張孟麗，束成杰，張衛(wèi)明*

(1. 南京師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，江蘇 南京 210023; 2. 南京野生植物綜合利用研究院，江蘇 南京 211100)

戈寶麻(GAU BAU KENDER)，羅布麻屬，夾竹桃科，多年生宿根草本植物，年生長(zhǎng)大約180天，具有很強(qiáng)的抗逆性[1-3]。羅布麻做茶飲和藥用已有非常悠久的歷史，自《中國(guó)藥典》中也記載羅布麻有清熱利水、平肝安神的功效，用于治療高血壓、頭暈、心悸、失眠等癥狀[4]。戈寶麻作為羅布麻的一種，功效也極其顯著。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，綠原酸、蘆丁、金絲桃苷、異槲皮素、紫云英苷、槲皮素、山柰酚是戈寶紅麻中主要的化學(xué)成分[5]。其中蘆丁作為一種活性物質(zhì)，具有清除自由基、促進(jìn)成骨細(xì)胞的生長(zhǎng)、降低血糖、抑制結(jié)腸癌和前列腺癌等作用[6-8]。近年來(lái)前人對(duì)戈寶麻研究開(kāi)發(fā)大多集中于其葉片上，因此，本文用液相色譜法測(cè)定新疆戈寶麻不同部位中蘆丁的含量，為今后戈寶麻的綜合開(kāi)發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)與方法

1.1 材料與儀器

戈寶麻(產(chǎn)地新疆阿勒泰)南京野生植物綜合利用研究院提供；NH-4數(shù)顯恒溫水浴鍋金壇市三壇儀器廠；SHZ-DⅢ循環(huán)水式真空泵鞏義市予華儀器責(zé)任有限公司；RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上海亞榮生化儀器廠；KF-1209電子天平凱豐集團(tuán)有限公司；BCD-183A冰箱合肥榮事達(dá)電冰箱有限公司；液相色譜儀美國(guó)Agilent公司；微孔濾膜上海嘉鵬科技有限公司。

1.2 試劑

蘆丁對(duì)照品上海源葉生物科技有限公司；甲醇、乙腈(色譜純，美國(guó)Fisher Scientific公司);磷酸為優(yōu)級(jí)純；水為純凈水；其他試劑均為分析純。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 蘆丁提取

本實(shí)驗(yàn)用乙醇作為提取劑，采用回流提取法提取蘆丁。將戈寶麻花、種子、葉片除雜干燥，粉碎，稱取戈寶麻各部位粉末50g，共3份，分別加入8倍體積分?jǐn)?shù)為80%乙醇在80℃下回流提取3次，每次1 h，合并提取液，離心后過(guò)濾，放至室溫，減壓回收溶劑，收集濾液，微膜過(guò)濾，得樣品液[9-11]。

1.3.2 色譜條件

流動(dòng)相：乙腈：0. 25%磷酸，流速1.0 ml/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為360 nm[9,10]。

1.3.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線

對(duì)照品溶液的制備準(zhǔn)確稱取蘆丁對(duì)照品各10.0 mg，分別置于10 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，置4℃冰箱避光保存?zhèn)溆肹11,12]。

準(zhǔn)確量取上述制備的蘆丁對(duì)照品溶液，配置成0.02、0.04、0.06、0.08、0.1 mg/mL的蘆丁對(duì)照品溶液。分別精密吸取20 μl進(jìn)樣，得線性關(guān)系良好的回歸方程。

1.3.4 樣品測(cè)定

將各供試品溶液離心后用濾膜過(guò)濾，精密吸取20μl進(jìn)樣，用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算其蘆丁含量。

1.4 數(shù)據(jù)處理

所有數(shù)據(jù)均為平均值±平均標(biāo)準(zhǔn)誤差(S.E.M)。數(shù)據(jù)分析使用SPSS 12.0軟件完成(SPSS Inc.，Chicage，USA)。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制

如圖1，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品的高效液相色譜圖，其單一顯著出峰時(shí)間為10-11min；如圖2，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算得知，蘆丁的峰面積與質(zhì)量濃度呈線性關(guān)系，回歸方程分別為為y=27.011x-10.74，r =0.9936(y為峰面積，x為質(zhì)量濃度，r為相關(guān)因數(shù))。如圖3，新疆戈寶紅麻花、種子、葉的供試品溶液高校液相色譜圖；

圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品高效液相色譜圖Fig.1 Standard chromatographic separation of figure ofrutin from GAU BAU KENDER

圖2 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線Figure 2 The standard curve ofrutin

圖3 新疆戈寶麻花、種子、葉片供試品溶液高校液相色譜圖Figure 3 Sample chromatographic separation of figure of rutin from GAU BAU KENDER

2.2 精密度試驗(yàn)

如表1，取各部位供試品溶液，精密吸取20 ul，按“1.3.2”色譜條件分別連續(xù)進(jìn)樣6次，測(cè)定各供試品溶液中蘆丁的峰面積，計(jì)算蘆丁含量的RSD值，以評(píng)價(jià)儀器的精密度[13]。測(cè)得花、種子、葉中蘆丁含量的RSD值分別為2.7%，2.2%，2.8%(n=6)，表明儀器精密度良好。

2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

如表2，取各部位供試品溶液，按“1.3.2”色譜條件，分別在0、2、4、6、8、10 h進(jìn)樣20 ul，測(cè)定各供試品溶液中蘆丁的峰面積，計(jì)算蘆丁含量的RSD值，以評(píng)價(jià)供試品溶液的穩(wěn)定性[14,16]。測(cè)得花、種子、葉中蘆丁含量的RSD值分別為2.8%，2.6%，2.5%(n=6)，表明各供試品溶液在配制24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.4 重復(fù)性試驗(yàn)

如表3，取不同部位供試品溶液各3份，并進(jìn)行HPLC測(cè)定，記錄峰面積計(jì)算蘆丁含量的RSD值，以評(píng)價(jià)方法的重現(xiàn)性[17,18]。測(cè)得花、種子、葉片中蘆丁含量的RSD值別為1.86%，2.9%，2.3% (n=3)，表明該方法的重復(fù)性滿足要求。

表1 精密度實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 1 Result of accuracy experiment

表2 各部位供試品溶液穩(wěn)定性測(cè)定結(jié)果Table 2 Result of stability test of the sample solution in the flowers

表3 重現(xiàn)性測(cè)定結(jié)果Table 3 Result of reproducibility experiment

2.5 回收率實(shí)驗(yàn)

如表4，分別取戈寶麻花、種子、葉片樣品液各1ml，加入對(duì)照品，制備供試品溶液，并在相同色譜條件下進(jìn)樣20 μl，測(cè)定峰面積，計(jì)算平均加樣回收率及RSD值。測(cè)得花、種子、葉片中蘆丁平均加樣回收率分別為98.65%，100.40%，96.9%；RSD 分別為 2.7%，0.09%，2.6% (n=6)。

表4 蘆丁加樣回收試驗(yàn)結(jié)果Table 4 Recovery of flowers, seeds and leaves of GAU BAUKENDER.

2.6 戈寶麻花、種子、葉各部位蘆丁含量比較

如表5，新疆戈寶麻花、種子、葉中均含蘆丁，花、種子、葉中蘆丁的得率分別為0.094%，0.014%，0.6%，因此，戈寶紅麻三個(gè)部位中蘆丁的含量分布為：葉>花>種子。

表5 花、種子、葉片部位蘆丁含量比較Table 5 Comparison of the content of rutinin flowers, seeds and leaves.

3 討論

本研究發(fā)現(xiàn)新疆戈寶麻花中蘆丁得率為0.094%，種子中蘆丁得率為0.014%，葉中蘆丁得率為0.6%，其葉中蘆丁含量與石秋梅[22]等研究發(fā)現(xiàn)的新疆產(chǎn)羅布紅麻中蘆丁含量結(jié)果非常接近。目前戈寶麻產(chǎn)品大多集中于對(duì)葉片的開(kāi)發(fā)利用，因此本文通過(guò)高效液相層析對(duì)戈寶麻花、種子、葉片三個(gè)部位的蘆丁含量進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)蘆丁的含量分布為：葉﹥花﹥種子，由此看出，研究不同部位戈寶麻中蘆丁含量，有利于更合理地利用戈寶麻資源，創(chuàng)造更高的附加值。