周奕辰 王金巖

(中國(guó)醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院免疫教研室，沈陽(yáng)110122)

肺癌是發(fā)病率和死亡率最高的惡性腫瘤之一，肺癌的轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致患者死亡的主要原因。肺癌的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)復(fù)雜過(guò)程，涉及原位癌的形成、演化以及遠(yuǎn)隔組織的侵襲與轉(zhuǎn)移，其中腫瘤原位癌的形成和演化特性決定腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移[1]。肺癌的發(fā)生發(fā)展與機(jī)體的免疫系統(tǒng)密切相關(guān)。免疫系統(tǒng)和腫瘤細(xì)胞相互作用影響腫瘤的形成和演化，如免疫原性較強(qiáng)的腫瘤細(xì)胞可被免疫系統(tǒng)識(shí)別并清除，而免疫原性較弱的腫瘤細(xì)胞得以存活并與基質(zhì)細(xì)胞和免疫細(xì)胞共同構(gòu)成腫瘤微環(huán)境，有助于腫瘤細(xì)胞的存活和演化[2]。研究發(fā)現(xiàn)，腫瘤微環(huán)境中免疫細(xì)胞的種類(lèi)和數(shù)量在肺癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用，如腫瘤浸潤(rùn)性CD8+T細(xì)胞和NK細(xì)胞的數(shù)量與腫瘤患者的臨床預(yù)后正相關(guān)，而浸潤(rùn)性免疫抑制細(xì)胞如MDSC和Treg細(xì)胞的數(shù)量則與腫瘤的預(yù)后負(fù)相關(guān)[3]。

CD4+CD25+regulatory T細(xì)胞是調(diào)節(jié)性CD4+T細(xì)胞亞群，在維持機(jī)體自身耐受和調(diào)控免疫應(yīng)答水平中起重要作用[4]。研究顯示，CD4+CD25+Treg細(xì)胞通過(guò)抑制抗腫瘤免疫應(yīng)答廣泛參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展，如CD4+CD25+Treg細(xì)胞表達(dá)多種抑制性受體如CTLA-4和LAG-3等分子直接抑制腫瘤特異性T細(xì)胞的活化和效應(yīng)功能。另外，CD4+CD25+Treg細(xì)胞可產(chǎn)生多種抑制性細(xì)胞因子如IL-10和TGF-β等間接抑制抗腫瘤免疫應(yīng)答，促進(jìn)腫瘤的進(jìn)展。抑制CD4+CD25+Treg細(xì)胞活化及功能或清除CD4+CD25+Treg細(xì)胞則促進(jìn)抗腫瘤免疫應(yīng)答，抑制多種腫瘤的進(jìn)展[5]。這些研究提示CD4+CD25+Treg細(xì)胞通過(guò)促進(jìn)腫瘤免疫逃逸加速腫瘤的發(fā)生發(fā)展[6]。然而，也有些研究顯示，腫瘤組織中CD4+CD25+Treg細(xì)胞可再編程分化成效應(yīng)性T細(xì)胞，增強(qiáng)抗腫瘤免疫應(yīng)答，抑制腫瘤的進(jìn)展[7,8]，所以，CD4+CD25+Treg細(xì)胞在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用尚不明確[7]。

本研究利用Lewis肺癌的皮下移植腫瘤模型，采用流式細(xì)胞儀技術(shù)、過(guò)繼免疫細(xì)胞回輸和HE組織化學(xué)染色等技術(shù)探討了CD4+CD25+Treg細(xì)胞在腫瘤生長(zhǎng)與遠(yuǎn)處組織轉(zhuǎn)移的作用。研究結(jié)果顯示，荷瘤鼠脾臟CD4+CD25+Treg細(xì)胞的百分率和細(xì)胞數(shù)量明顯增加；過(guò)繼回輸CD4+CD25+Treg細(xì)胞顯著促進(jìn)原位腫瘤的生長(zhǎng)以及肺部轉(zhuǎn)移。體外研究顯示，CD4+CD25+Treg細(xì)胞以非直接作用于LLC腫瘤細(xì)胞方式促進(jìn)其遷移。這些結(jié)果說(shuō)明CD4+CD25+Treg細(xì)胞可通過(guò)以非直接作用于LLC腫瘤細(xì)胞方式在肺癌發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要的促進(jìn)作用。上述結(jié)果為肺癌的發(fā)病機(jī)制以及免疫防治提供新策略。

