張佳嬋 程 琳 化璟琳 王昌濤* 趙 丹 孫寶國

（1 北京工商大學(xué) 北京食品營養(yǎng)與人類健康高精尖創(chuàng)新中心 北京100048 2 北京工商大學(xué)理學(xué)院 植物資源研究開發(fā)北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 北京100048 3 北京工商大學(xué)食品學(xué)院 食品添加劑與配料工程研究中心 北京100048）

人體的衰老與氧化應(yīng)激密不可分。通常情況下機(jī)體內(nèi)氧自由基的產(chǎn)生和清除處于動(dòng)態(tài)平衡。低劑量的活性氧能夠激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性應(yīng)激反應(yīng)，延緩衰老；當(dāng)氧化損傷在體內(nèi)的聚集程度超過機(jī)體抗氧化系統(tǒng)自身的清除能力時(shí)，自由基大量生成，進(jìn)一步引起核酸、蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)的異常表達(dá)[1-3]。

隨著社會(huì)的發(fā)展，人們?cè)絹碓疥P(guān)注機(jī)體健康的防護(hù)。對(duì)天然抗氧化活性成分的發(fā)掘和作用機(jī)制的研究越來越受到人們的關(guān)注。這些抗氧化活性物質(zhì)[4-7]不僅能直接清除自由基，還能提高機(jī)體的抗氧化酶活性，降低過氧化產(chǎn)物如丙二醛（Malondialdehyde，MDA）、脂褐素（Lipofuscin，LP）的積累，發(fā)揮防護(hù)作用。此外，機(jī)體在防御氧化應(yīng)激的過程中也會(huì)激活一系列細(xì)胞因子，如核因子E2 相關(guān)因子2（NF-E2-related factor 2，Nrf2）、核因子kappa-B （Nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells，NFκB）、p38 激酶等。其 中，Kelch 樣 ECH 關(guān) 聯(lián) 蛋 白1 （Kelch-like ECH-associated protein-1，Keap1）-核因子相關(guān)因子 （NF-E2-related factor 2，Nrf2）/抗氧化反應(yīng)元件（Antioxidant response element，ARE）信號(hào)通路被認(rèn)為是機(jī)體抗氧化應(yīng)激的關(guān)鍵通路，該通路調(diào)控的抗氧化酶系和Ⅱ相解毒酶能夠清除ROS 等有害物質(zhì)，因而表現(xiàn)出解毒和中和的作用[8-9]。

沙棘粕是沙棘籽經(jīng)過脫油處理后的副產(chǎn)物，前期研究已證實(shí)沙棘粕醇提物中富含豐富的黃酮、多酚、原花青素等活性成分，具有顯著的抗氧化，抗衰老的功能[10-12]。然而，目前還未開展以動(dòng)物為載體的實(shí)驗(yàn)研究。本試驗(yàn)采用D-半乳糖腹腔注射建立氧化應(yīng)激模型，同時(shí)灌注不同劑量的SBSE，測定小鼠肝臟組織和腦組織的總抗氧化能力（Total antioxidant capacity，T-AOC）、谷胱甘肽過氧化物酶（Glutathione peroxidase，GSH-Px）、超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）和過氧化氫酶（Catalase，CAT）活性以及丙二醛（Malondialdehyde，MDA） 和脂褐素（Lipofuscin，LP）含量，測定小鼠血清中白介素-2（Interleukin-2，IL-2）和白介素-6（Interleukin-6，IL-6）含量，并探索SBSE 對(duì)肝臟組織抗氧化相關(guān)基因表達(dá)水平的影響，從基因水平探索SBSE 對(duì)氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)機(jī)制，為SBSE 的開發(fā)利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

沙棘粕，青?？灯丈锟萍脊煞萦邢薰?，均烘干粉碎，過篩；ICR 小鼠，雄性，（23±3）g，北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。

