王 琰,王 靜,張志明,程百茹

1.西安交通大學(xué)附屬西安市中心醫(yī)院婦科(西安 710004)；2.陜西省腫瘤醫(yī)院婦瘤科(西安 710061)；3.西安交通大學(xué)附屬西安市中心醫(yī)院檢驗(yàn)科(西安710004)

卵巢癌是一種早期診斷率低而病死率高的婦科惡性腫瘤，其發(fā)病率趨于年輕化。它的高病死率可能是由于其早期無(wú)特異性癥狀，大多數(shù)病人在診斷時(shí)已是晚期。如果能為卵巢癌的早期篩查提供一組新的非侵入性的檢測(cè)手段，成為目前研究的熱點(diǎn)。Hellstrom等[1]用ELISA法檢測(cè)卵巢癌患者尿液中人附睪蛋白4(Humanepididymis secretory protein4，HE4)有較高濃度的表達(dá)，為卵巢癌的診斷提供了一種無(wú)創(chuàng)的檢測(cè)手段。我們前期實(shí)驗(yàn)[2]也證明，卵巢癌患者尿液中HE4檢測(cè)具有較高的靈敏度及特異性，能有效預(yù)測(cè)早期卵巢癌的診斷。間皮素(Mesothelin，MSLN)是一種細(xì)胞表面糖蛋白，具有免疫原性的分化抗原，具有分子量小、穩(wěn)定性好的特點(diǎn)。研究[3-4]表明，其極易通過(guò)腎小球?yàn)V過(guò)，且不易受血清蛋白及降解酶的影響，在卵巢癌中也有高表達(dá)。本研究采用ELISA法測(cè)定卵巢腫瘤患者尿液中MSLN和HE4含量，并探討有無(wú)相關(guān)性，從而為臨床尋找一種便捷、無(wú)創(chuàng)、有效的卵巢癌早期診斷的檢測(cè)方法。

資料與方法

1 一般資料 選取2015年12月至2018年12月陜西省腫瘤醫(yī)院婦瘤科及西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬西安市中心醫(yī)院婦科住院手術(shù)患者73例，根據(jù)術(shù)后病理證實(shí)，上皮性卵巢癌41例,年齡(34.6±8.2)歲，其中Ⅰ～Ⅱ期12例，Ⅲ～Ⅳ期29例，漿液性癌27例，粘液性癌14例；卵巢良性腫瘤32例，年齡(33.7±6.1)歲，其中漿液性囊腺瘤19例，粘液性囊腺瘤13例；同期隨機(jī)選取在本院健康體檢的女性30例為正常對(duì)照組，年齡(35.4±7.5)歲。所有病例均為初次手術(shù)，術(shù)前未合并其它內(nèi)科疾病且均為原發(fā)腫瘤，均未接受過(guò)化療或放療，均未用過(guò)激素類(lèi)藥物。所有標(biāo)本采集前均獲得患者及體檢者的知情同意。

2 檢測(cè)方法 術(shù)前留取晨起中段尿10 ml(取標(biāo)本前均未行放、化療及其它治療)裝入無(wú)菌試管中，靜置離心后置于-40 ℃冰箱保存。正常對(duì)照組于體檢時(shí)留尿。所有標(biāo)本采用同一批號(hào)試劑盒以減少批間誤差，并避免反復(fù)凍融。人HE4試劑盒購(gòu)自上海BlueGene生物公司，MSLN試劑盒購(gòu)自美國(guó)ADL公司。應(yīng)用ELISA法測(cè)定。

3 結(jié)果判定 測(cè)定尿液中MSLN和HE4濃度檢測(cè)嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作，以正常健康婦女(均數(shù)±1.96s)作為上下警戒值,計(jì)算尿液中間皮素臨界值為2.7 ng/ml，HE4臨界值為6.51pmol/L，超過(guò)上限值為陽(yáng)性。

結(jié) 果

1 三組患者尿液中MSLN和HE4檢測(cè)結(jié)果比較 見(jiàn)表1。

表1 三組尿液中MSLN、HE4檢測(cè)結(jié)果比較

注：與卵巢良性腫瘤及正常對(duì)照組比較，*P<0.05；與正常對(duì)照組比較，△P>0.05

上皮性卵巢癌組尿液中MSLN濃度高于卵巢良性腫瘤及正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；上皮性卵巢癌組尿液中HE4濃度高于卵巢良性腫瘤及正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；卵巢良性腫瘤組與正常對(duì)照組尿液中MSLN、HE4檢測(cè)結(jié)果比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

2 不同臨床分期、病理類(lèi)型上皮性卵巢癌組尿液中MSLN和HE4檢測(cè)陽(yáng)性率比較 見(jiàn)表2。上皮性卵巢癌Ⅲ～Ⅳ期患者尿液中MSLN陽(yáng)性率高于Ⅰ～Ⅱ期組，Ⅲ～Ⅳ期組尿液中HE4陽(yáng)性率高于Ⅰ～Ⅱ組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；粘液性卵巢癌組尿液中MSLN檢測(cè)陽(yáng)性率高于漿液性卵巢癌組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；粘液性和漿液性卵巢癌組尿液中HE4檢測(cè)的陽(yáng)性率，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。

表2 不同臨床分期、病理類(lèi)型上皮性卵巢癌患者尿液中MSLN和HE4陽(yáng)性率比較[例(%)]

