崔 彥，余 蓮，馬玉蓉，謝 紅

（重慶市第五人民醫(yī)院藥劑科，重慶 400061）

腸道吸附毒素是治療慢性腎臟疾病的常用方法，臨床常用藥物為藥用炭片，可從腸道吸附各種尿毒癥毒素，降低患者體內(nèi)毒素水平，延緩腎功能惡化速度[1]。慢性腎病患者常需同時(shí)使用多種藥物，但目前缺少關(guān)于藥用炭片對(duì)這些藥物吸附能力的報(bào)道。本研究中參照以往的成果[2-3]，并經(jīng)過(guò)改進(jìn)，采用藥物溶出度儀模擬人工胃液和人工腸液環(huán)境，考察藥用炭片在其中對(duì)腎衰寧片中有效成分鹽酸小檗堿和丹參素鈉的吸附情況。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

儀器：1100型高效液相色譜儀，包括G1314可變波長(zhǎng)紫外檢測(cè)器和G1311一元泵（美國(guó)Agilent公司）；RCZ-8B型智能藥物溶出儀（天津天大天發(fā)科技有限公司）。

試藥：藥用炭片（河北長(zhǎng)天藥業(yè)有限公司，批號(hào)為48161120，規(guī)格為每片0.3 g）；腎衰寧片（山西德元堂藥業(yè)有限公司，批號(hào)為71218008，規(guī)格為每片0.36 g）；鹽酸小檗堿對(duì)照品（上海安普實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司，批號(hào)為R3550010，含量為98.8%）；丹參素鈉對(duì)照品（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)為110855-200506，含量為99.6%）；胃蛋白酶（批號(hào)為 170408，規(guī)格為 1 ∶10 000）、胰酶（批號(hào)為170415，規(guī)格為1∶250）均購(gòu)自上海如吉生物科技發(fā)展有限公司；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

鹽酸小檗堿：色譜柱為Kromasil C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相為乙腈 -0.4%磷酸溶液（32 ∶68，V/V），流速為 1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為 345 nm，柱溫為 40 ℃，進(jìn)樣量為 20 μL[4]。

丹參素鈉：色譜柱同上，流動(dòng)相為甲醇-1%磷酸溶液（4 ∶96，V/V），流速為 0.8 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為281 nm，柱溫為 35 ℃，進(jìn)樣量為 20 μL[5]。

2.2 溶液制備

人工胃液：取稀鹽酸（取鹽酸234 mL，加水稀釋至1 000 mL，即得）16.4 mL，加水約800 mL及胃蛋白酶10 g，搖勻，加水稀釋成 1 000 mL，即得[6]119。

人工腸液：取磷酸二氫鉀6.8 g，加水500 mL使溶解，得磷酸二氫鉀溶液（用0.1 mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)pH至6.8）；另取胰酶10 g，加水使溶解，得胰酶溶液；上述2種溶液混合，加水稀釋至1 000 mL，即得[6]325。

對(duì)照品溶液：取鹽酸小檗堿對(duì)照品14.34 mg，精密稱(chēng)定，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解并定容，精密量取5 mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇定容，搖勻，制成鹽酸小檗堿質(zhì)量濃度為0.028 7 g/L的對(duì)照品溶液。稱(chēng)取丹參素鈉對(duì)照品18.32 mg，精密稱(chēng)定，置50 mL容量瓶中，加50%甲醇溶解并定容，精密量取5 mL，置25 mL容量瓶中，加50%甲醇定容，搖勻，制成丹參素鈉質(zhì)量濃度為0.073 3 g/L的對(duì)照品溶液。

供試品溶液：參照2015年版《中國(guó)藥典（四部）》通則0931“溶出度與釋放度測(cè)定法”中第三法（小杯法）[7]121測(cè)定，溶出介質(zhì)200 mL（人工胃液或人工腸液），恒溫控制在（37.0±0.5）℃，轉(zhuǎn)速 100 r/min，將藥用炭片 6片和腎衰寧片5片同時(shí)投入同一溶出杯（規(guī)格為250 mL）中，同時(shí)將腎衰寧片5片單獨(dú)投入盛有相同體積溶出介質(zhì)的另一溶出杯中，分別于0.5，1.0，2.0，4.0 h時(shí)取一定量溶出液，經(jīng)0.22 μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。自取樣至濾過(guò)在30 s內(nèi)完成。量取的溶出介質(zhì)的體積之和如超過(guò)總體積的1%時(shí)則補(bǔ)充等溫度等體積的溶出介質(zhì)。

陰性對(duì)照溶液：取按處方比例除丹參、大黃、黃連外的其他藥材和輔料制作的制劑，按供試品溶液制備方法操作，即得。

圖1 高效液相色譜圖（鹽酸小檗堿，人工胃液）

圖2 高效液相色譜圖（丹參素鈉，人工胃液）

2.3 方法學(xué)考察

專(zhuān)屬性試驗(yàn)：取2.2項(xiàng)下對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照溶液各適量，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。詳見(jiàn)圖1至圖4?？梢?jiàn)，陰性對(duì)照品溶液在與鹽酸小檗堿對(duì)照品和丹參素鈉對(duì)照品溶液相同保留時(shí)間處無(wú)干擾峰，表明方法專(zhuān)屬性良好。

