劉曉斌，馬俊杰，王華民，李斌峰，馬珍珍，郝少君，孫建華，張正臣

0 引言

耳復(fù)康口服液系我院院內(nèi)制劑，組方由人參、紅花、酸棗仁、骨碎補(bǔ)、路路通、石菖蒲、枸杞、麥冬等組成，臨床應(yīng)用效果良好。研究顯示，耳復(fù)康口服液可改善腎上腺素致小鼠微循環(huán)障礙，對(duì)腎上腺素致急性血瘀癥小鼠微循環(huán)障礙模型毛細(xì)血管開(kāi)放數(shù)及血流情況有很好的改善作用，可改善慶大霉素致聾豚鼠的聽(tīng)力障礙[1-4]，而其對(duì)順鉑所致豚鼠耳聾是否存在保護(hù)作用，其機(jī)制如何，值得進(jìn)一步研究。本文探討耳復(fù)康口服液對(duì)順鉑所致豚鼠耳聾的影響，為耳復(fù)康口服液在臨床上治療耳鳴耳聾提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)[5-7]。

1 實(shí)驗(yàn)材料

1.1 藥品及試劑 耳復(fù)康口服液，由人參、紅花、川芎、麝香、酸棗仁、石菖蒲、骨碎補(bǔ)、路路通、杞果、麥冬組成；功能主治：益氣活血化瘀、醒腦通竅、祛風(fēng)通絡(luò)、滋陰潛陽(yáng)。主要用于耳鳴、耳聾及氣虛血瘀性中風(fēng)；生產(chǎn)廠家：中國(guó)人民解放軍第三七一醫(yī)院；用法用量：口服，1～2支/次，3次/d；規(guī)格：10 ml/支；生產(chǎn)批號(hào)：20150706。耳聾左慈丸(北京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥廠，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字Z11020011)。豚鼠超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒(蘇州卡爾文生物科技有限公司，批號(hào)：20180101SR)，丙二醛(MDA)測(cè)試盒(蘇州卡爾文生物科技有限公司，批號(hào)：20180101SR)。

1.2 儀器 耳聲發(fā)射檢測(cè)儀(河南邁松醫(yī)用設(shè)備制造有限公司，注冊(cè)證號(hào)：豫械注準(zhǔn)字20152210139)；順鉑(齊魯制藥有限公司，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H37021358)。

1.3 動(dòng)物 Hartley豚鼠，雌雄各半，級(jí)別：普通級(jí)，合格證編號(hào)：37009700000359，提供單位：濟(jì)南金豐實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司，許可證號(hào)：SCXK(魯)20140006，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證編號(hào)：SYXK(豫)2015-0005。

2 方法與結(jié)果

2.1 方法 將72只健康豚鼠隨機(jī)分為空白組，模型組，陽(yáng)性(耳聾左慈丸)組，耳復(fù)康大、中、小劑量組，每組12只，除空白組外，其余各組均給予腹腔注射順鉑注射液4 mg/kg，連續(xù)3 d。第4天采用ABR閾值測(cè)定對(duì)模型復(fù)制情況進(jìn)行評(píng)價(jià)。造模成功后，除空白組及模型組外，耳聾左慈丸組給藥劑量2.7 g/kg(相當(dāng)于人臨床劑量的9倍)，耳復(fù)康大、中、小劑量組給藥劑量18、9、4.5 ml/kg(相當(dāng)于人臨床劑量的18、9、4.5倍)給予相應(yīng)劑量灌胃給藥，所有組別均每天灌胃給藥，1次/d，各組灌胃均持續(xù)14 d。于末次給藥后取豚鼠耳蝸。表觀指標(biāo)：聽(tīng)覺(jué)耳動(dòng)反射；聽(tīng)力病理指標(biāo)：耳蝸組織；生化指標(biāo)：SOD、MDA。

