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        氟脲苷聯(lián)合化療治療晚期非小細(xì)胞肺癌對患者血清中miR-328、miR-499、HE4、CEA和POTEE水平的影響分析

        2019-08-12 10:25:14景孌戀
        標(biāo)記免疫分析與臨床 2019年7期
        關(guān)鍵詞:試劑盒肺癌化療

        謝 娟,景孌戀

        (湖北省漢川市人民醫(yī)院腫瘤科,湖北 漢川432300)

        肺癌是全球癌癥相關(guān)死亡的主要原因,非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)占所有肺癌病例的近85%[1]。臨床研究表明,氟脲苷對幾種實體瘤具有抗腫瘤作用,包括乳腺癌、結(jié)腸直腸癌、胃癌、非小細(xì)胞肺癌和胰腺癌[2]。QIU等[3]發(fā)現(xiàn)成熟miR-499序列中的rs3746444T/C多態(tài)性可能通過調(diào)節(jié)癌癥相關(guān)基因的表達(dá)而導(dǎo)致預(yù)后不良。ZHANG等[4]發(fā)現(xiàn)miR-328在肺癌患者血清中呈現(xiàn)高表達(dá)的狀態(tài)。耿紀(jì)群等[5]通過meta分析發(fā)現(xiàn)高血清HE4水平是肺癌患者預(yù)后不良的標(biāo)志,尤其是在亞洲肺癌患者中。CEA(serum carcinoembryonic antigen)在晚期非小細(xì)胞肺癌血清中表達(dá)異常[6]。WANG等[7]發(fā)現(xiàn)NSCLC患者血清POTEE水平與TNM分期有關(guān),是潛在的預(yù)后因素。基于此,本研究選取2017年2月至2018年2月我院收治的晚期非小細(xì)胞肺癌患者33例采用氟脲苷聯(lián)合化療治療,旨在探究氟脲苷聯(lián)合化療治療晚期非小細(xì)胞肺癌對患者血清中miR-328、miR-499、HE4、CEA和POTEE水平的影響。

        材料和方法

        1 一般資料

        選取2017年2月至2018年2月我院收治的晚期非小細(xì)胞肺癌患者66例為研究對象,其中,男性36例,女性30例;年齡27到69歲,平均年齡46.2±7.5歲。腫瘤TNM分期Ⅲ期患者25例,Ⅳ期患者41例。其中鱗癌34例,腺癌32例。所有患者均經(jīng)病理科和影像學(xué)診斷為晚期非小細(xì)胞肺癌。所有患者基本資料差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。本研究經(jīng)過本院倫理委員會批準(zhǔn),且所有患者均簽署知情同意書。

        排除標(biāo)準(zhǔn):①同時患有其他器官癌癥的患者。②對本研究所用藥物過敏的患者。③本研究前接受過藥物或手術(shù)治療的患者。④同時患有精神疾病的患者。

        2 分組

        將患者隨機(jī)分為對照組和治療組,每組各33例。對照組中男14例,女19例;年齡32~69歲,平均51.2±3.4歲;其中鱗癌13例,腺癌20例;治療組中男22例,女11例;年齡27~61歲,平均41.0±3.7歲;其中鱗癌21例,腺癌12例。兩組人員在年齡、家族史、性別、身高體重、組織學(xué)類別等差異無統(tǒng)計學(xué)意義,具有可比性。

