田曉輝 劉晶晶 龔育平 張淳軼

[摘要] 目的 分析張家界市手足口病病原體構(gòu)成特征的變遷，為手足口病防控提供科學(xué)依據(jù)。方法 收集2017—2018年張家界市手足口病臨床診斷患者的咽拭子樣本，采用實時熒光定量PCR方法檢測手足口病毒核酸。結(jié)果 321份咽拭子標本中，腸道病毒核酸總陽性檢出率為34.89%（112/321），其中EV71檢出率為3.12%，CoxA16檢出率為10.90%，未分型腸道病毒檢出率為20.87%。2017年、2018年未分型腸道病毒構(gòu)成比分別為64.71%、55.73%，所占比例明顯提高。病毒核酸陽性標本以<5歲兒童居多，占97.33%，男童陽性檢出率高于女童（P<0.05）。結(jié)論 2017—2018年張家界市<5歲兒童為手足口病高發(fā)人群。各型別病毒感染同時存在，但引起流行的主要腸道病原體為未分型腸道病毒，應(yīng)加強手足口病的病原學(xué)檢測。

[關(guān)鍵詞] 手足口病;病原學(xué);腸道病毒核酸;實時熒光定量PCR

[中圖分類號] R725.1 [文獻標識碼] A [文章編號] 1672-5654（2019）05（c）-0160-03

手足口病是由腸道病毒引起的傳染病，主要通過消化道、呼吸道和密切接觸者等途徑傳播，好發(fā)于5歲以下兒童[1]。可引起手、足及口腔等部位的皰疹和發(fā)熱[2]，多數(shù)患兒一周自愈，少數(shù)可引起肺水腫、心肌炎和無菌性腦炎等并發(fā)癥[3]，重癥患者病情快易致死亡。引起手足口病的病毒有20多種，均屬微小核糖核酸病毒科，其中以CoxA16和EV71最為常見[4]。

為了了解張家界市手足口病患者的病原體特征，制定防控策略，該次對2017—2018年321例臨床診斷病人的咽拭子樣本，采用實時熒光定量PCR方法進行EV71、CoxA16和腸道病毒的核酸檢測，并對結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)差異分析，有利于提出更好的預(yù)防控制措施?，F(xiàn)將結(jié)果報道如下。

1? 材料與方法

1.1? 研究材料

采集哨點醫(yī)院手足口病患者咽拭子標本321份，采集后放入病毒采樣管內(nèi)，4℃保存并在12 h內(nèi)送往實驗室。

1.2? 儀器與試劑

ABI7300熒光定量PCR儀（美國應(yīng)用生物系統(tǒng)公司），AUI001核酸提取儀（百泰克科技有限公司）。試劑：碩世生物科技股份有限公司的病毒核酸提取試劑盒（貨號：SDK60102），柯薩奇病毒A16型（CoxA16）、腸道病毒71型和腸道病毒通用型核酸檢測試劑盒（貨號：JC20302）。

1.3? 方法

①參照試劑盒使用說明書，使用自動核酸提取儀提取病毒RNA。

②采用腸道病毒通用型、EV71和CoxA16核酸檢測試劑盒，使用熒光定量PCR法進行核酸檢測，同時設(shè)置陰性、陽性和空白對照。反應(yīng)條件為：50℃、30 min;95℃、5min;按照95℃ 10 s;55℃、40 s。

③結(jié)果以Ct值≤35為陽性。EV71、CoxA16核酸測定分別陽性時則分別判為EV71陽性、Cox16陽性;當腸道病毒通用性核酸測定陽性，而EV71和CoxA16核酸測定分別為陰性時則判為未分型腸道病毒陽性。

④數(shù)據(jù)采用Excel和SPSS 18.0統(tǒng)計學(xué)軟件進行統(tǒng)計描述和數(shù)據(jù)處理分析，組間計數(shù)資料的比較使用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2? 結(jié)果

2.1? 病原學(xué)檢測結(jié)果

2017—2018年采集手足口病患者咽拭子標本321份，檢出陽性樣本112份，檢出率為34.89%.其中EV71陽性檢出率為3.12%，CoxA16陽性檢出率為10.90%。見表1。

腸道病毒2018年總檢出率（38.61%）高于2017年總檢出率（31.29%）（P<0.05）;2018年未分型腸道病毒陽性率（21.52%）高于2017年（20.25%）（P>0.05）;2018年CoxA16型腸道病毒陽性率（13.29%）高于2017年（8.59%）（P>0.05）;2018年EV71型腸道病毒陽性率（3.80%）高于2017年（2.45%）（P>0.05）;2018年未分型腸道病毒檢出率遠高于EV71和CoxA16（P<0.05）;2017年、2018年未分型腸道病毒構(gòu)成比分別為64.71%、55.73%，所占比例明顯提高。

2.2? 性別分布

321例病例中男童為172例，女童為149例，男女比例為1.15：1，病毒核酸陽性數(shù)之比為1.38：1.男童總腸道病毒檢出率（37.79%）顯著高于女童（31.54%）（P<0.05），而EV71、CoxA16及未分型腸道病毒檢出率差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），見表2。

2.3? 年齡分布

實驗室確診手足口病病例中，年齡最小的3個月，最大的11歲。實驗室確診病例以1～3歲居多，陽性構(gòu)成比為79.47%（表3）。

3? 討論

實時熒光定量PCR利用熒光信號積累實時監(jiān)測 PCR進程中產(chǎn)物總量的方法，具有特異性強、準確性高和靈敏度高等優(yōu)點，可用于感染性疾病的初篩，也可用于相關(guān)醫(yī)療機構(gòu)檢驗工作中的輔助手段[5]。

利用實時熒光定量PCR檢測病毒快速、敏感的特點[6]，對張家界市321份手足口病病原標本進行檢測。結(jié)果顯示：2017年、2018年未分型腸道病毒構(gòu)成比分別為64.71%、55.73%，所占比例明顯提高，由此可見引起張家界市手足口病流行的主要腸道病原體為未分型腸道病毒。結(jié)果顯示，所有報告病例中男性比例高于女性，與類似研究報道一致[7]。女童病例低于男童，可能與男童與人群接觸的機會多、不注重衛(wèi)生習(xí)慣和更為好動等因素有關(guān)，因此需要幫助他們養(yǎng)成好的衛(wèi)生習(xí)慣和大力開展衛(wèi)生知識宣傳，從而切斷手足口病的發(fā)生和流行[8]。另外臨床診斷病例主要集于5歲以下兒童，需加強此類兒童病原學(xué)的檢測。

此次檢測，321份手足口病臨床確診病例咽拭子標本EV陽性檢出率僅為3.12%，比報道的陽性檢出率偏低[9]，可能與標本類型、試劑和采用方法等存在差異有關(guān)。有文獻報道，糞便標本與咽拭子標本陽性檢出率比較有統(tǒng)計學(xué)意義[10，表現(xiàn)為咽拭子陽性檢出率低。若條件允許，則采集糞便或肛拭子標本，助于提高檢出率。

[參考文獻]

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[9]? 秦玉君，牟廣臻，劉靖宇，等.2007-2008年山東省煙臺市手足口病的流行病學(xué)特征分析及主要病原鑒定[J].疾病監(jiān)測，2010，25（1）：12-14.

[10]? 于秋麗，申悅霞，韓彩芝，等.河北省年2009年手足口病病原學(xué)研究[J].現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2012，39（8）：2026-2031.

（收稿日期：2019-02-21）

[作者簡介] 田曉輝（1971-），男，土家族，湖南張家界人，本科，副主任技師，主要從事實驗室質(zhì)量管理工作。