1 材料與方法

1.1材料與試劑

1.1.1細(xì)胞株及動(dòng)物 Lewis肺癌細(xì)胞(Lewis lung carcinoma,LLC)購(gòu)自中科院上海細(xì)胞庫(kù)，LLC在含有10%小牛血清的高糖DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液中常規(guī)傳代培養(yǎng)。7～8周齡雌性C57BL/6鼠購(gòu)自北京維通利華公司，飼養(yǎng)于本校動(dòng)物部SPF級(jí)動(dòng)物室，進(jìn)食水自由。

1.1.2試劑 小鼠CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞磁珠分選試劑盒以及分選緩沖液購(gòu)于美天旎生物技術(shù)有限公司(德國(guó))；實(shí)驗(yàn)用抗體，包括Percp-anti-mouse-CD4和 APC-anti-mouse-Foxp3購(gòu)自Biolegend公司(美國(guó))；固定透膜液和透膜洗液均購(gòu)自ebioscience公司(美國(guó))；高糖DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液與小牛血清均購(gòu)自Gibco公司(美國(guó))。

1.2方法

1.2.1動(dòng)物模型建立 皮下移植腫瘤鼠模型的建立：收集對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期LLC細(xì)胞，生理鹽水重懸制成細(xì)胞懸液，調(diào)整最終濃度為1×107個(gè)/ml。經(jīng)小鼠右側(cè)肩胛部皮下接種LLC細(xì)胞，每只C57BL/6鼠接種腫瘤細(xì)胞數(shù)為1×106個(gè)/0.1 ml。

皮下接種腫瘤細(xì)胞后觀(guān)察腫瘤生長(zhǎng)情況。至第 7 天左右荷瘤鼠皮下接種部位可觸及腫塊。待腫瘤體積可測(cè)量后，隔天用游標(biāo)卡尺測(cè)量腫瘤的長(zhǎng)徑a，短徑b并根據(jù)公式(腫瘤體積=1/2×a×b2)計(jì)算腫瘤體積。

1.2.2流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞 常規(guī)方法制備鼠脾臟單細(xì)胞懸液，用含2%胎牛血清的PBS調(diào)整細(xì)胞終濃度為1×107個(gè)/ml，每個(gè)流式管取0.1 ml細(xì)胞懸液。

為檢測(cè)CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞，各流式管內(nèi)加入單克隆抗體(Percp-anti-mouse-CD4)進(jìn)行細(xì)胞表面染色，4℃避光孵育40 min，經(jīng)緩沖液洗滌細(xì)胞后進(jìn)行細(xì)胞破膜處理和細(xì)胞內(nèi)Foxp3染色。各試驗(yàn)管內(nèi)加入Foxp3固定透膜劑，4℃孵育60 min。透膜洗液洗滌后加入APC-anti-mouse-Foxp3 mAb進(jìn)行胞內(nèi)染色。4℃孵育45 min，透膜洗液洗滌后加緩沖液上機(jī)檢測(cè)，每個(gè)樣本至少采集1×105個(gè)細(xì)胞。設(shè)置相應(yīng)的同型對(duì)照管和單標(biāo)管，同型對(duì)照管加等量相對(duì)應(yīng)同型對(duì)照抗體，單標(biāo)管加單一的熒光抗體。流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞的百分比及數(shù)量。

1.2.3磁珠分選純化CD4+CD25+Treg細(xì)胞 無(wú)菌制備荷瘤鼠脾單細(xì)胞懸液，經(jīng)紅細(xì)胞裂解、細(xì)胞濾網(wǎng)過(guò)濾及CD16/32單抗封閉細(xì)胞表面Fc段受體后，使用CD4+CD25+Regulatory T cell Isolation Kit進(jìn)行細(xì)胞分選。細(xì)胞分選方法按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。簡(jiǎn)言之，首先利用L型磁珠分選柱陰性選擇方法去除脾單細(xì)胞懸液中非CD4+T細(xì)胞，再利用M型磁珠分選柱陽(yáng)性選擇CD25+T細(xì)胞，最后收集得到的細(xì)胞為CD4+CD25+Treg細(xì)胞，臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)。