D-半乳糖，美國Sigma Aldrich 公司；生理鹽水、無水乙醇（均為分析純），北京化工廠；考馬斯亮藍(lán)蛋白測定試劑盒、谷胱甘肽過氧化物酶（Glutathione peroxidase，GSH-Px）檢測試劑盒、超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD） 檢測試劑盒、過氧化氫酶（Catalase，CAT）檢測試劑盒、脂質(zhì)氧化（Malonaldehyde，MDA）檢測試劑盒、總抗氧化能力監(jiān)測試劑盒（Total antioxidant capacity assay kit with ABTS method，T-AOC），碧云天生物技術(shù)有限公司；組織脂褐素（Lipofuscin，LP）含量熒光定量檢測試劑盒，上海極威生物科技有限公司；小鼠白細(xì)胞介素-2（IL-2）ELISA 試劑盒、小鼠白細(xì)胞介素-6（IL-6）ELISA 試劑盒，上海裕平生物科技公司；動(dòng)物組織總RNA 提取試劑盒、FastQuant RT Kit（含gDNase）、SYBR green，天根生物科技（北京）有限公司。

1.2 儀器與設(shè)備

BS2202S 型電子天平，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司；DSHZ-300 恒溫水浴振蕩器，江蘇省太倉市實(shí)驗(yàn)設(shè)備廠；T6 新世紀(jì)紫外-可見分光光度計(jì)，北京普析通用儀器有限公司；YJ-2450 醫(yī)用超凈工作臺(tái)，蘇州凈化設(shè)備廠；SPx-250BF-2 生化培養(yǎng)箱，上海福瑪實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；FC Multiskan 酶標(biāo)儀，賽默費(fèi)世爾（上海）儀器有限公司；Anke 3-30K 臺(tái)式高速冷凍離心機(jī)，德國Sigma 公司。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 SBSE 制備及初步分離 SBSE 的制備及初步分離方法參照文獻(xiàn)[11]，最終獲得試驗(yàn)用SBSE。經(jīng)測定，10 mg/mL SBSE 溶液中黃酮含量為（2.97±0.31） mg/mL，總酚含量為（4.71±0.21） mg/mL，原花青素含量為（5.67±0.17）mg/mL。

配制0.5%的羧甲基纖維素鈉水溶液，以該溶液為溶劑，配制25 mg/mL SBSE 灌胃溶液。

1.3.2 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

1.3.2.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及氧化模型的制備 SPF級(jí)ICR 雄性小鼠50 只，平均體質(zhì)量（23±3） g，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周，隨機(jī)分成5 組，每組10 只，分別為：對(duì)照組、模型組、SBSE 高劑量組（SBSE-H）、SBSE 中劑量組（SBSE-M）、SBSE 低劑量組（SBSE-L）。除對(duì)照組外，其它各組腹腔注射10% D-半乳糖溶液，劑量為100 mg/（kg·d），以體質(zhì)量計(jì)，下同；對(duì)照組小鼠注射相同劑量生理鹽水；低、中、高劑量組小鼠分別以100，300，600 mg/（kg·d）的SBSE 灌胃。對(duì)照組和模型組灌胃等體積生理鹽水。持續(xù)處理42 d。灌胃期間自由飲水和進(jìn)食，飼養(yǎng)環(huán)境溫度22～25 ℃，相對(duì)濕度50%～60%，每隔3 d 更換一次墊料，光照充足。

1.3.2.2 小鼠實(shí)驗(yàn)樣本收集 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，小鼠處死前12 h 禁食，摘眼球取血，4 000 r/min 4 ℃離心15 min，分離血清，分裝保存于-20 ℃?zhèn)溆谩ｎi椎脫臼法處死小鼠，取一部分肝臟、腦組織液氮條件下速凍后置于-80 ℃保存，用于相關(guān)基因表達(dá)水平的檢測。另一部分肝臟和腦組織以1∶9（m/V）的比例加入預(yù)冷的生理鹽水，冰浴下勻漿制備10%勻漿液，3 000 r/min 4 ℃離心15 min，取上清液用于測定組織生化指標(biāo)。

1.3.2.3 SBSE 對(duì)小鼠生化指標(biāo)的測定 小鼠血清中IL-2、IL-6 含量的測定按照試劑盒說明書的方法進(jìn)行。肝臟、腦組織勻漿中SOD、GSH-Px、CAT、T-AOC 活力、氧化產(chǎn)物脂褐素和MDA 含量的測定均按照試劑盒說明書的方法進(jìn)行。