        制度性章程一旦建立,政府只負(fù)責(zé)執(zhí)行合作章程、維持市場秩序等問題的處理,轉(zhuǎn)型為市場服務(wù),具體市場實務(wù)一般不需過問[8]?!包S金周”長假對旅游企業(yè)的沖擊僅是旅游業(yè)面臨的眾多不穩(wěn)定因素之一,為保障旅游企業(yè)在遇到?jīng)_擊時能有效運營,成本支出的增加得到控制,需要建立企業(yè)協(xié)調(diào)合作機(jī)制。旅游企業(yè)間、行業(yè)間的合作及協(xié)調(diào)此時變?yōu)橹黧w,提高企業(yè)競爭力、共享資源、降低交易費用、降低成本、聯(lián)合開發(fā)客源市場和旅游精品等是旅游企業(yè)間開展合作的目標(biāo)性動因。企業(yè)協(xié)調(diào)機(jī)制包括不同發(fā)展策略下的企業(yè)間和企業(yè)內(nèi)外部協(xié)調(diào)方式。

        3 藥物和治療方法

        所有患者在第1和第8天均給予注射用鹽酸吉西他濱(江蘇豪森藥業(yè)集團(tuán)有限公司生產(chǎn),規(guī)格:1.0g)1000mg/m2,1次/d。此外,所有患者在第1天至第5天靜脈滴注順鉑(江蘇豪森藥業(yè)集團(tuán)有限公司生產(chǎn),規(guī)格:6mL:20mg×5瓶)75mg/m2,1次/d。治療組在此基礎(chǔ)上,在第1天至第5天靜脈滴注氟脲苷(廣東嶺南制藥有限公司生產(chǎn),規(guī)格:0.25g)1500mg/m2,1次/d。兩組均連續(xù)治療21 d。化療期間給予止嘔及其他對癥處理。

        完全緩解(CR):患者病灶消失;部分緩解(PR):患者病灶消失 >30%;穩(wěn)定(SD):患者病灶介于緩解與惡化之間;進(jìn)展(PD):病灶進(jìn)展>20%,或已轉(zhuǎn)移??陀^緩解率(ORR)=(CR+PR)/總例數(shù)。疾病控制率(CBR)=(CR+PR+SD)/總例數(shù)。

        4 臨床療效評價

        水泥:通常用于GRC中的水泥主要有快硬硫鋁酸鹽水泥、低堿度硫鋁酸鹽水泥、普通硅酸鹽水泥、白色硅酸鹽水泥。泰科石采用的是阿爾博波特蘭水泥,其強(qiáng)度及白度都比普通水泥高。

        5 觀察指標(biāo)

        治療前,對照組與治療組血清中miR-328、miR-499、HE4、CEA和POTEE的水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。治療后,對照組與治療組血清中miR-328、HE4、CEA和POTEE的水平明顯下降,而miR-499的水平明顯上升;同組治療前后比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。經(jīng)不同治療后,治療組血清中miR-328、HE4、CEA和POTEE的水平較對照組下降的更顯著,而miR-499的水平上的更升顯著,兩組組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。

        對兩組患者共66例進(jìn)行不良反應(yīng)評價,均無死亡病例產(chǎn)生。33例對照組和33例治療組均未出現(xiàn)肌酐升高、脫發(fā)、耳毒性和周圍神經(jīng)毒性的不良反應(yīng)。相比于對照組,治療組出現(xiàn)的白細(xì)胞減少、血小板降低、惡心和嘔吐均明顯減少,且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05);而兩組出現(xiàn)的貧血、肝功ALT/AST升高、血尿和蛋白尿差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表4。

        5.3 Karnofsky(KPS)評分 采用KPS評分對66例我院收治的晚期非小細(xì)胞肺癌患者進(jìn)行功能狀態(tài)的評分,總分為100分,分?jǐn)?shù)越低,表示患者健康狀態(tài)越差。

        統(tǒng)計學(xué)軟件為PRISM 7.0,兩組患者的miR-328、miR-499、HE4、CEA和POTEE指標(biāo)比較采用t檢驗,用表示。臨床治療效果比較選用 χ2檢驗。

        6 統(tǒng)計學(xué)處理

        5.4 不良反應(yīng)評價 不良反應(yīng)評價應(yīng)用Common Terminology Criteria for Adverse Events(CTCAE v.4.03)[8]進(jìn)行等級評估,分為5個等級,1級(輕度),2級(中度),3級(嚴(yán)重),4級(危機(jī)生命),5級(死亡)。記錄兩組每周的血常規(guī),血生化肝腎功等情況,并對癥處理。

