吳蜀瑤 諶瑞林 吳志瑰 李 洋 謝 斌

白術(shù)為常用補(bǔ)益類(lèi)中藥，來(lái)源于菊科植物白術(shù)AtractylodesmacrocephalaKoidz.的干燥根莖，其性溫，味苦、甘，歸脾、胃經(jīng)；具有健脾益氣、燥濕利水、止汗、安胎等功效[1]?，F(xiàn)代醫(yī)學(xué)中常用白術(shù)治療慢性胃腸炎、肝炎、貧血等疾病[2]。白術(shù)作為臨床大宗藥材之一，在我國(guó)具有悠久的生產(chǎn)、栽培和應(yīng)用歷史。傳統(tǒng)的白術(shù)產(chǎn)地加工方法分為曬干和烘干2種。烘干，稱烘術(shù)；曬干，稱生曬術(shù)[3]。而由于曬干受天氣影響較大，農(nóng)戶更青睞烘干的加工方法，故而目前在市場(chǎng)上以烘術(shù)占據(jù)主導(dǎo)地位。因烘干法較曬干法更易量化，故本研究對(duì)影響烘干的因素采用正交設(shè)計(jì)，建立HPLC測(cè)定白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的含量測(cè)定方法，并對(duì)其含量進(jìn)行測(cè)定，同時(shí)測(cè)定白術(shù)中揮發(fā)油及浸出物的含量，初步優(yōu)選白術(shù)產(chǎn)地加工工藝。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 安捷倫1260高效液相色譜儀(G1311B四元泵、G1329B進(jìn)樣器、G1316A柱溫箱、G1315D檢測(cè)器，安捷倫科技有限公司)、色譜柱(安捷倫ZORBAX SB-C18，5 μm，150 mm×4.6 mm)、揮發(fā)油測(cè)定器、MS204分析天平(梅特勒-托利多國(guó)際貿(mào)易(上海)有限公司)、101-2AB型電熱鼓風(fēng)干燥箱(天津市泰斯特儀器有限公司)、CPA225D分析天平(賽多利斯(上海)貿(mào)易有限公司)、KCD-1006型超聲儀(南昌科昌達(dá)超聲波設(shè)備廠)、HH-4型水浴鍋(江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司)。

1.2 試藥 白術(shù)藥材(采于江西永修，經(jīng)筆者鑒定為菊科植物白術(shù)AtractylodesmacrocephalaKoidz.的新鮮根莖)、白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)111975-201501)、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ?qū)φ掌?中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)111978-201501)、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)111976-201501)。水為純凈水，甲醇為色譜純，甲酸、乙醇為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 白術(shù)烘干試驗(yàn)的正交設(shè)計(jì) 根據(jù)產(chǎn)地的考察情況，結(jié)合文獻(xiàn)資料[4～7]，目前白術(shù)產(chǎn)地加工常采用的烘干工藝是將白術(shù)烘至全干，待表面須毛及泥土脫落后，在炮制飲片時(shí)再軟化切片；也有將白術(shù)烘至8成干后切片，繼續(xù)烘至完全干燥。筆者比較了2種烘干方法，綜合考慮，選取了烘干溫度、堆放層數(shù)、切片厚度作為考察因素進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以浸出物、揮發(fā)油、白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ含量組成的綜合評(píng)分為指標(biāo)做正交設(shè)計(jì)(白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ含量的權(quán)重系數(shù)為0.3、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ含量的權(quán)重系數(shù)為0.15、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ含量的權(quán)重系數(shù)為0.15，浸出物權(quán)重系數(shù)為0.2、揮發(fā)油權(quán)重系數(shù)為0.2)，初步篩選最優(yōu)產(chǎn)地加工工藝。因素與水平見(jiàn)表1。

表1 白術(shù)干燥正交試驗(yàn)的因素水平

2.2 白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ的含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充柱；以甲醇：0.1%甲酸溶液(65∶35)為流動(dòng)相，流速為0.6 ml·min-1；柱溫25 ℃；白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm，白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ檢測(cè)波長(zhǎng)為220 nm；白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ的理論塔板數(shù)均不低于7000。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 取白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ對(duì)照品適量，加甲醇制成每1 ml含白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ11 μg、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ14.8 μg、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ 9.8 μg的混合溶液，即得。

