(成都市新都區(qū)中醫(yī)醫(yī)院骨傷一科 四川 成都 610500)

臨床上對(duì)于患者的病情評(píng)估，能夠在強(qiáng)直性脊柱炎的診療及預(yù)后隨訪方面發(fā)揮作用。血清學(xué)指標(biāo)的分析，能夠在強(qiáng)直性脊柱炎的診療過(guò)程中發(fā)揮重要的輔助參考價(jià)值[1]。單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)中誘導(dǎo)蛋白10(IP-10)的表達(dá)上升，能夠通過(guò)誘導(dǎo)趨化因子及補(bǔ)體成分的激活，增加其對(duì)于骶髂關(guān)節(jié)的浸潤(rùn)程度，進(jìn)而促進(jìn)早期疾病的發(fā)生[2]；干擾素-γ(IFN-γ)的表達(dá)上升，能夠通過(guò)誘導(dǎo)自身T淋巴細(xì)胞的功能紊亂，加劇自然殺傷性T淋巴細(xì)胞的激活，進(jìn)而促進(jìn)骶髂關(guān)節(jié)的免疫性損傷[3]；白細(xì)胞介素-4(IL-4)作為炎癥性相關(guān)因子，其能夠通過(guò)提高下游巨噬細(xì)胞或者單核細(xì)胞的上調(diào)程度，進(jìn)而參與到強(qiáng)制性脊柱炎的病情進(jìn)展過(guò)程[4]。為了揭示IP-10、IFN-和IL-4 mRNA的表達(dá)與強(qiáng)制性脊柱炎患者的病情關(guān)系，從而為臨床上相關(guān)患者的診療提供參考，本次研究選取2016年1月至2018年4月在我院治療的強(qiáng)直性脊柱炎患者92例，探討了IP-10、IFN-和IL-4 mRNA的表達(dá)及其與患者的病情關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2016年1月至2018年4月在我院治療的強(qiáng)直性脊柱炎患者92例(觀察組)，根據(jù)活動(dòng)度情況，穩(wěn)定期42例，活動(dòng)期50例；納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)年齡18～65歲；(2)診斷符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)制定的標(biāo)準(zhǔn)[5]；(2)近1個(gè)月內(nèi)未使用過(guò)糖皮質(zhì)激素；(3)病程超過(guò)3個(gè)月；(4)患者及家屬知情同意。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并有惡性腫瘤、其他風(fēng)濕性疾病、肝腎功能障礙、血液系統(tǒng)疾病、甲狀腺疾病等基礎(chǔ)疾病；(2)有精神疾病者。同時(shí)選取健康體檢者100例作為對(duì)照組，觀察組和對(duì)照組受試者性別、年齡等一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)表1。

表1 兩組一般資料比較

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

采用常規(guī)方法進(jìn)行外周淋巴細(xì)胞的分離，每10 mL采集血清標(biāo)本中加入1mlTRIZOL，在無(wú)酶的條件下進(jìn)行RNA的提取和收集，加入焦炭酸二乙酯進(jìn)行RNA濃度的測(cè)量和定量，并逆轉(zhuǎn)錄成cRNA后進(jìn)行基因擴(kuò)增，采用primer 5軟件進(jìn)行相關(guān)基因內(nèi)參或者目的基因的設(shè)計(jì)及合成，IP-10引物5′tttggctctgaccattctgt 3′:下游5′gtcctcacctgagggacccc3′，IFN-γ上游:5′-TCCACCAAGAAGCTGAGCGAG-3′, 下游:5′-GTCCAGCCCATGATGGTTCT-3′,IL-4上游:5′-TGAACCGGCATCTGCACAC-3′;下游:5′-CGTCTTCAGAGACAGCCAGGAG-3′，經(jīng)歷45個(gè)循環(huán)后進(jìn)行曲線溶解，每個(gè)孔設(shè)置3個(gè)復(fù)孔，取平均值。

1.3 強(qiáng)直性脊柱炎疾病活動(dòng)度評(píng)分(ASDAS)

ASDAS是2009年國(guó)際脊柱關(guān)節(jié)炎協(xié)會(huì)制定的一項(xiàng)新的評(píng)價(jià)強(qiáng)直性脊柱炎病情活動(dòng)度的指標(biāo)，對(duì)腰背痛、晨僵持續(xù)時(shí)間、患者總體評(píng)價(jià)、外周關(guān)節(jié)疼痛、C反應(yīng)蛋白進(jìn)行評(píng)分計(jì)算，ASDAS<2.1為穩(wěn)定期，≥2.1為活動(dòng)期。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 組間PBMC中IP-10、IFN-γ和IL-4 mRNA表達(dá)水平