1.3.2.4 肝組織抗氧化相關(guān)基因表達(dá)水平的測定取出保存于-80 ℃的肝臟和腦組織，依次進(jìn)行組織RNA 的提取、RNA 純度及完整性的鑒定、合成cDNA 以及利用半定量實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) （quantitative Real-Time PCR，qRT-PCR）方法監(jiān)測肝臟中相關(guān)抗氧化基因mRNA 的表達(dá)情況。各基因引物序列見表1。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)利用SPSS 19.0 數(shù)據(jù)處理軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，組間比較采用單因素ANOVA 分析，兩兩比較采用t 檢驗(yàn)，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，所得結(jié)果以±s 表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 SBSE 對(duì)小鼠肝臟和腦組織T-AOC 水平的影響

圖1為SBSE 對(duì)小鼠肝臟組織和腦組織的總抗氧化能力水平的影響。模型組小鼠肝臟組織和腦組織的T-AOC 活力顯著低于對(duì)照組，且差異顯著（肝臟組織，P<0.01；腦組織，P<0.05），說明D-半乳糖誘導(dǎo)小鼠氧化應(yīng)激損傷模型成功建立。SBSE對(duì)小鼠肝臟組織和腦組織的T-AOC 水平有顯著影響：SBSE-L 組的T-AOC 水平顯著高于模型組（肝臟組織，P<0.05；腦組織，P<0.01）。SBSE-M 組和SBSE-H 組小鼠肝臟組織和腦組織的T-AOC水平與模型組相比無顯著性差異（P>0.05）。

表1 抗氧化相關(guān)基因?qū)崟r(shí)熒光定量PCR 引物序列Table 1 Primer sequences of anti-oxidative related genes for real time PCR

圖1 肝臟組織、腦組織總抗氧化能力的變化Fig.1 Levels of T-AOC in liver and brain in rats

2.2 SBSE 對(duì)小鼠肝臟和腦組織LP 和MDA 水平的影響

D-半乳糖的連續(xù)注射會(huì)導(dǎo)致小鼠機(jī)體細(xì)胞內(nèi)糖代謝紊亂，破壞機(jī)體抗氧化防御系統(tǒng)，積累大量自由基，過剩的自由基攻擊蛋白質(zhì)、DNA 等生物大分子，引發(fā)氧化反應(yīng)產(chǎn)生大量的LP、MDA 等，最終導(dǎo)致機(jī)體衰老。LP 和MDA 是公認(rèn)的評(píng)價(jià)氧化應(yīng)激損傷、機(jī)體衰老的標(biāo)志。表2為SBSE 對(duì)小鼠肝臟組織和腦組織中LP 和MDA 的影響結(jié)果。由表2可知，D-半乳糖誘導(dǎo)的模型組小鼠LP 和MDA水平顯著高于對(duì)照組（LP，P<0.05；MDA，P<0.01），氧化應(yīng)激損傷模型建立；SBSE 處理小鼠后，肝臟組織和腦組織中LP 和MDA 含量均顯著低于模型組。

表2 小鼠肝臟組織和腦組織中LP 和MDA 水平變化Table 2 Levels of LP and MDA in liver and brain in rats

2.3 SBSE 對(duì)小鼠肝臟和腦組織抗氧化酶活性的影響

機(jī)體通過自身的氧化還原系統(tǒng)應(yīng)對(duì)外界刺激導(dǎo)致的氧化應(yīng)激失衡。SOD、GSH-Px 和CAT 的活性直接反映了機(jī)體清除自由基的能力。表3為SBSE 對(duì)小鼠肝臟組織和腦組織中SOD、GSH-Px和CAT 水平的影響結(jié)果。與對(duì)照組相比，模型組小鼠肝臟組織和腦組織中SOD、GSH-Px 和CAT水平均顯著降低（P<0.01）；SBSE-M 組和SBSE-L組小鼠肝臟SOD 水平顯著高于模型組，然而，SBSE-H 組肝臟SOD 水平與模型組差異不顯著（P>0.05）；腦組織SOD 水平與SBSE 劑量存在正相關(guān)，在中、高劑量組中的含量顯著高于模型組（P<0.01），SBSE-L 組與模型組差異不顯著（P>0.05）；SBSE-L 組肝臟GSH-Px 水平（77.85±13.10 mU/mg 蛋白）顯著高于模型組（P<0.01），隨著SBSE 劑量的增加，并不能顯著增加肝臟GSH-Px 水平，SBSE-M 組GSH-Px 含量與模型組無顯著差別（P>0.05），SBSE-H 組GSH-Px 含量為（48.61± 9.12）mU/mg 蛋白，顯著高于模型組，而低于SBSE-L組；SBSE 并未對(duì)腦組織GSH-Px 水平有顯著影響，SBSE 低、中、高劑量組GSH-Px 水平與模型組相比無顯著性差異（P>0.05）；SBSE 對(duì)氧化損傷小鼠的CAT 活力影響顯著，SBSE-L 組小鼠肝臟CAT 活力達(dá)到（587.66±25.63）U/mg 蛋白，顯著高于模型組（551.00± 41.85）U/mg 蛋白，中、高劑量SBSE 對(duì)小鼠肝臟CAT 活力與模型組相比無顯著影響（P>0.05），而SBSE 對(duì)腦組織中CAT 活力有極顯著作用，與模型組（42.42± 6.64 U/mg 蛋白）相比，SBSE 低、中、高劑量組均顯著提高（P<0.01），且隨著劑量的增大，CAT 活力呈上升趨勢(shì)。