        結(jié) 果

        1 兩組臨床療效比較

        青年教師是學(xué)校發(fā)展的后備力量,青年教師的專業(yè)發(fā)展決定著學(xué)校的可持續(xù)發(fā)展,這已經(jīng)引起了學(xué)校的足夠重視,具體表現(xiàn)在為青年教師搭建了一系列的平臺和舞臺,比如師徒結(jié)對、課例打磨、校本教研、外出學(xué)習(xí)等.然而,這一切都是基于外部力量的青年教師的被動成長,缺少青年教師對自己專業(yè)成長路徑的自主規(guī)劃和系統(tǒng)梳理,本文在具體實踐的基礎(chǔ)上,試圖從初中青年數(shù)學(xué)教師的視角,借助“教科研+”的主要陣地,自主開展專業(yè)論文寫作為切入點,簡單談幾點體會,不當(dāng)之處,敬請指正.

        表1 兩組臨床療效比較

        2 兩組KPS評分比較

        治療后,對照組和治療組的Karnofsky(KPS)評分均顯著提升,同組治療前后比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。對照組和治療組的Karnofsky(KPS)評分在治療前比較無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),但兩組經(jīng)不同治療后,治療組的Karnofsky(KPS)評分明顯高于對照組,兩組組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

        表2 兩組KPS評分比較()

        注:與對照組比較,☆P<0.05;與治療前比較,*P<0.05

        KPS評分治療前 治療后對照組 33 53.89±7.16 70.13±10.47*治療組 33 54.03±7.33 83.27±12.28組別 n/例☆*

        3 兩組血清中miR-328、miR-499、HE4、CEA和POTEE的水平比較

        5.1 血清中miR-328和miR-499的水平 采取66例我院收治的晚期非小細(xì)胞肺癌患者治療前后的外周血3mL。所有實驗在在取樣后兩小時內(nèi)開始。miR-328和miR-499的SYBR Green miRNA熒光定量PCR試劑盒購自HaiGene公司(貨號:AP01476,AP01564)。miRNA快速提取試劑盒購自HaiGene公司(貨號:B1802)。miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒購自HaiGene公司(貨號:D1801)。使用miRNA快速提取試劑盒抽取外周血的miRNA。使用miRNA反轉(zhuǎn)錄試劑盒將純化好的總miRNA進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄。再使用miR-328和miR-499 SYBR Green miRNA熒光定量PCR試劑盒在ABI7500儀器上進(jìn)行qPCR反應(yīng),實驗重復(fù)3次。

        表3 兩組血清中miR-328、miR-499、HE4、CEA和POTEE的水平比較()

        表3 兩組血清中miR-328、miR-499、HE4、CEA和POTEE的水平比較()

        注:與對照組比較,☆P<0.05;與治療前比較,*P<0.05

        組別 觀察時間 miR-328 miR-499 HE4(pmol/L) CEA(ng/mL) POTEE(pg/mL)對照組 治療前 3.16±0.42 0.36±0.08 217.21±21.26 5.41±0.35 327.21±47.18治療后 1.85±0.36* 0.87±0.12* 124.27±13.77* 3.17±0.16* 211.37±22.84*治療組 治療前 3.20±0.49 0.37±0.07 220.85±24.15 5.33±0.42 339.71±58.27治療后 1.32±0.31*☆ 1.09±0.15*☆ 55.23±9.35*☆ 2.84±0.31*☆ 163.95±29.61*☆

