吳允鳳，劉玉蘭，劉 展，孫艷艷

（首都醫(yī)科大學(xué)附屬教學(xué)醫(yī)院北京市石景山醫(yī)院檢驗科，北京100041）

POCT（point of care test），又稱即時檢驗，是檢驗醫(yī)學(xué)發(fā)展的新領(lǐng)域，它的快速發(fā)展得益于當(dāng)今高新技術(shù)的發(fā)展和綜合應(yīng)用，也順應(yīng)了目前高效、快節(jié)奏的工作方式，滿足了醫(yī)師和患者在時間上的需求，可使患者盡早得到診斷和治療［1］。CK-MB是目前臨床應(yīng)用較多的POCT項目之一，尤其在急診科和重癥病房的應(yīng)用非常有意義［2］。我院新進基蛋生物Getein1600熒光免疫定量分析儀一臺，我們實驗室參考EP9-A2、EP15-A、EP6-A對正確度、精密度、線性范圍進行性能驗證。

材料和方法

1 儀器與試劑

待驗證儀器為基蛋生物Getein1600熒光免疫定量分析儀，及其配套CK-MB試劑。參比儀器為雅培I2000全自動免疫分析儀及其配套試劑。雅培ARCHITECT i2000化學(xué)發(fā)光分析儀性能良好，可以為臨床提供準(zhǔn)確、可靠的實驗數(shù)據(jù)，被廣大臨床醫(yī)生所認(rèn)可。

2 驗證方法

2.1 正確度試驗 參考EP9-A2用患者樣本進行比對，每天選擇8個臨床患者樣本（樣本在具有臨床意義范圍即線性范圍內(nèi)均勻分布）進行測定。本實驗共化5 d時間，對40個不同的臨床患者樣本，用本科已有的雅培I2000作為參比儀器和Getein 1600全自動免疫層析分析儀分別進行檢測和數(shù)據(jù)處理。

2.2 精密度驗證 依據(jù)EP15-A及樣品濃度參考值范圍，選擇本院3個標(biāo)本，并對上述3個濃度的樣品每天分析1次，每個濃度重復(fù)檢測3次，連續(xù)檢測5 d，記錄結(jié)果。

2.2 線性驗證 依據(jù)EP6-A將高濃度和低濃度血清質(zhì)控品按比例4H＋0L、3H＋1L、2H＋2L、1H＋3L和0H＋4L配制成5個濃度的測試樣品，在2 h內(nèi)對每個濃度樣品檢測4次，計算平均值，并與理論值進行回歸分析。

3 統(tǒng)計學(xué)處理

利用SPSS17.0軟件、MedCalc 11.4.2.0對所有數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理。

結(jié) 果

1 正確度驗證

以雅培I2000檢測結(jié)果作為X軸，以Getein 1600全自動免疫層析分析儀檢測結(jié)果作為Y軸，結(jié)果分析如圖1所示，兩組數(shù)據(jù)線性回歸曲線為Y＝0.9112X＋0.6655，r＝0.9936＞0.975；根據(jù)圖2所示，Bland-Altman分析結(jié)果顯示，在一致性界限的上限為1.20，下限為0.85，僅2.5%（1／40）的數(shù)據(jù)落在95%界限以外；也就是說基蛋生物Getein 1600 CKMB項目測值是雅培I2000測值的0.85～1.20倍；如表1所示，在醫(yī)學(xué)決定水平處預(yù)期相對偏倚為0.22ng／mL，預(yù)期相對偏倚為4.40%；從臨床上考慮，這種差異可以滿足本院的臨床需求，因此這兩種方法具有較好的一致性。

圖1 兩種方法測定CK-MB結(jié)果散點圖

圖2 兩種方法測定CK-MB結(jié)果Bland-Altman圖

表1 在醫(yī)學(xué)決定水平處預(yù)期相對偏倚

2 精密度驗證

如表2所示，低濃度水平樣本（4.58 ng／mL）所測得總不精密度為8.75%；中濃度水平樣本（10.47 ng／mL）所測得總不精密度為9.29%；高濃度水平樣本（14.99ng／mL）所測得總不精密度為6.45%。試劑盒說明書聲明CK-MB批內(nèi)不精密度≤10%，總不精密度≤15%。精密度驗證結(jié)果符合試劑盒說明書要求。

表2 不精密度檢測結(jié)果（CK-MB）

3 線性驗證

CK-MB項目線性范圍參考品理論值與測試平均值回歸系數(shù)R2＝0.9901，回歸方程為Y＝1.0405X＋0.8205，如圖3所示。說明書聲明的分析測量線性范圍是2.5～80 ng／mL，試驗數(shù)據(jù)表明，該檢測系統(tǒng)在3.06～72.51ng／mL濃度區(qū)間呈線性，該分析測量范圍通過驗證。