2.2.3 供試品溶液制備 取白術(shù)藥材粉末(過(guò)100目篩)約0.5 g，精密稱定，置50 ml具塞錐形瓶中，精密加入甲醇15 ml，精密稱定，超聲(功率250 W，頻率33 kHz)45 min，冷卻至室溫，用甲醇補(bǔ)足重量，用0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液作為供試品溶液。

2.2.4 線性關(guān)系考察 取上述對(duì)照品溶液，精密吸取此混合溶液0.5、1.6、2.4、3.2、4.0、10 ml分別置于10 ml的容量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。按上述色譜條件進(jìn)樣，以峰面積(Y)為縱座標(biāo)，濃度(X)為橫座標(biāo)，進(jìn)行回歸。得回歸方程：白術(shù)內(nèi)酯ⅠY=93.721X+0.3971(r=0.9996)，線性范圍0.55～11 μg/ml；白術(shù)內(nèi)酯ⅡY=85.896X-7.0404(r=0.9998)，線性范圍0.74～14.8 μg/ml；白術(shù)內(nèi)酯ⅢY=90.893X+1.7781(r=0.9999)，線性范圍0.49～9.8 μg/ml。

2.2.5 精密度試驗(yàn) 精密吸取對(duì)照品溶液10 μl，注入液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄色譜峰面積，計(jì)算白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ及Ⅲ峰面積。RSD分別為1.1%、0.8%、1.2%，表明該方法精密度較好。

2.2.6 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一白術(shù)樣品粉末，共6份，依法制備供試品溶液，按照上述色譜條件進(jìn)樣，測(cè)得白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ含量的RSD分別為0.8%、1.2%、1.0%，表明該方法的重復(fù)性良好。

2.2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取白術(shù)藥材粉末，依法制備供試品溶液，按照上述色譜條件分別于0、2、4、8、12 h進(jìn)樣10 μl，記錄各成分的峰面積，考察供試品溶液放置穩(wěn)定性。測(cè)得白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ峰面積的RSD分別為1.1%、1.2%、0.9%，表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.8 加樣回收試驗(yàn) 取已知含量的白術(shù)樣品粉末，共6份，每份約0.5 g，精密稱定，分別加入相當(dāng)于藥材中白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ對(duì)照品溶液，按照已確定的方法制備供試品溶液并依法測(cè)定，記錄色譜圖，計(jì)算回收率。白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ平均加樣回收率分別為101.75%(RSD=1.4%)、100.59%(RSD=2.2%)、100.34%(RSD=2.3%)，結(jié)果表明回收率試驗(yàn)符合要求，方法的精密度良好。見(jiàn)表2。

表2 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果

2.2.9 含量測(cè)定 分別精密吸取對(duì)照品溶液及供試品溶液各10 μl，注入液相色譜儀中測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表3。

2.3 浸出物含量測(cè)定 分別取9個(gè)烘術(shù)供試品2 g，精密稱定，照《中華人民共和國(guó)藥典》2015年版一部附錄XA項(xiàng)下的熱浸法測(cè)定，用60%乙醇作溶劑進(jìn)行測(cè)定。

2.4 揮發(fā)油含量測(cè)定 分別稱取9個(gè)烘術(shù)供試品20～30 g(過(guò)2號(hào)至3號(hào)篩，并混合均勻)，照揮發(fā)油測(cè)定法《中華人民共和國(guó)藥典》2015版一部(附錄XD)項(xiàng)下的乙法測(cè)定。

