劉 斌，李祥蘭，王曉曉，尹亞玲

（四川省德陽(yáng)市食品藥品安全檢驗(yàn)檢測(cè)中心，四川 德陽(yáng) 618000）

復(fù)方丹參片組方中，冰片為佐使藥，有開(kāi)竅醒神、清熱止痛功效，可引諸藥入心經(jīng)[1]。由于其具有揮發(fā)性，在加工與存儲(chǔ)過(guò)程中含量易下降[2]，且市售冰片與樟腦氣味相似，功效不同，價(jià)格差異較大，易被冒用。而藥典該品種項(xiàng)下只有冰片的鑒別而無(wú)含量測(cè)定項(xiàng)；原國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局藥品檢驗(yàn)項(xiàng)下補(bǔ)充檢驗(yàn)方法和檢驗(yàn)項(xiàng)目批準(zhǔn)件（復(fù)方丹參片批準(zhǔn)件編號(hào)為2008010，以下簡(jiǎn)稱(chēng)“批準(zhǔn)件”），對(duì)樟腦殘留量進(jìn)行了檢測(cè)；文獻(xiàn)[3]報(bào)道了毛細(xì)管氣相色譜法測(cè)定復(fù)方丹參片中冰片的含量。本研究中參考文獻(xiàn)[4-9]建立了同時(shí)測(cè)定上述兩指標(biāo)的方法。由于冰片的主要成分是龍腦和異龍腦[10]，故以2種成分含量之和來(lái)判斷冰片的含量[11]?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

7890B型氣相色譜儀、7693型進(jìn)樣器、氫火焰離子化檢測(cè)器（FID)(美國(guó)安捷倫公司）；SPH-300A型氫氣發(fā)生器、SPB-3全自動(dòng)空氣源（北京中惠普分析技術(shù)研究所）；XS205型電子天平（梅特勒-托利多儀器<上海>有限公司）；KQ-700DV型數(shù)控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

樟腦對(duì)照品（批號(hào)為 110747-201409，含量為98.7%）、龍腦對(duì)照品（批號(hào)為110881-201709，含量為99.6%）、異龍腦對(duì)照品（批號(hào)為111512-201603，含量為96.7%），均購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院；水為純化水，無(wú)水乙醇和乙醇均為分析純（成都市科隆化學(xué)品有限公司）；復(fù)方丹參片樣品均來(lái)自2018年四川省食品藥品監(jiān)督管理局藥品評(píng)價(jià)性抽樣，詳見(jiàn)表1。

表1 復(fù)方丹參片樣品來(lái)源

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Agilent 17903-113I聚乙二醇-20 m毛細(xì)管色譜柱（30 m ×0.25 mm，0.25 μm）；溫度：進(jìn)樣口為220℃，氣化室為250℃，F(xiàn)ID為 250℃；流速：載氣高純度氮?dú)鉃? mL/min，氫氣為40 mL/min，空氣為400 mL/min，尾吹為 35 mL/min；柱溫：程序升溫，初始溫度為100℃，保持5 min，以10℃ /min的速率升溫至110℃，保持5 min，再以相同速率升溫至160℃，保持 4 min；分流比為 5∶1。

2.2 溶液制備

對(duì)照品溶液：稱(chēng)取樟腦、龍腦、異龍腦對(duì)照品適量，精密稱(chēng)定，加無(wú)水乙醇溶解，制成每1 mL含樟腦0.1 mg、龍腦0.3mg、異龍腦0.2mg的混合對(duì)照品溶液。

供試品溶液：取樣品10片，包衣片除去包衣，研細(xì)，取約60 mg，精密稱(chēng)定，置10 mL容量瓶中，加入無(wú)水乙醇 8 mL，超聲（40 kHz，320 W）處理 30 min，放冷，加無(wú)水乙醇定容，搖勻，濾過(guò)，濾液經(jīng)0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

陰性對(duì)照溶液：按復(fù)方丹參片處方比例，配制缺冰片的陰性樣品，再按供試品溶液制備方法制備，即得[12]。

2.3 方法學(xué)考察

專(zhuān)屬性試驗(yàn)：精密吸取2.2項(xiàng)下3種溶液各1 μL，按擬訂色譜條件分別進(jìn)樣檢測(cè)，色譜圖見(jiàn)圖1。結(jié)果樟腦、龍腦和異龍腦對(duì)照品的理論板數(shù)分別為23 147，35 822，35 380，遠(yuǎn)大于“批準(zhǔn)件”規(guī)定的 5 000。供試品溶液色譜圖中，未檢出與樟腦對(duì)照品溶液保留時(shí)間相同的色譜峰，陰性對(duì)照品溶液色譜圖中在與龍腦和異龍腦相同保留時(shí)間處無(wú)干擾峰，表明該方法專(zhuān)屬性良好。