觀察組PBMC中IP-10、IFN-γ和IL-4 mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯高于對(duì)照組，差異比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 兩組PBMC中IP-10、IFN-γ和IL-4 mRNA相對(duì)表達(dá)量

2.2 觀察組不同分期患者PBMC中IP-10、IFN-γ和IL-4 mRNA表達(dá)水平

觀察組活動(dòng)期患者PBMC中IP-10、IFN-γ和IL-4 mRNA相對(duì)表達(dá)量明顯高于穩(wěn)定期，差異比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表3 觀察組不同分期患者PBMC中IP-10、IFN-γ和IL-4 mRNA表達(dá)水平

2.3 相關(guān)性分析

觀察組患者ASDAS評(píng)分為(2.32±1.01)；患者IP-10、IFN-γ和IL-4 mRNA相對(duì)表達(dá)量與ASDAS評(píng)分呈正相關(guān)(r=0.392、0.303和0.309，P<0.05)，見(jiàn)圖1。

圖1 相關(guān)分析圖

3 討 論

部分地區(qū)的報(bào)道研究發(fā)現(xiàn)，強(qiáng)直性脊柱炎的發(fā)病率可超過(guò)485/1萬(wàn)人左右[6]，在合并有家族遺傳傾向的人群中，強(qiáng)直性脊柱炎的發(fā)病率可進(jìn)一步的上升[7]。臨床隨訪觀察研究發(fā)現(xiàn)，強(qiáng)直性脊柱炎患者遠(yuǎn)期致殘率及多器官功能衰竭的風(fēng)險(xiǎn)可超過(guò)5%以上，同時(shí)隨訪時(shí)間越長(zhǎng)，強(qiáng)直性脊柱炎患者關(guān)節(jié)功能喪失的風(fēng)險(xiǎn)越高[8-9]。現(xiàn)階段主要通過(guò)關(guān)節(jié)CT從而評(píng)估強(qiáng)直性脊柱炎患者的病情，雖然影像學(xué)檢查能夠評(píng)估關(guān)節(jié)浸潤(rùn)的范圍及程度，但多項(xiàng)單中心的臨床分析發(fā)現(xiàn)，單純依靠CT檢查評(píng)估強(qiáng)直性脊柱炎病情的靈敏度不超過(guò)45%，其評(píng)估患者病情的一致性率較低[10]。而本次研究通過(guò)對(duì)于強(qiáng)直性脊柱炎患者血清中IP-10、IFN-γ和IL-4 mRNA的表達(dá)分析研究，不僅能夠揭示強(qiáng)制性脊柱炎患者的病情進(jìn)展內(nèi)在機(jī)理，同時(shí)能夠?yàn)榕R床上強(qiáng)制性脊柱炎患者的病情評(píng)估提供血清量化的參考。

IP-10是誘導(dǎo)家族成員，其能夠通過(guò)誘導(dǎo)粘附分子及補(bǔ)體成分C3的激活，進(jìn)而誘導(dǎo)其對(duì)于關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞及間質(zhì)成分的浸潤(rùn)。基礎(chǔ)方面的研究認(rèn)為，IP-10能夠通過(guò)提高自身免疫性復(fù)合物的沉積，進(jìn)而提高局部關(guān)節(jié)間質(zhì)成分中成纖維細(xì)胞的降解，導(dǎo)致骶髂關(guān)節(jié)支持結(jié)構(gòu)的破壞；IFN-γ不僅能夠參與到局部炎癥反應(yīng)的擴(kuò)散過(guò)程，同時(shí)還能夠影響到巨噬細(xì)胞或者自然殺傷性T淋巴細(xì)胞的激活，最終促進(jìn)關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)的破壞；IL-4 是參與調(diào)節(jié)th1/th2T淋巴細(xì)胞平衡的重要指標(biāo)，IL-4的上升能夠提高下游MAPK或者NF-KB的激活程度，影響到膠原纖維的分解速度[11]。部分研究者已經(jīng)探討了IFN-γ的表達(dá)與強(qiáng)制性脊柱炎的病情關(guān)系，認(rèn)為在相關(guān)患者中，IFN-γ的表達(dá)濃度明顯上升[12]，但缺乏對(duì)于IP-10、IFN-γ和IL-4 的表達(dá)與疾病分期或者強(qiáng)直性脊柱炎疾病活動(dòng)度評(píng)分(ASDAS)的關(guān)系分析。