        4 不良反應(yīng)評價

        5.2 血清中HE4、CEA和POTEE的水平 采取66例我院收治的晚期非小細(xì)胞肺癌患者治療前后的外周血3mL,行酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzymelinked immunosorbent assay,ELISA)。HE4的ELISA試劑盒購自廈門研科生物技術(shù)有限公司(貨號:XWCEK1908)。CEA的ELISA試劑盒購自帝肯(上海)貿(mào)易有限公司(貨號:RE59101)。POTEE的ELISA試劑盒購自北京華夏遠(yuǎn)洋科技有限公司(貨號:E3654h)。按照試劑盒說明書,大致方法如下:使用前讓所有試劑恒溫到室溫,使用前輕輕混合所有液體試劑。向孔中加入50~100μL制備的標(biāo)準(zhǔn)品和樣品。蓋板并在室溫下孵育2 h。從孔中徹底吸出或傾倒溶液并丟棄液體。使用噴射洗瓶或自動96孔板洗滌器洗滌孔4次。向孔中加入100μL稀釋的檢測抗體。蓋板并在室溫下孵育1 h。從孔中徹底吸出或傾倒溶液并丟棄液體。洗滌4次。向每個孔中加入100μL稀釋的HRP綴合物。蓋上蓋板并在室溫下孵育30 min。從孔中徹底吸出或傾倒溶液并丟棄液體。洗滌4次。每孔加入100μL生色底物。在室溫下在黑暗中顯影30min。每孔加入100μL終止液。孔中的溶液應(yīng)從藍(lán)色變?yōu)辄S色。必須在停止反應(yīng)后30min內(nèi)評估該板。讀取每個孔在450nm和550nm處的吸光度。從450nm值減去550nm值以校正微孔板中的光學(xué)缺陷。使用曲線擬合統(tǒng)計軟件繪制符合標(biāo)準(zhǔn)的四參數(shù)邏輯曲線,然后計算測試樣品的結(jié)果。

        對照組完全緩解7例,部分緩解9例,穩(wěn)定8例,客觀緩解率為48.48%,疾病控制率為72.73%;治療組完全緩解9例,部分緩解15例,穩(wěn)定4例,客觀緩解率為72.73%,疾病控制率為84.85%,兩組客觀緩解率和疾病控制率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05),見表1。

        表4 兩組方案毒副反應(yīng)比較(n)

        討 論

        肺癌被認(rèn)為是全球癌癥導(dǎo)致死亡的主要原因之一[9]。肺癌的分類基于組織學(xué)特征,主要分為兩種亞型:非小細(xì)胞肺癌(NSCLC),其占85%的肺癌病例,以及小細(xì)胞肺癌(SCLC);且NSCLC的5年生存率低于15%[10]。氟尿苷是一種細(xì)胞生長抑制劑,通過嘧啶核苷磷酸化酶生物轉(zhuǎn)化為5-氟尿嘧啶,能夠抑制腫瘤細(xì)胞增殖和遷徙[11]?;诖耍疚闹荚谔骄糠遘章?lián)合化療治療晚期非小細(xì)胞肺癌對患者血清NSCLC相關(guān)生化因子水平的影響。本研究中,氟脲苷聯(lián)合化療治療治療后,對照組和治療組的KPS評分均顯著提升(P<0.05),且治療組的客觀緩解率、疾病控制率和KPS評分均大于對照組(P<0.05),治療組的不良反應(yīng)顯著降低(P<0.05)。氟脲苷聯(lián)合化療治療晚期非小細(xì)胞肺癌的客觀緩解率率和疾病控制率分別為72.73%和84.85%。相比于單一的使用鹽酸吉西他濱進(jìn)行化療治療晚期非小細(xì)胞肺癌,氟尿苷聯(lián)合鹽酸吉西他濱治療晚期非小細(xì)胞肺癌具有較好的療效。因此,其為臨床治療晚期非小細(xì)胞肺癌提供了方案選擇。