注：與上皮性卵巢癌Ⅲ～Ⅳ期組比較，*P<0.05；與粘液性卵巢癌組比較，△P<0.05

3 兩種腫瘤標(biāo)志物診斷上皮性卵巢癌的靈敏度和特異性比較 見(jiàn)表3。41例上皮性卵巢癌患者尿液中MSLN檢測(cè)陽(yáng)性者24例，靈敏度58.5%，特異性72.6%；尿液中HE4檢測(cè)陽(yáng)性者27例，靈敏度65.9%，特異性77.4%；尿液中MSLN+ HE4聯(lián)合檢測(cè)任何一項(xiàng)陽(yáng)性視為聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性，兩項(xiàng)結(jié)果均陰性視為聯(lián)合檢測(cè)陰性；尿液中MSLN+ HE4聯(lián)合檢測(cè)陽(yáng)性者39例，靈敏度95.1%，特異性96.8%，兩者聯(lián)合檢測(cè)的靈敏度及特異性均顯著高于單一指標(biāo)檢測(cè)，且聯(lián)合檢測(cè)的特異性稍高于靈敏度。

表3 兩種腫瘤標(biāo)志物診斷上皮性卵巢癌靈敏度和特異性比較

注：靈敏度=真陽(yáng)性例數(shù)/(真陽(yáng)性例數(shù)+假陽(yáng)性例數(shù))，特異性=真陰性例數(shù)/(真陰性例數(shù)+假陽(yáng)性例數(shù))

討 論

1 尿液MSLN與上皮性卵巢癌 MSLN是相對(duì)分子量為42～45 kDa的一種細(xì)胞表面糖蛋白，是一種新發(fā)現(xiàn)的腫瘤細(xì)胞表面抗原。Sasaki等[5]研究上皮性卵巢癌不同臨床分期、病理類(lèi)型患者血清中MSLN表達(dá)，結(jié)果顯示漿液性卵巢癌患者血清中MSLN表達(dá)顯著高于粘液性卵巢癌，且分期越晚表達(dá)越高，說(shuō)明血清MSLN表達(dá)與卵巢癌的不同病理類(lèi)型、臨床分期有關(guān)。Hannaka等[6]測(cè)定了253例卵巢腫瘤患者血清及尿液中MSLN水平，結(jié)果顯示，尿液MSLN診斷早期卵巢癌的敏感性大于血清MSLN。本實(shí)驗(yàn)對(duì)上皮性卵巢癌、卵巢良性腫瘤及正常體檢者三組患者尿液中MSLN含量進(jìn)行比較，同時(shí)對(duì)不同臨床分期及病理類(lèi)型的卵巢癌患者尿液中MSLN含量進(jìn)行了對(duì)比分析，結(jié)果顯示，MSLN診斷上皮性卵巢癌的靈敏度為58.5%，特異性為72.6%；在不同臨床分期及病理類(lèi)型，MSLN在上皮性卵巢癌Ⅰ～Ⅱ期患者尿液中檢測(cè)陽(yáng)性率為33.3%，Ⅲ～Ⅳ期可達(dá)69.9%，且粘液性卵巢癌組尿液中MSLN檢測(cè)陽(yáng)性率高于漿液性卵巢癌組，差異有顯著性(P<0.05)。這進(jìn)一步說(shuō)明，卵巢癌患者尿液中MSLN值可反映病情嚴(yán)重程度及腫瘤臨床分期，期別越晚MSLN升高越明顯，MSLN測(cè)定可以作為卵巢癌病情預(yù)測(cè)的指標(biāo)之一。

2 尿液HE4與上皮性卵巢癌 人附睪蛋白4(HE4)是一個(gè)分子量為 25 kDa 的分泌型蛋白。大量研究[7-9]表明，HE4促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的粘附、增殖和侵襲。隨后有研究[10-12]報(bào)道，在卵巢癌患者尿液中也可檢測(cè)到作為腫瘤標(biāo)志物的HE4，并且得出尿液HE4對(duì)卵巢癌的敏感度與血清HE4相當(dāng)，特異度卻顯著高于血清HE4。本研究檢測(cè)了103例女性尿液中HE4含量，其中包含73例卵巢腫瘤患者(按術(shù)后病理確診卵巢癌41例、良性腫瘤32例)及正常體檢組30例，結(jié)果顯示，HE4在上皮性卵巢癌尿液中診斷靈敏度為65.9%，特異性為77.4%；在不同臨床分期中，隨著卵巢癌臨床分期增加其含量顯著升高，上皮性卵巢癌Ⅰ～Ⅱ期尿液中的陽(yáng)性表達(dá)率為41.7%，Ⅲ～Ⅳ期的陽(yáng)性表達(dá)率為75.9%，差異有顯著性(P<0.05)，這與文獻(xiàn)報(bào)道相符，提示其可作為鑒別卵巢良惡性腫瘤的有效指標(biāo)。但本實(shí)驗(yàn)結(jié)果也顯示，HE4水平與上皮性卵巢癌的病理類(lèi)型無(wú)關(guān)，這與報(bào)道[5]不一致。

3 上皮性卵巢癌組尿液中MSLN和HE4聯(lián)合檢測(cè)診斷卵巢癌的價(jià)值 本研究顯示，上皮性卵巢癌尿液中聯(lián)合檢測(cè)MSLN+HE4水平的靈敏度為95.1%，特異性為96.8%，與單一指標(biāo)檢測(cè)相比均有一定的優(yōu)勢(shì)，并且可以彌補(bǔ)單一指標(biāo)檢測(cè)的缺陷，提高診斷效能。

但由于本研究納入的樣本量較少，此結(jié)論仍需要大量的研究支持，從而為卵巢癌的早期診斷提供一種更便捷、更高效、無(wú)創(chuàng)、且有價(jià)值的方法。