

[1]Tsutsumida A，F(xiàn)urukawa H，Yamamoto Y，et al.Treatment strategy for cutaneous malignant melanoma[J].Int J Clin Oncol，2005，10（5）：311-317.

[2]Chung ES，Sabel MS，Sondak VK.Current state of treatment for primary cutaneous melanoma[J].Clin Exp Med，2004，4（2）：65-77.

[3]Jemal A.Cancer statistics[C].CA Cancer J Clin，2004，54（1）：8-29.

[4]Balch CM，Soong SJ，Gershenwald JE，et al.Prognostic factors analysis of 17 600 melanoma patients：validation of the American Joint Committee on Cancer melanoma staging system[J].J Clin Oncol，2001，19（16）：3622-3634.

[5]Oliveria S，Saraiya M，Geller A，et al.Sun exposure and risk of melanome[J].Arch Dis Child，91（2）：131-138.

[6]Sladden MJ，Balch C，Barzilai DA，et al.Surgical excision margins for primary cutaneous melanome[J].Cochrane Database Syst Rev，2009，129（4）：56.

[7]Mohs FE，Mikhail GR.Mohs micrographic surgery[J].WB Saunders，2016（1）：13-14.

[8]Pasquali S，Hadjinicolaou AV，Chiarion SV，et al.Systemic treatments for metastatic cutaneous melanoma [J].Mocellin S，2018.

[9]Berger M，Riching G，Kashofer K，et al.The window of opportunities for targeted therapy inBRAFwt/NRASws/KITwt melanoma：biology and clinic implications of fusion proteins and other mutations[J].G Ital Dermatol Venereol，2018，153（3）：349-360.

[10]Buzaid AC.Management of metastatic cutaneous melanoma[J].Oncology，2004，18（11）：1443-1450.

[11]Sancho-Martínez SM，Prieto-García L，Prieto M，et al.Subcellular targets of cisplatin cytotoxicity：an integrated view[J].Pharmacol Ther，2012，136（1）：35-55.

[12]Mouawad R，Sebert M，Michels J，et al.Treatment for metastatic malignant melanoma：old drugs and new strategies[J].Crit Rev Oncol Hematol，2010，74（1）：27-39.

[13]Qiao J，WJ Wang，Y Zhang.Aclidinium inhibits proliferation and metastasis of ovarian cancer SKOV3 cells via downregulating PI3K/AKT/mTOR signaling pathway[J].Oncol Lett，2018，16（5）：6417-6422.

[14]Lin YT，Wang HC，Chuang HC，et al.Pre-treatment with angiotensin-（1-7） inhibits tumor growth via autophagy by downregulating PI3K/Akt/mTOR signaling in human nasopharyngeal carcinoma xenografts[J].Mol Med（Berl），2018，34（12）：79-86.

[15]Ou X，Zhang GT，Xu Z，et al.Desumoylating Isopeptidase 2 （DESI2） inhibits proliferation and promotes apoptosis of pancreatic cancer cells through regulating PI3K/AKT/mTOR signaling pathway[J].Pathol Oncol Res，2018.

[16]Santarpia L，SM Lippman，AK El-Naggar.Targeting the MAPK-RAS-RAF signaling pathway in cancer therapy[J].Expert Opin Ther Targets，2012，16（1）：103-119.

[17]Mi YJ，Liang YJ，Huang HB，et al.Apatinib （YN968D1） reverses multidrug resistance by inhibiting the efflux function of multiple ATP-binding cassette transporters[J].Cancer Res，2010，70（20）：7981-7991.

[18]Donahue AC，F(xiàn)ruman DA.PI3K signaling controls cell fate at many points in B lymphocyte development and activation[J].Semin Cell Dev Biol，2004，15（2）：183-197.

[19]Swetter SM，Tsao H，Bichakjian CK，et al.Guidelines of care for the management of primary cutaneous melanoma[J].J Am Acad Dermatol，2019，80（1）：208-250.

[20]Hambright HG，Meng P，Kumar AP，et al.Inhibition of PI3K/AKT/mTOR axis disrupts oxidative stress-mediated survival of melanoma cells[J].Oncotarget，2015，6（9）：7195-7208.

[21]Vella LJ，Andrews MC，Behren A，et al.Immune consequences of kinase inhibitors in development，undergoing clinical trials and in current use in melanoma treatment[J].Expert Rev Clin Immunol，2014，10（8）：1107-1123.

[22]Calero R，Morchon E，Martinez-Argudo I，et al.Synergistic anti-tumor effect of 17AAG with the PI3K/mTOR inhibitor NVP-BEZ235 on human melanoma[J].Cancer Lett，2017，406：1-11.

[23]Li J，F(xiàn) Huang.JTC-801 suppresses melanoma cells growth through the PI3KAktmTOR signaling pathways[J].Med Sci （Paris），2018，34（1）：8-14.

[24]Makino E，Gutmann V，Kosnopfel C，et al.Melanoma cells resistant towards MAPK inhibitors exhibit reduced TAp73 expression mediating enhanced sensitivity to platinum-based drugs[J].Cell Death Dis，2018，9（9）：930.

[25]Su PF，SQ Song.Regulation of mTOR by miR-107 to facilitate glioma cell apoptosis and to enhance cisplatin sensitivity[J].Eur Rev Med Pharmacol Sci，2018，22（20）：6864-6872.

[26]Wang H，F(xiàn)ang L，Jiang J，et al.The cisplatin-induced lncRNA PANDAR dictates the chemoresistance of ovarian cancer via regulating SFRS2-mediated p53 phosphorylation[J].Cell Death Dis，2018，9（11）：1103.

[27]Yao ZF，Zhang XM，Wu Y.The effect of mTOR inhibitors on overcoming multidrug resistance in human melanoma cells[J].Clin Dematol，2014，43（3）：136-139.

[收稿日期]2019-01-03

本文引用格式：張斌斌，王湘琦，趙超然，等.阻斷PI3K/AKT/mTOR通路增強(qiáng)順鉑誘導(dǎo)的人皮膚黑素瘤細(xì)胞株A375凋亡的機(jī)制研究[J].中國美容醫(yī)學(xué)，2019，28（8）：72-76.