1.2.4過(guò)繼回輸CD4+CD25+Treg細(xì)胞 取磁珠分選的CD4+CD25+Treg細(xì)胞，調(diào)整最終濃度為5×105個(gè)/ml。在實(shí)驗(yàn)鼠接種LLC細(xì)胞當(dāng)日，經(jīng)尾靜脈過(guò)繼回輸上述細(xì)胞，每只鼠回輸5×104個(gè)細(xì)胞，以尾靜脈注射PBS為對(duì)照。

1.2.5建立CD4+CD25+Treg細(xì)胞和LLC細(xì)胞共培養(yǎng)體系及劃痕試驗(yàn) 取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期LLC細(xì)胞，調(diào)整最終濃度為1×106個(gè)/孔，接種到6孔板，細(xì)胞貼壁后，使用200 μl吸頭在培養(yǎng)板底部豎直劃線(xiàn)，PBS洗滌多余的細(xì)胞，加入1%FBS的1640培養(yǎng)基，然后加入1×106個(gè)磁珠分選的CD4+CD25+Treg細(xì)胞，以加入PBS為對(duì)照，37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)，24 h后倒置顯微鏡觀(guān)察并拍照。

1.2.6HE組織染色檢測(cè)肺部轉(zhuǎn)移性腫瘤結(jié)節(jié) 在建立小鼠轉(zhuǎn)移瘤模型的當(dāng)日同時(shí)過(guò)繼回輸CD4+CD25+Treg細(xì)胞，在第28天處死小鼠后，取出肺臟，多聚甲醛固定24 h，脫水入蠟，包埋后切片HE染色，拍照。

2 結(jié)果

2.1荷瘤小鼠脾臟CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞數(shù)量增多 皮下接種LLC細(xì)胞，至腫瘤生長(zhǎng)至第7天，處理荷瘤鼠。應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)荷瘤鼠脾臟中CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞的百分比和數(shù)量。正常對(duì)照鼠脾臟中CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞約占總淋巴細(xì)胞數(shù)的1.46%，荷瘤鼠脾臟中CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞約占總淋巴細(xì)胞數(shù)的3.28%。并且，與對(duì)照正常組小鼠相比，荷瘤鼠脾臟中CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞的絕對(duì)數(shù)量顯著增加[(1.0±0.2)×106vs (2.8±0.75)×106，P<0.05]。這些結(jié)果提示CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞參與荷瘤鼠的腫瘤形成。 見(jiàn)圖1。

圖1 荷瘤鼠脾臟中CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞的百分比增加和數(shù)量增多Fig.1 Increased frequency and absolute number of CD4+CD25+Foxp3+Treg cells in total splenic lymphoyctes of LLC miceNote: **.P<0.01.

2.2過(guò)繼回輸CD4+CD25+Treg細(xì)胞促進(jìn)Lewis肺癌的進(jìn)展 為了確認(rèn)CD4+CD25+Treg細(xì)胞對(duì)Lewis肺癌發(fā)生發(fā)展的影響，我們?cè)趯?shí)驗(yàn)鼠皮下接種LLC細(xì)胞的當(dāng)日，過(guò)繼回輸CD4+CD25+Treg細(xì)胞，觀(guān)察腫瘤的生長(zhǎng)情況。如圖2顯示，PBS對(duì)照組荷瘤鼠和過(guò)繼回輸CD4+CD25+Treg細(xì)胞組荷瘤鼠的腫瘤形成時(shí)間沒(méi)有顯著性差異，兩組荷瘤鼠的腫瘤生長(zhǎng)均隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸增大。然而，腫瘤生長(zhǎng)至第21和23天，過(guò)繼回輸CD4+CD25+Treg細(xì)胞組荷瘤鼠的腫瘤體積顯著大于PBS對(duì)照組荷瘤鼠。這個(gè)結(jié)果提示CD4+CD25+Treg細(xì)胞促進(jìn)Lewis肺癌的生長(zhǎng)。

