張 軍 孫佳佳 馬雷雷 趙 靜 劉 穎

非傳染性疾病(主要包括糖尿病、心血管疾病、腫瘤等)是世界上最主要的死亡原因，占總死亡人數(shù)的65%[1]。2型糖尿病不僅對人類壽命和生活質(zhì)量有嚴重的威脅，還造成各國沉重的經(jīng)濟負擔，2015年一項研究表明[2]，全球糖尿病總花費占全球GDP的1.8%，約1.31萬億美元。因此，有效防治2型糖尿病及其并發(fā)癥的發(fā)生和發(fā)展尤為重要。中藥具有多途徑、多靶點且毒副作用小的優(yōu)勢，最新研究表明[3]，防治2型糖尿病應堅持益氣養(yǎng)陰、活血化瘀的治療原則。本研究為本科室自擬方，臨床療效突出，行動物實驗，旨在研究益氣養(yǎng)陰活血方對2型糖尿病大鼠糖脂代謝及胰島β細胞功能的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物選取SD雄性，SPF級，體質(zhì)量200～240 g的大鼠60只，均購自于中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院衛(wèi)生學環(huán)境醫(yī)學研究所，許可證號：SCXK-(軍)-2014-0001。實驗期間各組大鼠予專用飼料喂養(yǎng)，自由攝水，動物房溫度20～25 ℃，相對濕度50%～65%，自然晝夜光照，適應性喂養(yǎng)7 d，正式分組。

1.1.2 藥物中藥顆粒：黃芪15 g，黃精15 g，太子參15 g，當歸10 g，山萸肉15 g，鬼箭羽15 g，丹參30 g，葛根10 g，牡丹皮10 g，熟地黃15 g，三七粉2 g等。

1.1.3 試劑和儀器鏈脲佐菌素(STZ)：美國Sigma公司。大鼠胰島素ELISA試劑盒：北京普諾欣生物科技有限公司。血糖儀及配套試紙：德國拜耳公司；離心機：美國Thermo Fisher科技公司；MDF-u4086 s低溫冰箱：日本SANYO公司；Shandon325型石蠟切片機：英國Shandon公司。

1.2 方法

1.2.1 動物分組及給藥將60只8周齡SD大鼠適應性飼養(yǎng)7 d，隨機分為空白對照組(10只)和造模組(50只)，造模組選取FBG≥16.7 mmol/L并維持穩(wěn)定7 d為成功建立2型糖尿病大鼠模型，共48只。按體質(zhì)量分成層，隨機分為5組：模型組；津力達組以1.5 g/kg/d給藥；益氣養(yǎng)陰活血方高、中、低劑量組，藥量劑量按成人劑量6.25倍作為低劑量組用藥，按4∶2∶1給藥。高、中、低劑量組分別給予55.00 g/kg、27.50 g/kg、13.75 g/kg的益氣養(yǎng)陰活血方藥物溶液，空白組和模型組給予等體積生理鹽水灌胃。每天給藥1次，持續(xù)28 d。造模期間，2只大鼠因灌胃不當死亡，1只大鼠疑似肺感染死亡，最終45只大鼠計入統(tǒng)計。

1.2.2 取材灌胃給藥28 d后，小鼠處理前稱重，腹主動脈取血，分離血清，-20 ℃保存。取胰腺組織置于4%甲醛固定、脫水、石蠟包埋，制成 4 μm厚切片以備病理檢測。

1.2.3 指標測定

1.2.3.1 FBG、2hBG、FINS、HOMA-β、ISI測定測定各組大鼠治療前后FBG和2hBG，ELISA測定FINS，計算胰島素敏感指數(shù)：ISI=1/(FBG×FINS)，并取其自然對數(shù)；胰島素分泌指數(shù)：HOMA-β=20× FINS/(FBG-3.5)。

1.2.3.2 胰島細胞病理變化處死大鼠后取部分胰腺組織，常規(guī)HE染色，400倍光鏡下觀察各組大鼠胰島β細胞的病理變化。

2 結果

2.1 各組大鼠用藥前后FBG、2hBG比較用藥前，與空白組比較，模型組，津力達組，益氣養(yǎng)陰活血方高、中、低劑量組FBG、2hBG明顯升高(P<0.05)，但5組之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。用藥后，與空白組比較，模型組及各給藥組FBG、2hBG水平明顯升高(P<0.05)，與模型組比較，各給藥組FBG、2hBG水平明顯降低(P<0.05)，與津力達組比較，益氣養(yǎng)陰活血方各劑量組均能夠不同程度地降低FBG、2hBG，而以中劑量組效果最優(yōu)且明顯優(yōu)于津力達組(P<0.05)。用藥前后比較，用藥后各給藥組均不同程度地降低大鼠的FBG、2hBG水平，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 各組用藥前后FBG、2hBG比較 (只，

注：與空白組比較，1)P<0.05；與模型組比較，2)P<0.05；與津力達組比較，3)P<0.05；與用藥前比較，4)P<0.05

2.2 各組大鼠FINS、ISI、HOMA-β比較與空白組比較，模型組和各給藥組FINS，ISI和HOMA-β水平降低，有顯著性差異(P<0.05)。與模型組相比，益氣養(yǎng)陰活血方各劑量組ISI水平升高(P<0.05)，各給藥組FINS和HOMA-β水平升高(P<0.05)。與津力達組比較，益氣養(yǎng)陰活血方各劑量組ISI水平無差異(P>0.05)，F(xiàn)INS和HOMA-β水平均有所下降，而以中劑量組效果最佳(P<0.05)。見表2。