表3 小鼠肝臟組織和腦組織中SOD、GSH-Px 和CAT 水平變化Table 3 Levels of SOD，GSH-Px and CAT in liver and brain in rats

2.4 SBSE 對(duì)小鼠血清IL-2 和IL-6 水平的影響

機(jī)體氧化應(yīng)激損傷導(dǎo)致免疫功能低下，免疫系統(tǒng)是哺乳動(dòng)物抵抗惡劣環(huán)境襲擊的第一道防線。血清中IL-2 和IL-6 是機(jī)體免疫調(diào)節(jié)中最重要的細(xì)胞因子之一。D-半乳糖導(dǎo)致氧化應(yīng)激損傷，機(jī)體免疫系統(tǒng)迅速作出應(yīng)答，模型組IL-2 和IL-6 水平顯著高于對(duì)照組（P<0.01）（圖2）。SBSE處理氧化應(yīng)激損傷的小鼠后，IL-2（圖2a）和IL-6（圖2b） 水平與模型組相比出現(xiàn)顯著影響，SBSEM 組小鼠IL-2 和IL-6 水平顯著高于模型組 （P<0.05），低劑量和高劑量組小鼠IL-2 和IL-6 水平與模型組相比無顯著性差異（P>0.05）。

圖2 小鼠血清中IL-2，IL-6 水平的變化Fig.2 Levels of IL-2 and IL-6 in the serum of rats

2.5 SBSE 對(duì)小鼠肝臟抗氧化相關(guān)基因mRNA水平的影響

Keap1-Nrf2/ARE 信號(hào)通路是抗氧化應(yīng)答機(jī)制中最重要的一條信號(hào)通路[13]。在正常情況下，核轉(zhuǎn)錄因子Nrf2 的轉(zhuǎn)錄活性被其負(fù)調(diào)節(jié)因子Keap1控制在細(xì)胞質(zhì)中，且被泛素蛋白酶體途徑迅速降解。當(dāng)細(xì)胞受到氧化應(yīng)激時(shí)，Nrf2 從Keap1 的捕獲中解離出來，轉(zhuǎn)位入核，與核內(nèi)抗氧化應(yīng)答元件ARE 相結(jié)合，激活下游基因，調(diào)節(jié)解毒酶和抗氧化酶基因的表達(dá)水平，維持體內(nèi)平衡。被激活的抗氧化酶基因包括血紅素加氧酶1 （Heme Oxygenase 1，HO-1），NAD（P）H 醌氧化還原酶1（NAD（P）H：quinine oxidoreductase 1，NQO1）等。