線性關(guān)系考察：精密量取樟腦對(duì)照品溶液，龍腦、異龍腦混合對(duì)照品溶液各適量，分別置10 mL容量瓶中，加無(wú)水乙醇稀釋定容，搖勻。分別取1 μL注入氣相色譜儀，以待測(cè)成分質(zhì)量濃度（X）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程分別為Y1=3.045X1+0.997(r=0.9998，n=5）；Y2=2.930X2+0.633(r=0.9997，n=5）；Y3=3.188X3+0.723(r=0.999 6，n=5）。質(zhì)量濃度線性范圍分別為4.513～56.407 μg/mL，13.932～174.151 μg/mL，9.098 ～ 113.719 μg/mL。

精密度試驗(yàn)：精密吸取2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液及混合對(duì)照品溶液各適量，按擬訂色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積。結(jié)果樟腦、龍腦與異龍腦峰面積的RSD分別為0.87%，0.63%，0.30%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗(yàn)：精密吸取同一供試品溶液（批號(hào)為161005），室溫下分別放置 0，4，8，12，16，20，24 h 時(shí)按擬訂色譜條件進(jìn)樣，記錄峰面積。結(jié)果均未檢出樟腦，龍腦與異龍腦峰面積的RSD分別為1.85%和1.05%（n=7），表明供試品溶液室溫下放置24 h穩(wěn)定。

重復(fù)性試驗(yàn)：精密稱(chēng)取同一批（批號(hào)為161005）樣品6份，按擬訂色譜條件測(cè)定，結(jié)果均未檢出樟腦，龍腦和異龍腦平均含量的RSD分別為1.40%和1.10%（n=6），表明該方法的重復(fù)性良好。

樟腦檢出限及定量限：取2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液和混合對(duì)照品溶液倍比稀釋?zhuān)M(jìn)行測(cè)定。當(dāng)信噪比(S/N)為3∶1時(shí)，樟腦檢出限為0.187 6 mg/kg，當(dāng)S/N為10∶1時(shí)，其定量限為0.746 6 mg/kg。

圖1 氣相色譜圖

回收率試驗(yàn)：稱(chēng)取已知樟腦、龍腦、異龍腦含量的樣品6份，精密稱(chēng)定，分別精密加入樟腦、龍腦、異龍腦對(duì)照品適量，按擬訂色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積，并計(jì)算含量。結(jié)果見(jiàn)表2和表3。

表2 樟腦回收率試驗(yàn)（n=6）

表3 龍腦、異龍腦加樣回收試驗(yàn)（n=6）

2.4 樣品含量測(cè)定

取20批復(fù)方丹參片樣品粉末，各2份，依法制備供試品溶液，再按擬訂色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定樣品含量[12]。結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 復(fù)方丹參片中樟腦殘留量與冰片含量測(cè)定結(jié)果（mg/片）

3 討論

陳玉誼等[13]已對(duì)復(fù)方丹參片中冰片的2種提取方法——超聲提取法和回流提取法進(jìn)行了比較[13]，但未對(duì)浸漬方法進(jìn)行說(shuō)明，為了更有效地提取制劑中的冰片，故采用超聲提取30 min和浸漬過(guò)夜方法進(jìn)行比較，溶劑仍采用易溶解冰片的無(wú)水乙醇，結(jié)果顯示，2種提取方法樣品含量無(wú)顯著差異。為方便起見(jiàn)，采用超聲提取30 min的方法。

各廠家生產(chǎn)的復(fù)方丹參片內(nèi)在質(zhì)量參差不齊，參考楊建龍等[14]的方法測(cè)定復(fù)方丹參片中異龍腦和龍腦的含量。由于其法定標(biāo)準(zhǔn)中只規(guī)定了丹參的丹參酮ⅡA、丹酚酸B及三七的含量限度，未規(guī)定冰片的含量限度，導(dǎo)致不同廠家經(jīng)不同工藝生產(chǎn)出的產(chǎn)品中冰片含量差異較大，最低含量甚至不到理論含量的1/4，而按規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)均符合規(guī)定。故若能控制冰片含量，則既能充分發(fā)揮其芳香走竄特性，又能減少寒涼特性對(duì)胃腸道的刺激[15]。建議對(duì)冰片的含量進(jìn)行控制，嚴(yán)格監(jiān)管藥品生產(chǎn)企業(yè)關(guān)于冰片的投料和生產(chǎn)工藝，并采用氣相色譜法同時(shí)測(cè)定多家復(fù)方丹參片并進(jìn)行比較，以保證其臨床用藥的有效性。