2.3過(guò)繼回輸CD4+CD25+Treg細(xì)胞縮短荷瘤小鼠存活時(shí)間 腫瘤形成后，腫瘤微環(huán)境中腫瘤細(xì)胞與免疫細(xì)胞相互作用，在免疫系統(tǒng)的選擇壓力下演化進(jìn)而決定腫瘤的結(jié)局。為了進(jìn)一步確定CD4+CD25+Treg細(xì)胞在Lewis肺癌演化中的作用，我們?cè)谶^(guò)繼回輸CD4+CD25+Treg細(xì)胞后指定時(shí)間記錄荷瘤鼠的生存情況。圖3顯示，與PBS對(duì)照組荷瘤鼠相比，過(guò)繼回輸CD4+CD25+Treg細(xì)胞組荷瘤鼠的生存期縮短，生存率顯著降低(P<0.05)。過(guò)繼回輸CD4+CD25+Treg細(xì)胞組荷瘤鼠在第21天的生存率為60%，至第26天荷瘤鼠的生存率僅為25%。這些結(jié)果提示CD4+CD25+Treg細(xì)胞在Lewis肺癌演化發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮促進(jìn)作用。

圖2 回輸CD4+CD25+Treg細(xì)胞促進(jìn)LLC的生長(zhǎng)Fig.2 Adoptive transfer of CD4+CD25+Treg cells promote LLC growth

圖3 過(guò)繼回輸CD4+CD25+Treg細(xì)胞縮短荷瘤鼠的存活時(shí)間Fig.3 Adoptive transfer of CD4+CD25+Treg cells decrease survival of LLC mice

2.4CD4+CD25+Treg細(xì)胞顯著促進(jìn)腫瘤的肺部侵襲與轉(zhuǎn)移 腫瘤原位癌的發(fā)生發(fā)展與腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。為了確認(rèn)CD4+CD25+Treg細(xì)胞對(duì)Lewis肺癌侵襲與轉(zhuǎn)移的影響，我們?cè)谶^(guò)繼回輸CD4+CD25+Treg細(xì)胞后第28天處理荷瘤鼠，利用HE組織染色技術(shù)觀(guān)察肺部腫瘤結(jié)節(jié)形成情況。PBS對(duì)照組荷瘤鼠肺部偶見(jiàn)或未見(jiàn)轉(zhuǎn)移性腫瘤結(jié)節(jié)。相反，過(guò)繼回輸CD4+CD25+Treg細(xì)胞組荷瘤鼠的肺部可見(jiàn)數(shù)個(gè)轉(zhuǎn)移性腫瘤結(jié)節(jié)。與PBS對(duì)照組荷瘤鼠相比，過(guò)繼回輸CD4+CD25+Treg細(xì)胞組荷瘤鼠的肺部轉(zhuǎn)移性腫瘤結(jié)節(jié)明顯增多[(1.8±0.8) vs (4.6±2.3)，P<0.05]，見(jiàn)圖4。

2.5CD4+CD25+Treg細(xì)胞非直接促進(jìn)LLC遷移 為了闡明CD4+CD25+Treg細(xì)胞促進(jìn)LLC轉(zhuǎn)移的相關(guān)機(jī)制，我們?cè)隗w外建立CD4+CD25+Treg細(xì)胞與LLC細(xì)胞共培養(yǎng)體系，通過(guò)劃痕實(shí)驗(yàn)判斷LLC細(xì)胞的遷移情況。結(jié)果顯示：與PBS對(duì)照組相比，LLC細(xì)胞與CD4+CD25+Treg細(xì)胞共培養(yǎng)24 h后LLC細(xì)胞的遷移距離無(wú)顯著差異。這個(gè)結(jié)果提示CD4+CD25+Treg細(xì)胞非直接促進(jìn)LLC細(xì)胞遷移。見(jiàn)圖5。

圖4 過(guò)繼回輸CD4+CD25+Treg細(xì)胞促進(jìn)荷瘤鼠的肺部轉(zhuǎn)移Fig.4 Adoptive transfer of CD4+CD25+Treg cells enhance lung metastasis of LLC mice