2.2 結(jié)果 聽(tīng)覺(jué)耳動(dòng)反射又稱(chēng)普賴(lài)厄反射，表現(xiàn)為耳廓豎起以應(yīng)答刺激的聲音。分別于造模后第3天、給藥第14天，距豚鼠30 cm處用力擊掌發(fā)出掌聲作為刺激聲，以此觀察豚鼠耳廓豎起抖動(dòng)情況。每次檢測(cè)擊掌5次，每次擊掌間隔5 s，檢測(cè)期間保持周?chē)h(huán)境安靜無(wú)明顯雜音以保證檢測(cè)不被影響。按照耳廓豎起抖動(dòng)的強(qiáng)弱程度，將其強(qiáng)度分為4個(gè)等級(jí)：陰性(-)：耳廓完全無(wú)抖動(dòng)，耳廓反射消失；弱陽(yáng)性(+)：耳廓抖動(dòng)微弱，耳廓反射閾值重度提高；中陽(yáng)性(++)：耳廓抖動(dòng)較明顯，耳廓反射閾值輕度提高；強(qiáng)陽(yáng)性(+++)：耳廓抖動(dòng)非常明顯，耳廓反射閾值幾乎無(wú)變化。

2.2.1 耳復(fù)康口服液對(duì)順鉑所致豚鼠耳聾的影響 ①造模后第3天，各組對(duì)順鉑所致豚鼠耳聾的影響：各組給予順鉑注射液3 d后，采用聽(tīng)覺(jué)耳動(dòng)反射(普賴(lài)厄反射)觀察豚鼠耳廓豎起抖動(dòng)情況，結(jié)果見(jiàn)表1。Ridit檢驗(yàn)顯示，與空白組比較，各組豚鼠耳廓抖動(dòng)微弱(P<0.01)，說(shuō)明造模成功。

表1 造模后第3天各組對(duì)順鉑所致豚鼠耳聾的影響

②給藥第14天，各組對(duì)順鉑所致豚鼠耳聾的影響：各組給予順鉑注射液14 d后，采用聽(tīng)覺(jué)耳動(dòng)反射(普賴(lài)厄反射)觀察豚鼠耳廓豎起抖動(dòng)情況，結(jié)果見(jiàn)表2。結(jié)果顯示，經(jīng)Ridit檢驗(yàn)，與空白組相比，模型組動(dòng)物耳廓反射顯著減弱(P<0.01)，說(shuō)明模型制作成功。給藥14 d后，與模型組相比，陽(yáng)性組和耳復(fù)康大、中、小劑量均可顯著改善順鉑致豚鼠聽(tīng)覺(jué)耳動(dòng)反射情況(P<0.01)。

表2 給藥第14天各組對(duì)順鉑所致豚鼠耳聾的影響

2.2.2 耳復(fù)康口服液對(duì)順鉑致豚鼠耳聾模型TEOAE的影響 與空白組相比，模型組豚鼠總反應(yīng)能量升高，說(shuō)明模型制作成功(P<0.01)。與模型組相比，陽(yáng)性組及耳復(fù)康大、中劑量組豚鼠聽(tīng)力總反應(yīng)能量顯著改善(P<0.01)，耳復(fù)康小劑量組豚鼠聽(tīng)力總反應(yīng)能量明顯改善(P<0.05)，見(jiàn)表3。

2.2.3 耳復(fù)康口服液對(duì)順鉑致豚鼠耳聾模型MDA、SOD的影響 與空白組相比，模型組SOD水平降低(P<0.01)，MDA水平升高(P<0.01)，說(shuō)明模型制作成功。與模型組相比，陽(yáng)性組及耳復(fù)康大、中劑量組SOD水平升高(P<0.01)，耳復(fù)康小劑量組SOD水平升高(P<0.05)；與模型組相比，陽(yáng)性組、耳復(fù)康大劑量組MDA水平降低(P<0.01)，耳復(fù)康中、小劑量組MDA水平降低(P<0.05)，見(jiàn)表4。