圖3為小鼠肝臟與Keap1-Nrf2/ARE 信號(hào)通路相關(guān)的Keap1、Nrf2、HO-1、NQO1 基因的表達(dá)情況。模型組Keap1 mRNA 相對(duì)表達(dá)量顯著低于對(duì)照組 （P<0.01，圖3a），Keap1 相對(duì)表達(dá)量的降低，釋放了核轉(zhuǎn)錄因子Nrf2，使模型組Nrf2 mRNA 相對(duì)表達(dá)量顯著提高（P<0.05，圖3b），進(jìn)而激活下游抗氧化酶，使模型組抗氧化基因HO-1和NQO1 的相對(duì)表達(dá)量顯著上升（P<0.01，圖3c、3d），以應(yīng)對(duì)外界引起的氧化應(yīng)激損傷。由圖3可知，SBSE 的攝入具有提高小鼠氧化應(yīng)激應(yīng)答的效果：SBSE-M 組和SBSE-H 組Keap1 mRNA 相對(duì)表達(dá)水平與對(duì)照組相比顯著降低，低劑量SBSE-L組Keap1 mRNA 表達(dá)水平與對(duì)照組無顯著差異（圖3a）；SBSE 處理組的小鼠肝臟Nrf2 mRNA 表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組，且呈劑量依賴型特征，與模型組相比也有增加趨勢(shì)，說明SBSE 促進(jìn)Nrf2與ARE 的結(jié)合（圖3b）；與空白對(duì)照組相比，3 種劑量SBSE 處理小鼠均可提高下游抗氧化基因HO-1 mRNA 的表達(dá)水平，與模型組相比也具有增加趨勢(shì) （圖3c）；SBSE-L 組小鼠NQO1 mRNA表達(dá)水平顯著高于對(duì)照組和模型組，但是SBSEM 組與對(duì)照組無顯著性差異，SBSE-H 組與對(duì)照組差異顯著（圖3d）。

3 討論

圖3 SBSE 對(duì)小鼠肝臟組織抗氧化相關(guān)基因相對(duì)表達(dá)量的影響Fig.3 Effect of SBSE on the antioxidant genes in liver

D-半乳糖的長期注射使小鼠不能完全代謝，進(jìn)而堆積在體內(nèi)導(dǎo)致細(xì)胞滲透壓變化，細(xì)胞腫脹，代謝紊亂。同時(shí)，代謝過程中大量的自由基積累，導(dǎo)致機(jī)體氧化應(yīng)激損傷[14-15]。研究證實(shí)，D-半乳糖誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激導(dǎo)致小鼠衰老，已被廣泛應(yīng)用于抗氧化劑、抗衰老藥物等的篩選[5，16-17]，如阿魏酸[18]、銀杏葉提取物[19]、槲皮素[20]、阿托伐他汀[21]等。

在正常情況下，機(jī)體氧化與抗氧化處于動(dòng)態(tài)平衡，機(jī)體自身的抗氧化酶如SOD、CAT、GSH-Px等在清除自由基方面發(fā)揮重要作用。當(dāng)外界刺激導(dǎo)致氧化應(yīng)激損傷，使機(jī)體代謝紊亂，無法維持起初的平衡狀態(tài)時(shí)，脂質(zhì)過氧化導(dǎo)致機(jī)體產(chǎn)生大量過氧化產(chǎn)物。MDA 是目前公認(rèn)能反映氧自由基產(chǎn)生及引發(fā)的脂質(zhì)過氧化反映的間接指標(biāo)，其含量變化不但可以反映氧自由基生成量及氧化反應(yīng)的強(qiáng)烈程度，還可反映其對(duì)組織損傷的嚴(yán)重程度[22]。LP 是過氧化脂質(zhì)分解產(chǎn)物，是一種長期積累在細(xì)胞內(nèi)的殘余體，是目前公認(rèn)的老化指標(biāo)之一[23]。隨著損傷的加劇，過氧化產(chǎn)物增多。與此同時(shí)，機(jī)體氧化應(yīng)激損傷導(dǎo)致免疫功能低下，血清中IL-2 和IL-6 是機(jī)體免疫調(diào)節(jié)中最重要的細(xì)胞因子之一，在機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生積極的生物學(xué)活性。

