陶佩琳 馬新永 高政平

（1徐州生物工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院，江蘇 徐州 221000；2徐州市銅山區(qū)大彭鎮(zhèn)農(nóng)機(jī)服務(wù)中心）

華南紫萁普遍采用分株和孢子繁殖進(jìn)行人工繁育，對(duì)環(huán)境條件要求高，且繁殖周期長(zhǎng)，受季節(jié)限制，不能滿(mǎn)足日益增長(zhǎng)的市場(chǎng)需求。李楊介紹并提出蕨類(lèi)組培存在的問(wèn)題[2]；葛佳等以扇蕨莖尖為外植體，通過(guò)綠球體（GGB）途徑獲得了再生植株[3]；王淼等研究了不同培養(yǎng)基和激素配比對(duì)東北蕨菜組培快繁的影響[4]。本研究旨在探索出適宜華南紫萁離體誘導(dǎo)的快繁方法，為促進(jìn)其高頻、穩(wěn)定、產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)提供參考依據(jù)，對(duì)緩解野生資源壓力，滿(mǎn)足市場(chǎng)需求，豐富生態(tài)內(nèi)涵具有重要意義。

1 外植體選擇及預(yù)處理

以徐州生物工程職業(yè)技術(shù)學(xué)院琴湖基地成功引種的健康華南紫萁種苗為試驗(yàn)材料，采集帶有幼孢子囊群，未完全展開(kāi)的葉片作外植體。用軟毛刷輕輕去除外植體表面污垢，流水沖洗30min后，轉(zhuǎn)入75%乙醇浸泡20s，0.1%氯化汞振蕩清洗4min，無(wú)菌水沖洗5～7次，得華南紫萁無(wú)菌幼葉孢子囊外植體。

2 GGB誘導(dǎo)培養(yǎng)

將外植體首尾切除，剪成2cm小段，按照極性方向接種到B5+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA培養(yǎng)基中，培養(yǎng)基添加30g/L蔗糖和7.5g/L瓊脂，每瓶1個(gè)外植體，共接種60瓶，置于光照度2000～3000Lx，14h/d，溫度23～27℃，濕度75%～85%的環(huán)境下培養(yǎng)。10d后觀察發(fā)現(xiàn)，培養(yǎng)基表面有許多散落下來(lái)的綠色小孢子，其漸漸膨大，從基部產(chǎn)生不規(guī)則的突起，形成綠色球狀體（GGB）。培養(yǎng)30d，GGB誘導(dǎo)率可達(dá)66.67%。

3 GGB的增殖與分化培養(yǎng)

將誘導(dǎo)出的GGB分割成直徑為3～5mm的綠球體小塊，重新接種到B5+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA培養(yǎng)基中繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)30d后發(fā)現(xiàn)，GGB增殖膨大明顯，平均直徑為2.15cm，增殖率達(dá)79.8%，但是未見(jiàn)有不定芽分化現(xiàn)象產(chǎn)生。將增殖后的GGB接種至1/2MS+1.0mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+1.5g/L活性炭分化培養(yǎng)基中，培養(yǎng)過(guò)程中觀察到有不定芽的分化，60d產(chǎn)生的平均芽數(shù)可達(dá)35個(gè)，分化率達(dá)58.3%，且葉平展健壯，生長(zhǎng)速度較快。

4 壯苗生根培養(yǎng)

當(dāng)新生不定芽長(zhǎng)到約2cm，帶2～3片健康平展葉片時(shí)，切下單芽接種至生根培養(yǎng)基中進(jìn)行不定根誘導(dǎo)。生根培養(yǎng)基為1/2MS+0.1mg/L NAA+1.5g/L活性炭。30d更換1次培養(yǎng)基，60d后觀察有數(shù)條不定根產(chǎn)生，生長(zhǎng)狀況良好，生根率達(dá)100%，平均根數(shù)達(dá)3.5條。若將NAA濃度繼續(xù)提高，不定芽基部有愈傷化趨勢(shì)，生根的小苗長(zhǎng)勢(shì)緩慢、葉片發(fā)黃、狀態(tài)不佳。

5 煉苗移栽

將高3～4cm，具3～4根健康根系的組培苗置于溫度為20～25℃、光強(qiáng)2000Lx，12h/d的條件下進(jìn)行馴化煉苗。之后小心取出，去除根部培養(yǎng)基，用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.125%多菌靈溶液清洗根部，種植于泥炭∶火山巖配比為3∶1的基質(zhì)中，用薄膜和透光率30%的遮陽(yáng)網(wǎng)覆蓋，30d后統(tǒng)計(jì)成活率達(dá)91.8%，小苗生長(zhǎng)健壯。

我國(guó)蕨類(lèi)植物資源豐富，種類(lèi)繁多，約有2600多種，占全世界的1/5以上。多數(shù)蕨類(lèi)因其高雅飄逸的體態(tài)、碧綠青翠的葉色、精美的羽片圖案、精致的脈序以及別致的孢子囊群排列[5]，已成為現(xiàn)代園林綠化行業(yè)的一個(gè)重要組成部分。本研究提出了一種以幼孢子囊群誘導(dǎo)，GGB途徑的華南紫萁組培繁殖方法，初步建立了其離體再生體系，有效解決了現(xiàn)有繁殖方法的弊端，為優(yōu)質(zhì)華南紫萁商品種苗生產(chǎn)提供了方法和途徑。