2.5 白術(shù)烘干工藝優(yōu)化正交試驗(yàn)結(jié)果 在3個(gè)主要因素中，由極差可以看出A>C>B，即烘干溫度的影響最大，切片厚度次之，而堆放層數(shù)的影響最小。由表4的顯著性分析，可得出因素A的P<0.05，可知烘干溫度相對(duì)于其他因素對(duì)白術(shù)的烘干質(zhì)量具有顯著影響，應(yīng)取最好水平。根據(jù)結(jié)果分析，白術(shù)烘干的最佳工藝為A2B2C2，即將白術(shù)平鋪堆放2層，在50 ℃下進(jìn)行烘烤，至八成干，將藥材切成厚度約0.4 cm，再繼續(xù)烘至完全干燥。白術(shù)烘干工藝優(yōu)化4因素3水平正交試驗(yàn)結(jié)果與分析見(jiàn)表3、表4。

表3 L9(34)正交試驗(yàn)結(jié)果

表4 方差與顯著性分析

2.6 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 參照優(yōu)選出的烘干條件分別加工3批烘術(shù)，測(cè)定其白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ、浸出物、揮發(fā)油的含量，計(jì)算RSD值。采用最優(yōu)烘干工藝即A2B2C2實(shí)驗(yàn)組合所得三批烘術(shù)藥材其白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ及揮發(fā)油和浸出物含量均高于正交試驗(yàn)中綜合評(píng)分得分最高的A2B1C2試驗(yàn)組合，表明所優(yōu)選的烘干工藝較為優(yōu)良，條件穩(wěn)定可行，可作為烘術(shù)加工的參考工藝。結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 白術(shù)最佳烘干工藝驗(yàn)證表

3 討論

本研究通過(guò)選取烘干溫度、堆放層數(shù)、切片厚度作為考察因素進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，以浸出物、揮發(fā)油、白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ、白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ含量組成的綜合評(píng)分為指標(biāo)完成正交試驗(yàn)，初步的篩選出了最優(yōu)產(chǎn)地烘干法的加工工藝。由于白術(shù)內(nèi)酯為白術(shù)的有效成分，尤以白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ藥理作用明顯，具有較強(qiáng)的增強(qiáng)唾液淀粉酶活性、促進(jìn)腸管吸收、調(diào)節(jié)腸道功能的作用[8]，其活性與白術(shù)健脾運(yùn)脾的作用相符合，因此在綜合評(píng)分時(shí)，白術(shù)內(nèi)酯Ⅰ含量的權(quán)重系數(shù)設(shè)為0.3、白術(shù)內(nèi)酯Ⅱ和白術(shù)內(nèi)酯Ⅲ含量的權(quán)重系數(shù)分別為0.15。

實(shí)驗(yàn)篩選了白術(shù)產(chǎn)地加工工藝的最優(yōu)方案，即將白術(shù)平鋪堆放2層，在50 ℃下進(jìn)行烘烤，至八成干，將藥材切成厚度約0.4 cm，再繼續(xù)烘至完全干燥。并按最佳工藝進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，驗(yàn)證結(jié)果表明所優(yōu)選的烘干工藝較為優(yōu)良，穩(wěn)定性好，從而證明了該工藝的科學(xué)性、合理性。另外，根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，堆放層數(shù)對(duì)白術(shù)的烘干質(zhì)量影響最小，P=0.1173>0.05，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，所以在實(shí)際的生產(chǎn)過(guò)程中，如果需干燥的藥材較多，為了提高效率，也可以采取將白術(shù)平鋪堆放3層，再依法進(jìn)行干燥。

綜上，通過(guò)正交試驗(yàn)，初步優(yōu)選了白術(shù)的烘干加工工藝，為規(guī)范白術(shù)產(chǎn)地加工操作規(guī)程提供了翔實(shí)的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和參考，也為指導(dǎo)藥農(nóng)生產(chǎn)、保證藥材質(zhì)量的穩(wěn)定可控、確保臨床療效奠定了基礎(chǔ)。下一步將結(jié)合農(nóng)戶的生產(chǎn)實(shí)際，對(duì)烘術(shù)的加工方法進(jìn)行更深入和細(xì)致的研究，優(yōu)選出既簡(jiǎn)單易行、成本低，又能最大程度保證藥材質(zhì)量的產(chǎn)地加工方法，以期指導(dǎo)農(nóng)戶生產(chǎn)加工。