韓葉光 符生苗 符克英 王茹 張培

(海南省人民醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室，海南 ?？?570311)

類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)是一種以對(duì)稱性多關(guān)節(jié)受累的滑膜炎和關(guān)節(jié)破壞為主要特征的自身免疫性疾病，是造成人類喪失勞動(dòng)力和致殘的重要原因之一〔1〕。近年研究發(fā)現(xiàn)，CXC趨化因子配體(CXCL)-9及CXCL-10在自身免疫性疾病中異常表達(dá)，通過固有免疫和獲得性免疫過程參與自身免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展，有望作為自身免疫性疾病的生物學(xué)標(biāo)志物〔2,3〕。本研究通過檢測(cè)老年RA患者血清CXCL-9及CXCL-10表達(dá)水平，分析其與RA活動(dòng)度的相關(guān)性，旨在為RA的早期診斷及早期治療提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2016年1月至2018年3月海南省人民醫(yī)院收治的老年RA患者108例，男36例，女72例，年齡60～83〔平均(68.50±9.26)〕歲。RA診斷參考1987年美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)(ACR)修訂的RA診斷標(biāo)準(zhǔn)和分類標(biāo)準(zhǔn)。另選取同期在院體檢健康者50例作為對(duì)照組，男18例，女32例，年齡60～78〔平均(67.25±8.40)〕歲。選取的研究對(duì)象均排除合并其他自身免疫性疾病、感染、惡性腫瘤和重要器官系統(tǒng)疾病。本研究獲得醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)及患者知情同意。

1.2 研究方法 按照患者28個(gè)關(guān)節(jié)疾病活動(dòng)性評(píng)分(DAS28)來區(qū)分RA活動(dòng)度，DAS28<5.0分為低活動(dòng)，DAS28≥5.0分為高活動(dòng)，108例老年RA患者中低活動(dòng)組41例，高活動(dòng)組67例。采用Sharp評(píng)分法評(píng)估患者骨侵蝕和骨破壞的程度，Sharp評(píng)分越高表明結(jié)構(gòu)性改變?cè)絿?yán)重。108例RA患者中非骨侵蝕組48例，骨侵蝕組60例。

1.3 觀察指標(biāo) 所有研究對(duì)象于清晨空腹抽取靜脈血5 ml置于未加抗凝劑的離心管中，3 500 r/min，離心10 min分離血清于EP管，-70℃低溫冰箱保存待測(cè)。類風(fēng)濕因子(RF)及抗環(huán)瓜氨酸肽(CCP)抗體采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)，試劑盒由上?？菩律锛夹g(shù)股份有限公司提供。CXCL-9及CXCL-10采用CXCL-9及CXCL-10鼠抗人單克隆抗體ELISA檢測(cè)試劑盒(R&D Systems，美國(guó))檢測(cè)血清CXCL-9及CXCL-10含量。嚴(yán)格按照試劑盒說明書及操作步驟進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS21.0軟件進(jìn)行t及χ2檢驗(yàn)。繪制受試者工作特征(ROC)曲線分析各實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)對(duì)RA的診斷價(jià)值，曲線下面積(AUC)比較采用Z檢驗(yàn)。相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析。

2 結(jié) 果

2.1 RA組和對(duì)照組臨床一般資料比較 RA組與對(duì)照組性別、年齡、體重指數(shù)(BMI)、收縮壓、舒張壓、家族史、糖尿病史、高血壓史、飲酒史及吸煙史等情況比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

2.2 RA組和對(duì)照組血清CXCL-9、CXCL-10、RF及抗CCP抗體水平比較 RA組血清CXCL-9、CXCL-10、RF及抗CCP抗體水平均明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表2。

表1 RA組和對(duì)照組臨床一般資料比較

表2 RA組和對(duì)照組血清CXCL-9、CXCL-10、RF及抗CCP抗體水平比較

2.3 高活動(dòng)組和低活動(dòng)組血清CXCL-9、CXCL-10、RF及抗CCP抗體水平比較 高活動(dòng)組血清CXCL-9、CXCL-10、RF及抗CCP抗體水平均明顯高于低活動(dòng)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表3。

表3 高活動(dòng)組和低活動(dòng)組血清CXCL-9、CXCL-10、RF及抗CCP抗體水平比較

2.4 骨侵蝕組和非骨侵蝕組血清CXCL-9、CXCL-10、RF及抗CCP抗體水平比較 骨侵蝕組血清CXCL-9、CXCL-10、RF及抗CCP抗體水平均明顯高于非骨侵蝕組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。見表4。