        本文研制的是一種無機(jī)泡沫吸波材料,是利用碎玻璃或火山灰等為主要原材料,在其中添加電磁損耗物質(zhì),熔融發(fā)泡而成的一種隱身材料,如圖7所示。

        ZHANG等[4]發(fā)現(xiàn)miR-328在肺癌患者血清中呈現(xiàn)高表達(dá)的狀態(tài),而miR-499呈現(xiàn)低表達(dá)的狀態(tài)。最近,一系列流行病學(xué)研究評估了成熟miR-499中rs3746444T/C多態(tài)性與各種人類疾病風(fēng)險和預(yù)后之間的關(guān)聯(lián)[12-14]。本研究中,治療后,對照組與治療組血清中miR-328的水平明顯下降(P<0.05),而miR-499的水平明顯上升(P<0.05)。經(jīng)不同治療后,治療組血清中miR-328水平較對照組下降的更顯著,而miR-499的水平上升更顯著(P<0.05)。ANDO等[15]在評估中認(rèn)為小鼠miR-499對腫瘤生長有抑制作用,提示了miR-499表達(dá)的異常下降是腫瘤發(fā)生發(fā)展的一個重要因素,暗示了miR-499可作為潛在的分子標(biāo)志物和臨床療效指標(biāo)。盡管發(fā)現(xiàn)miR-328在肺癌患者血清中高表達(dá),且經(jīng)過治療后其表達(dá)水平明顯降低,但是許多研究發(fā)現(xiàn)miR-328能夠靶向不同的基因來促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的增殖和遷移[16]。然而,關(guān)于miR-328的機(jī)制研究未涉及到非小細(xì)胞肺癌,期待進(jìn)一步研究。但是,這并不影響miR-328能作為潛在治療晚期非小細(xì)胞肺癌的臨床療效指標(biāo)。

        CEA是參與細(xì)胞黏附的糖蛋白,通常在胎兒發(fā)育期間產(chǎn)生,多項研究表明CEA能促進(jìn)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移[17]。以前的研究報道了POTEE在腫瘤進(jìn)展中起表觀遺傳調(diào)控作用[18]。在裸鼠中HE4過表達(dá)促進(jìn)了腫瘤生長[19]。因此,HE4、CEA和POTEE均為促腫瘤因子。本研究發(fā)現(xiàn),經(jīng)過治療后,對照組與治療組血清中HE4、CEA和POTEE的水平明顯下降(P<0.05)。并且,氟脲苷聯(lián)合化療治療晚期非小細(xì)胞肺癌后患者血清中HE4、CEA和POTEE的水平下降地更明顯(P<0.05)?;颊哐逯械腍E4、CEA和POTEE生化因子的降低進(jìn)一步證明了氟脲苷聯(lián)合化療治療晚期非小細(xì)胞肺癌具有較好的療效,與前面KPS評分、客觀緩解率和疾病控制率的臨床指標(biāo)相符。提示HE4、CEA和POTEE均可作為潛在的治療晚期非小細(xì)胞肺癌的臨床療效指標(biāo)。根據(jù)不良反應(yīng)評價,相比于對照組,治療組出現(xiàn)的白細(xì)胞減少、血小板降低、惡心和嘔吐均明顯減少,且差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。提示氟脲苷聯(lián)合化療治療方案耐受性好,安全性高。但因本組例數(shù)相對較少,因此需進(jìn)一步加大樣本量獲得更可靠的臨床證據(jù)。

        爸爸依然篤定地一步步向前走去,好像沒有什么東西會讓他回頭……可是當(dāng)他走到拐彎處,就在他側(cè)身拐彎的剎那,好像不經(jīng)意似的悄悄回過頭來,很快地瞟了弟弟他們一眼,然后才消失在拐彎處。

        綜上所述,氟脲苷聯(lián)合化療具有較好的臨床療效,能夠顯著降低miR-328、HE4、CEA和POTEE的水平,提升miR-499的水平,其耐受性好、安全性高,具有一定的臨床推廣應(yīng)用價值。

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