表2 各組大鼠FINS、ISI、HOMA-β水平比較 (只，

注：與空白組比較，1)P<0.05；與模型組比較，2)P<0.05；與津力達組比較，3)P<0.05；與中劑量組比較，5)P<0.05

2.3 各組大鼠TC、TG、LDL-C、HDL-C比較與空白組比較，模型組TC、TG和LDL-C水平顯著升高，HDL-C水平顯著降低(P<0.05)。與模型組比較，各給藥組TC、TG和LDL-C水平降低，HDL-C水平升高(P<0.05)。與津力達組比較，益氣養(yǎng)陰活血方中劑量組降低TC、TG和LDL-C水平明顯(P<0.05)。但對HDL-C的升高作用，各組間無明顯差異(P>0.05)。見表3。

表3 各組大鼠血脂水平比較 (只，

注：與空白組比較，1)P<0.05；與模型組比較，2)P<0.05；與津力達組比較，3)P<0.05；與中劑量組比較，5)P<0.05

2.4 胰腺組織形態(tài)學觀察光鏡下，正常組大鼠的胰島結構完整呈團索狀，胰島內(nèi)細胞界限清楚，多呈圓形或橢圓形，大小正常，形態(tài)飽滿，分布均勻，排列緊密規(guī)整，細胞胞核清晰居中呈卵圓形，胞質(zhì)豐富淺染。與正常組比較，模型組大鼠的胰島出現(xiàn)明顯的萎縮現(xiàn)象，島內(nèi)細胞界限模糊，形態(tài)結構不規(guī)整，排列紊亂。細胞核出現(xiàn)部分固縮深染，偏心分布，胰島間質(zhì)大量纖維化多呈松網(wǎng)狀，并伴有大量空泡，可見毛細血管增生和炎性浸潤。與模型組比較，益氣養(yǎng)陰活血方各給藥組胰島均有不同程度的改善，胰島萎縮明顯好轉(zhuǎn)，結構趨于完整，島內(nèi)細胞數(shù)量增多，形態(tài)較好，空泡樣變減少，無增生和炎性浸潤。而中劑量組較其他給藥組改善明顯，其形態(tài)接近正常組。見圖1。

圖1 各組大鼠胰島組織形態(tài)(HE×400)

3 討論

2型糖尿病(T2DM)屬于多基因遺傳性疾病，發(fā)生發(fā)展的主要病理基礎為胰島β細胞功能受損和胰島素抵抗，即胰島素分泌缺陷和胰島素作用缺陷[4]。不同程度的胰島素缺乏和胰島素抵抗可以引起糖、脂肪、蛋白質(zhì)、水及電解質(zhì)等代謝紊亂，而以糖脂代謝紊亂為主要臨床特征，久病會引起一系列并發(fā)癥?！疤侵拘浴笨赏ㄟ^線粒體、過氧化物酶體增殖物激活受體、蛋白激酶、神經(jīng)酰胺、氧化應激等多條途徑影響胰島功能，誘導2型糖尿病的發(fā)生[5]。

2型糖尿病屬中醫(yī)“消渴”范疇，而以陰虛為本、燥熱為標[6]。馮興中教授[7]指出“氣虛生毒”為2型糖尿病病理關鍵，治療上應益氣養(yǎng)陰，扶“氣虛”之正， 解“濕、熱、痰、瘀、風”之毒。李怡[8]亦從“毒”而論，認為消渴的發(fā)生是內(nèi)外合毒而致，形成“糖毒”，“糖毒”經(jīng)久還可以化生“熱毒”“火毒”“痰毒”“瘀毒”等。韓永明等[9]認為毒邪為病，傷人較甚，且頑固纏綿，這與糖尿病臨床特點相吻合。又久病多瘀，提出瘀毒貫穿2型糖尿病及其并發(fā)癥始終，故以氣陰兩虛兼瘀證最常見。本實驗根據(jù)對消渴病病因病機分析，采用導師臨床自擬經(jīng)驗方益氣養(yǎng)陰活血方，其中黃芪、太子參為君，黃精、當歸、鬼箭羽、丹參為臣，佐以葛根、三七、牡丹皮，共奏益氣養(yǎng)陰、活血化瘀之效。方中黃芪多糖[10]可通過對肝組織細胞線粒體及內(nèi)質(zhì)網(wǎng)的保護作用,改善衰老2型糖尿病小鼠模型的肝臟糖脂代謝。太子參多糖[11]能明顯降低小鼠血清MDA水平，激活小鼠AMPK及PKBSer473信號傳導,增強炎癥抑制蛋白IκBα的表達，進而有效抑制STZ誘導的C57BL/6J小鼠高血糖作用。黃精多糖、丹參多酚[12,13]可通過抑制體內(nèi)氧化應激反應，有效改善糖脂代謝。另有相關研究表明，當歸多糖[14]能明顯降低2型糖尿病大鼠血糖、血脂、糖化血紅蛋白情況。具有“破血通經(jīng)”作用的鬼箭羽[15]則能改善血流變，防治并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展。

本實驗采用益氣養(yǎng)陰活血方對高脂飼料加小劑量STZ誘導的2型糖尿病大鼠模型進行治療，結果表明，各給藥組FBG、2hBG、TC、TG、LDL-C水平降低，F(xiàn)INS、ISI、HOMA-β、HDL-C水平升高，大鼠胰腺組織HE染色顯示胰島組織均有不同程度的改善，而以益氣養(yǎng)陰活血方中劑量效果最優(yōu)。說明益氣養(yǎng)陰活血方可有效調(diào)節(jié)血糖，改善糖脂代謝紊亂，修復胰島β細胞結構和功能，促進胰島素分泌。且提示在今后的臨床運用中以益氣養(yǎng)陰活血方中劑量組藥物劑量為基礎，用合理的藥量達到最佳的療效。