圖3 CK-MB檢測結(jié)果的線性范圍

討 論

隨著國民經(jīng)濟水平的提高，社會的進步，人們健康理念的轉(zhuǎn)變，國家醫(yī)療體制的改革，臨床醫(yī)療及急救醫(yī)學(xué)發(fā)展的需要，促進了POCT技術(shù)的發(fā)展。POCT是一類極具潛力的檢測技術(shù)，它快速簡便、效率高、成本低，有檢驗周期短、標(biāo)本用量少等優(yōu)點。同時，其試劑穩(wěn)定且便于保存和攜帶，已經(jīng)被廣泛用于臨床，甚至自我檢測［3］。急性心肌梗死（AMI）屬于急性冠狀動脈綜合征的類型之一，一旦確診，治療的時間越早，預(yù)后效果越佳，患者存活率越高［4］。心肌酶譜是用于診斷AMI的最早標(biāo)志物，連續(xù)的酶學(xué)檢查可方便了解梗死面積的大小及溶栓的治療效果。CK-MB升高快，清除快，相關(guān)文獻(xiàn)報道，CK-MB在未行PCI治療時峰值出現(xiàn)在12～24 h。所以快速準(zhǔn)確的用POCT檢測CK-MB，能為AMI的早期診斷提供簡便、快捷、準(zhǔn)確的檢測方法，為早期溶栓、急診PCI等有效心肌再灌注治療，改善冠狀動脈供血，提高患者生活質(zhì)量，降低死亡率，改善預(yù)后提供重要的前提條件［5-6］。

正確度、精密度、線性范圍是性能驗證中最為常用的指標(biāo)。我們參考了EP9-A2文件做正確度驗證，但未完全按照其做法。我們選取了40個樣本分5 d做完，且樣本濃度涵蓋線性范圍，但只是做了單次測定未進行重復(fù)測試。本實驗室雅培全自動熒光免疫分析儀檢測系統(tǒng)采用原裝配套試劑，同時操作人員經(jīng)過系統(tǒng)培訓(xùn)，整個系統(tǒng)一直參加全國衛(wèi)生部臨床檢驗中心的室間質(zhì)評活動，質(zhì)評結(jié)果均優(yōu)秀，是一可靠檢測系統(tǒng)，以此作為參照系統(tǒng)對基蛋生物Getein1600熒光免疫定量分析儀檢測系統(tǒng)作對比檢測。分析驗證方法的數(shù)據(jù)與參比試驗方法數(shù)據(jù)，二者在統(tǒng)計學(xué)意義上無差異，證明其正確度驗證良好?？偛痪芏仁峭暾貦?quán)衡了批內(nèi)、批間及天間種種誤差因素，較為真實地反映了分析儀總的精密度，并且為了更好地檢出不穩(wěn)定的誤差。已明確提出檢測系統(tǒng)的批內(nèi)不精密度應(yīng)為美國的臨床實驗室室間質(zhì)量評估CLIA’88允許誤差的1／4，天間標(biāo)準(zhǔn)差應(yīng)為該允許誤差的1／3，達(dá)到這樣要求的檢測系統(tǒng)，可認(rèn)為它的隨機誤差屬于可接受的水平［7］。本次檢測CLIA’88推薦CK-MB允許誤差為30%，CK-MB的1／4允許誤差為7.5%，CK-MB的1／3允許誤差為10%。實驗結(jié)果顯示采用基蛋生物Getein1600熒光免疫定量分析儀檢測CK-MB的低、中濃度水平樣品總不精密度結(jié)果均小于1／3 CLIA’88允許誤差，在可接受范圍內(nèi)。而廠家說明書聲稱的批內(nèi)和總精密度范圍分別為10%和15%，則均在可接受范圍內(nèi)。

目前臨床上所用檢測CK-MB的POCT儀器品牌多樣，蘇榮等［7］驗證過美國Biosite Biagnostics公司生產(chǎn)的Triage Metet熒光免疫干式快速定量診斷儀檢測CK-MB的正確性、精密度良好，符合實驗室要求。黃靜沁等［8］實驗得出CK-MB采用POCT法與電化學(xué)發(fā)光法有很強的相關(guān)性結(jié)果。目前POCT的管理缺乏統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，只對血糖項目做出了規(guī)范化標(biāo)準(zhǔn)的專家共識［9］。對其他POCT項目儀器的準(zhǔn)入和性能驗證，迫切需要有關(guān)部門做出統(tǒng)一的規(guī)范化標(biāo)準(zhǔn)，以供實驗室參考執(zhí)行。我們所驗證的基蛋生物的這款儀器是國產(chǎn)儀器，經(jīng)驗證其正確度良好、批內(nèi)精密度稍稍超過國際規(guī)定范圍，總精密度良好，線性范圍良好，均符合廠家說明書聲稱標(biāo)準(zhǔn)。