在本試驗(yàn)中，模型組小鼠肝臟組織和腦組織T-AOC 活力顯著低于對(duì)照組，且差異顯著（肝臟組織，P<0.01；腦組織，P<0.05）；抗氧化酶SOD、GSH-Px 和CAT 活性顯著低于對(duì)照組 （P<0.01）；過氧化產(chǎn)物MDA 和LP 含量均與對(duì)照組有顯著差距（P<0.05）；機(jī)體免疫系統(tǒng)迅速作出應(yīng)答，IL-2 和IL-6 迅速升高，小鼠氧化應(yīng)激損傷模型建立成功。與模型組相比，SBSE-L 組（低劑量組）灌胃損傷小鼠，小鼠T-AOC 水平顯著上升（肝臟組織，P<0.01；腦組織，P<0.05），中、高劑量組與模型組差異不顯著；一定劑量下，SBSE 可以顯著提高損傷小鼠肝臟和腦組織中抗氧化酶SOD、GSH-Px 和CAT 活性，說明SBSE 有助于機(jī)體清除自由基，修復(fù)抗氧化系統(tǒng)。并且，灌胃SBSE 一段時(shí)間后，機(jī)體過氧化產(chǎn)物L(fēng)P 和MDA 含量均顯著低于模型組（P<0.01），說明SBSE 能夠減輕小鼠脂質(zhì)過氧化，緩解氧化應(yīng)激對(duì)組織的損傷程度。與此同時(shí)，SBSE-M 組 （中劑量組）IL-2 和IL-6 含量與模型組相比有顯著增加（P<0.05），低劑量組和高劑量組小鼠血清IL-2 和IL-6 含量與模型組無顯著性差異，這說明一定劑量的SBSE 還可以提高小鼠免疫系統(tǒng)功能，促進(jìn)免疫細(xì)胞因子IL-2 和IL-6 的分泌。

Keap1-Nrf2/ARE 通路被認(rèn)為是機(jī)體最重要的內(nèi)源性抗氧化信號(hào)通路。外界刺激引發(fā)Nrf2/ARE 信號(hào)的激活，Keap1 相對(duì)表達(dá)量降低，釋放了核轉(zhuǎn)錄因子Nrf2，促進(jìn)Nrf2 與ARE 結(jié)合，進(jìn)一步激活下游抗氧化酶及Ⅱ型解毒酶基因，使機(jī)體發(fā)揮抗氧化調(diào)節(jié)作用[8]。許多植物來源活性成分可以通過激活該通路來對(duì)抗機(jī)體的氧化應(yīng)激損傷。白藜蘆醇是葡萄籽、葡萄皮中的重要活性成分，白藜蘆醇可能通過激活Nrf2/ARE 信號(hào)通路降低心肌缺血再灌注損傷大鼠炎癥和氧化應(yīng)激[24]。柿葉提取物通過激活Nrf2/HO-1 信號(hào)途徑，促進(jìn)Nrf2 合成和核轉(zhuǎn)位，從而促進(jìn)下游抗氧化蛋白HO-1 的表達(dá)來減弱阿爾茨海默病細(xì)胞模型HEK293-APPswe（20E2）氧化應(yīng)激的損傷[25]。橙皮素是植物來源黃酮類物質(zhì)，研究證明它可以通過激活Nrf2/ARE/HO-1 與PPARγ 途徑來達(dá)到抑制肝臟細(xì)胞的氧化應(yīng)激、炎癥以及細(xì)胞增殖從而降低癌癥的發(fā)生[26]。從鹿蹄草中提取的活性成分2'-O-金絲桃苷具有顯著的防護(hù)肝損傷的作用，其機(jī)制也是圍繞Nrf2/ARE 信號(hào)通路發(fā)揮防護(hù)氧化應(yīng)激損傷的作用[27]。本課題研究對(duì)象SBSE，其發(fā)揮保護(hù)作用的機(jī)制與Keap1-Nrf2/ARE 信號(hào)通路密切相關(guān)。研究發(fā)現(xiàn)，SBSE 降低了負(fù)調(diào)節(jié)因子Keap1 的表達(dá)水平，促進(jìn)Nrf2 與Keap1 的解離；Nrf2 表達(dá)水平均顯著高于對(duì)照組，且存在劑量依賴型特征；與對(duì)照組相比，SBSE-L 組下游抗氧化基因NQO1 mRNA 表達(dá)水平顯著增加（P<0.05），并且在試驗(yàn)考察劑量范圍內(nèi)，HO-1 mRNA 的表達(dá)水平顯著上升（P<0.05）。

綜上所述，SBSE 能夠提高損傷小鼠肝臟和腦組織的T-AOC 活力、抗氧化酶活性，降低過氧化產(chǎn)物MDA 和LP 的含量，增加小鼠血清中免疫調(diào)節(jié)因子IL-2 和IL-6 的水平，其作用機(jī)制與其提高機(jī)體的抗氧化能力，增強(qiáng)機(jī)體免疫調(diào)節(jié)功能有關(guān)，其中，Keap1-Nrf2/ARE 信號(hào)通路在SBSE 發(fā)揮保護(hù)功能的過程中起到重要作用。