線性關(guān)系考察：1）鹽酸小檗堿，取2.2項(xiàng)下鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液，加流動(dòng)相依次稀釋10，100，200，500，1 000倍，制成系列對(duì)照品溶液，各精密量取20 μL，按2.1項(xiàng)下鹽酸小檗堿色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以鹽酸小檗堿質(zhì)量濃度（X，μg/mL）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=120 536X+9.099 9，r=0.999 9（n=5）。結(jié)果表明，鹽酸小檗堿檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為0.028 7～28.680 0 μg/mL。2）丹參素鈉，取2.2項(xiàng)下丹參素鈉對(duì)照品溶液，加流動(dòng)相依次稀釋 5，10，20，50，100，150 倍，制成系列對(duì)照品溶液，各精密量取20 μL，按2.1項(xiàng)下丹參素鈉色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。以丹參素鈉質(zhì)量濃度（μg/mL，X）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=11 454X-3.849，r=0.999 8（n=6）。結(jié)果表明，丹參素鈉檢測(cè)質(zhì)量濃度線性范圍為0.732 8～73.280 0 μg/mL。

圖3 高效液相色譜圖（鹽酸小檗堿，人工腸液）

圖4 高效液相色譜圖（丹參素鈉，人工腸液）

中間精密度：由2名分析員分別在不同日期，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，將5片腎衰寧片單獨(dú)投入盛有人工胃液或人工腸液的溶出杯中，溶出4 h取樣，再按2.1項(xiàng)下色譜條件在不同儀器上進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄峰面積。結(jié)果人工胃液和人工腸液中，鹽酸小檗堿峰面積的RSD分別為1.08%和2.23%（n=12），丹參素鈉峰面積的RSD分別為1.65%和1.78%（n=12），表明本試驗(yàn)中間精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：依法制備供試品溶液，將5片腎衰寧片單獨(dú)投入盛有人工胃液或人工腸液的溶出杯中，平行操作6份，精密吸取每個(gè)溶出杯中的供試品溶液，再按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果人工胃液和人工腸液中，鹽酸小檗堿峰面積的RSD分別為1.42%和2.53%（n=6），丹參素鈉峰面積的RSD分別為2.13%和1.99%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗(yàn)：精密量取2.2項(xiàng)下供試品溶液、人工胃液、人工腸液各6份，分成6組，分別加入高、中、低質(zhì)量濃度的鹽酸小檗堿對(duì)照品溶液及丹參素鈉對(duì)照品溶液，再按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積并計(jì)算加樣回收率。結(jié)果見(jiàn)表1和表2。

表1 鹽酸小檗堿加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取供試品溶液適量，分別于室溫下放置 0，2，4，8，10，12，24 h 時(shí)按 2.1 項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄峰面積。結(jié)果人工胃液和人工腸液中，鹽酸小檗堿峰面積的RSD分別為2.54%和3.18%（n=7），丹參素鈉峰面積的RSD分別為3.89%和3.26%（n=7），表明供試品溶液在室溫下放置24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

表2 丹參素鈉加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=9）

吸附率測(cè)定：取樣品適量，依法制備供試品溶液，再按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，平行測(cè)定5份，記錄峰面積，并計(jì)算吸附率[吸附率=（1-吸附后溶液中鹽酸小檗堿或丹參素鈉峰面積/未吸附溶液中鹽酸小檗堿或丹參素鈉峰面積）×100%][7-8]。結(jié)果見(jiàn)表3至表6。

表3 人工胃液中鹽酸小檗堿吸附情況（n=5）

表4 人工胃液中丹參素鈉吸附情況（n=5）

表5 人工腸液中鹽酸小檗堿吸附情況（n=5）

表6 人工腸液中丹參素鈉吸附情況（n=5）

3 討論

慢性腎臟病可導(dǎo)致各種代謝產(chǎn)物和毒素在體內(nèi)蓄積，并引起系列臨床癥狀和并發(fā)癥。治療的重要目標(biāo)是清除毒素，改善癥狀。藥用炭有發(fā)達(dá)的孔隙結(jié)構(gòu)，對(duì)尿素、肌酐、尿酸有良好的吸附能力，可有效減少慢性腎病患者體內(nèi)的各種毒素[9]。

本研究中分別采用人工胃液和人工腸液作介質(zhì)，以模擬人體胃部和腸道環(huán)境，考察藥用炭片在胃部和腸道中對(duì)與其合并服用的藥物腎衰寧片中有效成分鹽酸小檗堿和丹參素鈉的吸附情況。結(jié)果表明，置同一溶出杯后，藥用炭片對(duì)鹽酸小檗堿和丹參素鈉的吸附率隨著時(shí)間的推移均逐漸增高，在人工胃液中2h可完全吸附鹽酸小檗堿。人體胃排空時(shí)間為0.5～2.0h，由此推測(cè)，為減少藥用炭片對(duì)腎衰寧片中有效成分的吸附，建議服用兩藥之間至少間隔2h。此外，由于人工腸液中藥用炭片對(duì)腎衰寧片的吸附率低于人工胃液中，建議可將腎衰寧片制成腸溶制劑，以減少有效成分吸附。