本次研究發(fā)現(xiàn)，在強(qiáng)制性脊柱炎外周血淋巴細(xì)胞中，IP-10、IFN-γ和IL-4 mRNA明顯高于正常對(duì)照組人群，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異較為顯著，提示了IP-10、IFN-γ和IL-4 mRNA的高表達(dá)均能夠影響到強(qiáng)制性脊柱炎的病情進(jìn)展過(guò)程。分析其內(nèi)在的原因，考慮由于IP-10、IFN-γ和IL-4 mRNA的下列幾個(gè)方面的病理性影響有關(guān)[13-14]：(1)IP-10 mRNA的表達(dá)上升，能夠誘導(dǎo)中立性細(xì)胞酶的釋放，加劇破骨細(xì)胞的激活，促進(jìn)脊柱關(guān)節(jié)或者骶髂關(guān)節(jié)的骨細(xì)胞膜完整性的破壞；(2)IFN-γ和IL-4 mRNA的表達(dá)上升，能夠提高下游炎癥性信號(hào)通路的激活，加劇腫瘤壞死因子a的釋放速度，進(jìn)而促進(jìn)關(guān)節(jié)的炎癥性破壞過(guò)程。王作龍等[15]研究者也發(fā)現(xiàn)，在強(qiáng)制性脊柱炎患者中，IFN-γ的表達(dá)可平均上升40%以上，在具有明顯的關(guān)節(jié)功能上升或者內(nèi)在臟器功能衰竭的患者中，IFN-γ的表達(dá)上升更為顯著。在活動(dòng)期強(qiáng)制性脊柱炎患者中，IP-10、IFN-γ和IL-4 mRNA均明顯的上升，高于穩(wěn)定期患者，統(tǒng)計(jì)學(xué)差異較為明顯，提示了IP-10、IFN-γ和IL-4 mRNA的表達(dá)與患者病情的活躍狀態(tài)密切相關(guān)，這主要由于相關(guān)指標(biāo)的上升，能夠加劇炎癥性細(xì)胞向關(guān)節(jié)或者肌腱輔助點(diǎn)浸潤(rùn)，促進(jìn)了白細(xì)胞的募集及滲出，最終促進(jìn)了關(guān)節(jié)炎病情的活躍。同時(shí)在活動(dòng)期患者血清中，IP-10、IFN-γ和IL-4 mRNA表達(dá)水平的上升，還由于活動(dòng)期患者，其體內(nèi)存在更為明顯的炎癥性信號(hào)通路的激活及炎癥細(xì)胞的激活有關(guān)。ASDAS評(píng)分能夠通過(guò)綜合實(shí)驗(yàn)室檢查、臨床癥狀及體格檢查，進(jìn)而評(píng)估患者的綜合性病情，可以發(fā)現(xiàn)在強(qiáng)制性脊柱炎患者中，ASDAS評(píng)分與IP-10、IFN-γ和IL-4 mRNA具有密切的相關(guān)關(guān)系，進(jìn)一步表明相關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)與患者的病情密切相關(guān)。這主要由于IP-10、IFN-和IL-4 mRNA的表達(dá)，能夠通過(guò)影響到滑膜病理生理的改變，最終促進(jìn)關(guān)節(jié)疼痛及關(guān)節(jié)功能的障礙，延長(zhǎng)晨僵時(shí)間，導(dǎo)致ASDAS評(píng)分的上升。臨床上可以通過(guò)檢測(cè)IP-10、IFN-和IL-4 mRNA，進(jìn)而評(píng)估強(qiáng)制性脊柱炎患者的病情狀態(tài)。

綜上所述，在強(qiáng)制性脊柱炎患者中，IP-10、IFN-γ和IL-4 mRNA的表達(dá)明顯上升，同時(shí)IP-10、IFN-γ和IL-4 mRNA的表達(dá)與患者的病情狀態(tài)或者病情活動(dòng)度密切相關(guān)。跟進(jìn)的研究希望可以探討IP-10、IFN-γ和IL-4 mRNA與強(qiáng)制性脊柱炎治療結(jié)局的關(guān)系。