圖5 CD4+CD25+Treg細(xì)胞不直接改變LLC細(xì)胞的遷移Fig.5 CD4+CD25+ Treg cells unalter migration of LLC directly

3 討論

腫瘤的發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多步驟的序貫復(fù)雜過(guò)程，涉及原發(fā)組織腫瘤微環(huán)境的形成、腫瘤演化以及遠(yuǎn)隔組織的侵襲與轉(zhuǎn)移并形成腫瘤轉(zhuǎn)移小璽(Metastatic niche)。腫瘤細(xì)胞以及多種基質(zhì)細(xì)胞和免疫細(xì)胞，特別是抑制性免疫細(xì)胞參與該過(guò)程[9]。

大量研究顯示，CD4+CD25+Treg細(xì)胞抑制抗腫瘤免疫應(yīng)答，促進(jìn)免疫逃逸進(jìn)而促進(jìn)多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展，包括肺癌、乳腺癌、黑色素瘤等[10]。然而，也有研究發(fā)現(xiàn)，CD4+CD25+Treg細(xì)胞可在炎性微環(huán)境中具有表型和功能的可塑性，如CD4+CD25+Treg細(xì)胞可丟失其轉(zhuǎn)錄因子Foxp3及相關(guān)的抑制分子表達(dá)，進(jìn)而細(xì)胞再編程分化為促炎效應(yīng)細(xì)胞[8]。Sharma等[7]的研究表明，小鼠經(jīng)含有抗原、IFA和CpG的疫苗免疫后，體內(nèi)CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞可被去分化為T(mén)h1樣效應(yīng)細(xì)胞，并表達(dá)CD40L分子促進(jìn)抗原提呈細(xì)胞經(jīng)抗原交叉呈遞途徑活化CD8 T細(xì)胞[7]。因此，闡明CD4+CD25+Foxp3+Treg細(xì)胞在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用具有重要意義。本研究利用Lewis肺癌的皮下移植瘤模型觀(guān)察了CD4+CD25+Treg細(xì)胞在肺癌發(fā)生發(fā)展中的作用，結(jié)果顯示CD4+CD25+Treg細(xì)胞以非直接作用于LLC細(xì)胞方式促進(jìn)Lewis肺癌的生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)移。

大量研究顯示，CD4+CD25+Treg細(xì)胞具有免疫抑制作用，參與多種腫瘤的形成及進(jìn)展，本研究結(jié)果顯示Lewis荷瘤鼠脾臟中CD4+CD25+Treg細(xì)胞的百分比和數(shù)量顯著增多。另外，我們的研究結(jié)果也顯示腫瘤組織含有一定數(shù)量的CD4+CD25+Treg細(xì)胞(結(jié)果未發(fā)表)。這些結(jié)果提示CD4+CD25+Treg細(xì)胞參與Lewis肺癌的發(fā)生發(fā)展。

在免疫系統(tǒng)的選擇性壓力下腫瘤細(xì)胞發(fā)生演化進(jìn)而決定腫瘤的進(jìn)展和結(jié)局[11]。 我們的研究結(jié)果顯示，回輸CD4+CD25+Treg細(xì)胞雖然沒(méi)有加速腫瘤的形成時(shí)間，卻顯著促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)并縮短荷瘤鼠的生存時(shí)間，降低荷瘤鼠的存活率。這些結(jié)果說(shuō)明CD4+CD25+Treg細(xì)胞可加速Lewis肺癌的進(jìn)展。

腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致腫瘤患者死亡的主要原因。腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移是一個(gè)復(fù)雜的連續(xù)過(guò)程，涉及原發(fā)腫瘤組織中重塑腫瘤微環(huán)境如血管新生、降解基質(zhì)使腫瘤細(xì)胞脫離原發(fā)病灶；腫瘤細(xì)胞穿越局部毛細(xì)血管或淋巴管壁進(jìn)入血液或淋巴循環(huán)；隨著血液或淋巴液運(yùn)輸至靶器官毛細(xì)血管床，與該部位血管或淋巴管內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生黏附，穿越管壁和基底膜進(jìn)入周?chē)g質(zhì)；在繼發(fā)組織部位存活并形成腫瘤轉(zhuǎn)移小璽[12]。研究顯示，免疫系統(tǒng)與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。特別是，CD4+CD25+Treg細(xì)胞在腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用[13]。本研究結(jié)果顯示，荷瘤鼠進(jìn)展至4周后可在肺組織形成轉(zhuǎn)移性腫瘤結(jié)節(jié)，這個(gè)結(jié)果提示，腫瘤原發(fā)部位的LLC細(xì)胞可脫離原發(fā)腫瘤組織經(jīng)血液循環(huán)穿過(guò)肺組織局部毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞進(jìn)入肺組織；進(jìn)入肺組織的LLC細(xì)胞存活并形成腫瘤轉(zhuǎn)移小璽，最終發(fā)展成肺部組織的轉(zhuǎn)移性腫瘤結(jié)節(jié)?；剌擟D4+CD25+Treg細(xì)胞后荷瘤鼠肺組織轉(zhuǎn)移性腫瘤結(jié)節(jié)明顯增多，說(shuō)明CD4+CD25+Treg細(xì)胞可促進(jìn)原發(fā)腫瘤組織中腫瘤細(xì)胞向遠(yuǎn)隔組織侵襲與轉(zhuǎn)移。

CD4+CD25+Treg細(xì)胞促進(jìn)腫瘤侵襲與轉(zhuǎn)移的機(jī)制仍然不清[14]。我們的研究顯示CD4+CD25+Treg細(xì)胞并非直接作用于LLC細(xì)胞促進(jìn)其遷移，提示其可通過(guò)間接方式促進(jìn)LLC細(xì)胞的發(fā)生發(fā)展，如CD4+CD25+Treg細(xì)胞可作用于其他免疫細(xì)胞或非血源性基質(zhì)細(xì)胞促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移。的確，我們的前期研究顯示，CD4+CD25+Treg細(xì)胞可促進(jìn)腫瘤相關(guān)巨噬細(xì)胞向M2型細(xì)胞極化，極化的M2型細(xì)胞可產(chǎn)生多種介質(zhì)，包括MMP-9、VEGF、IL-10、Arg-1參與腫瘤的侵襲于轉(zhuǎn)移(數(shù)據(jù)未發(fā)表)。因此，我們推測(cè)CD4+CD25+Treg細(xì)胞可通過(guò)動(dòng)員巨噬細(xì)胞的M2極化，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲與轉(zhuǎn)移。另外，我們的研究也提示CD4+CD25+Treg細(xì)胞可通過(guò)產(chǎn)生腺苷促進(jìn)腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移，阻斷腺苷-腺苷受體信號(hào)通路顯著抑制腫瘤的進(jìn)展，延長(zhǎng)荷瘤小鼠的存活時(shí)間(數(shù)據(jù)未發(fā)表)。上述研究結(jié)果說(shuō)明CD4+CD25+Treg細(xì)胞可通過(guò)多種機(jī)制加速腫瘤進(jìn)展。本研究結(jié)果與李欣等的研究結(jié)果類(lèi)似[15]。也有研究顯示，CD81分子在CD4+CD25+Treg細(xì)胞促進(jìn)腫瘤侵襲與轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮關(guān)鍵作用。敲除CD81分子后Treg細(xì)胞的發(fā)育和分化受阻，限制腫瘤的侵襲與轉(zhuǎn)移[16]。

總之，本實(shí)驗(yàn)利用Lewis肺癌的皮下移植腫瘤模型發(fā)現(xiàn)CD4+CD25+Treg細(xì)胞不但促進(jìn)原位腫瘤組織的生長(zhǎng)和演化，而且促進(jìn)腫瘤細(xì)胞向遠(yuǎn)隔組織部位侵襲與轉(zhuǎn)移。因此，我們推測(cè)CD4+CD25+Treg細(xì)胞在肺癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要的促進(jìn)作用，靶向CD4+CD25+Treg細(xì)胞的免疫治療將有效延緩肺癌的進(jìn)展。