2.2.4 耳復(fù)康口服液對(duì)順鉑致豚鼠耳聾模型耳蝸組織病理切片的影響 空白組：毛細(xì)胞胞核與細(xì)胞漿形態(tài)基本正常，未見(jiàn)病理改變；模型組：毛細(xì)胞胞漿空泡樣變，個(gè)別細(xì)胞固縮；陽(yáng)性組：毛細(xì)胞胞核飽滿(mǎn)，無(wú)空泡樣變性，毛細(xì)胞未見(jiàn)明顯病理改變；耳復(fù)康大劑量組：毛細(xì)胞形態(tài)正常，未見(jiàn)病理改變；耳復(fù)康中劑量組：少量毛細(xì)胞胞漿空泡樣變；耳復(fù)康小劑量組：少量毛細(xì)胞胞漿空泡樣變，個(gè)別細(xì)胞固縮。見(jiàn)圖1。

表3 耳復(fù)康口服液對(duì)順鉑致豚鼠耳聾模型TEOAE的影響

注：與模型組比較，#P<0.05，##P<0.01

表4 耳復(fù)康口服液對(duì)順鉑致豚鼠耳聾模型MDA、SOD的影響

注：與模型組比較，#P<0.05，##P<0.01

圖1 耳復(fù)康口服液對(duì)順鉑致豚鼠耳聾模型耳蝸組織病理切片的影響(HE，400×)

3 討論

順鉑是療效顯著的廣譜化療藥之一，其不良反應(yīng)較大[8-10]。對(duì)耳的毒副作用雖然出現(xiàn)較遲[11-13]，但目前沒(méi)有較好的防治辦法[14]，因此，探尋克服其耳毒性作用的方法至關(guān)重要。

隨著年齡的增長(zhǎng)，體內(nèi)的氧代謝減慢，產(chǎn)生的自由基增多，過(guò)多的自由基損傷耳蝸細(xì)胞，造成聽(tīng)力的下降和逐漸消失。在抗氧化酶系統(tǒng)中，SOD是重要的一員，可以清除體內(nèi)代謝產(chǎn)生的氧自由基，測(cè)定血清SOD活性，可以反映機(jī)體的自由基清除能力。測(cè)定耳蝸SOD活性，可以反映SOD對(duì)耳蝸的保護(hù)作用。MDA是氧化反應(yīng)產(chǎn)生大量脂質(zhì)過(guò)氧化物的重要產(chǎn)物之一，反映機(jī)體自由基的生成水平和組織損傷程度，常與SOD共同作為研究自由基的指標(biāo)。

耳復(fù)康口服液由人參、紅花、麝香、骨碎補(bǔ)、路路通等中藥組成。諸藥合用，具有益氣、活血化瘀、醒腦通竅、祛風(fēng)通絡(luò)、滋陰潛陽(yáng)的功效。腎中真陽(yáng)真陰皆得補(bǔ)益，陽(yáng)蒸陰化，腎氣充盈，則耳聾自除。本研究結(jié)果顯示，順鉑誘導(dǎo)豚鼠發(fā)生耳聾后，耳復(fù)康口服液的干預(yù)能夠降低模型豚鼠的反應(yīng)[15-18]。耳復(fù)康大、中、小劑量均可顯著改善順鉑致豚鼠聽(tīng)覺(jué)耳動(dòng)反射情況；3種劑量均可改善豚鼠聽(tīng)力總反應(yīng)能量，升高血清SOD水平，降低MDA水平，改善耳蝸病理組織。

綜上所述，耳復(fù)康口服液能改善豚鼠聽(tīng)覺(jué)耳動(dòng)反射，降低血清中MDA水平，提高SOD水平，能改善耳蝸病理組織。初步認(rèn)為耳復(fù)康口服液能對(duì)抗順鉑所致豚鼠耳聾的情況。

致謝：本實(shí)驗(yàn)在河南中醫(yī)藥大學(xué)苗明三教授指導(dǎo)下完成，特此致謝！