表4 骨侵蝕組和非骨侵蝕組血清CXCL-9、CXCL-10、RF及抗CCP抗體水平比較

2.5 CXCL-9、CXCL-10、RF、抗CCP抗體及四項(xiàng)聯(lián)合診斷RA的價(jià)值 CXCL-9、CXCL-10、RF及抗CCP抗體診斷RA的臨界值分別為104.36 pg/ml、25.40 pg/ml、9.53 IU/ml、54.80 RU/ml。四項(xiàng)聯(lián)合診斷RA的AUC(95%CI)為0.920(0.862～0.975)明顯高于單項(xiàng)CXCL-9〔0.796(0.730～0.863)〕、CXCL-10〔0.828(0.771～0.884)〕、RF〔0.770(0.710～0.832)〕及抗CCP抗體〔0.752(0.690～0.814)〕，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Z=5.824、5.207、6.253、6.610，P<0.05)，其敏感度和特異度為93.0%和86.4%。見表5。

2.6 CXCL-9及CXCL-10與RF、抗CCP抗體及DAS28評(píng)分的相關(guān)性 Pearson相關(guān)分析顯示，RA患者血清CXCL-9與RF、抗CCP抗體及DAS28評(píng)分呈顯著正相關(guān)(r=0.546、0.458、0.362，均P<0.01)，CXCL-10與RF、抗CCP抗體及DAS28評(píng)分呈顯著正相關(guān)(r=0.638、0.517、0.435，均P<0.01)。

表5 CXCL-9、CXCL-10、RF、抗CCP抗體及四項(xiàng)聯(lián)合診斷RA的價(jià)值

3 討 論

RA呈全球分布，全世界的發(fā)病率平均為1%，在我國(guó)的發(fā)病率為0.2%～0.5%〔4〕，約一半的患者在2年內(nèi)可發(fā)生關(guān)節(jié)破壞，大多數(shù)患者出現(xiàn)不同程度的功能受損和關(guān)節(jié)畸形，致使RA患者的生活質(zhì)量嚴(yán)重降低，給社會(huì)和家庭帶來沉重的負(fù)擔(dān)〔5〕。RA的具體發(fā)病機(jī)制目前尚未明確，多數(shù)學(xué)者認(rèn)為，基因及環(huán)境因素、細(xì)菌和病毒感染及機(jī)體自身的免疫系統(tǒng)功能紊亂與RA的發(fā)生有關(guān)。CXCL-9屬于趨化因子CXC亞家族，其通過與效應(yīng)細(xì)胞上特異性受體CXCR3的結(jié)合，活化各類白細(xì)胞并趨化至病灶處，在機(jī)體的免疫防御中發(fā)揮作用。有研究表明，CXCL-9通過與相應(yīng)受體相互作用調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞的遷移，在炎癥性疾病的發(fā)病過程中起著關(guān)鍵性作用〔6〕。CXCL-10是α趨化因子家族的一員，對(duì)于T細(xì)胞的發(fā)育、遷移、黏附起著重要作用，還能夠活化單核細(xì)胞及自然殺傷細(xì)胞，參與多種自身免疫疾病的發(fā)生發(fā)展過程〔7〕。RF是一種以變性IgG為靶抗原的自身抗體，是臨床上常用來作為RA早期診斷和預(yù)后判斷的檢測(cè)指標(biāo)〔8〕?？笴CP抗體以IgG型抗體為主，70% RA患者血清中可檢測(cè)到抗CCP抗體，同時(shí)抗CCP抗體陽性也可以用來預(yù)測(cè)RA骨關(guān)節(jié)的破壞程度〔9〕。

本研究結(jié)果顯示，血清CXCL-9、CXCL-10、RF及抗CCP抗體水平在RA患者中異常高表達(dá)，其可能通過調(diào)控促炎細(xì)胞因子的分泌，參與RA的發(fā)生發(fā)展。在RA發(fā)病過程中，機(jī)體在損傷因子刺激下，大量分泌趨化因子CXCL-9及CXCL-10，使效應(yīng)性T淋巴細(xì)胞大量定向遷移，從而參與了與RA的病情發(fā)展〔10〕。本研究結(jié)果顯示CXCL-9、CXCL-10、RF及抗CCP抗體水平與RA的活動(dòng)度和骨侵蝕程度相關(guān)，可能參與RA的發(fā)生發(fā)展。Kuan等〔11〕研究發(fā)現(xiàn)，血清CXCL-9及CXCL-10水平變化與RA疾病活動(dòng)性密切相關(guān)，可作為RA判斷病情及疾病活動(dòng)的敏感生物標(biāo)志物。Pandya等〔12〕研究表明，CXCL-10與RA活動(dòng)度呈正相關(guān)，可作為RA嚴(yán)重程度惡和預(yù)測(cè)關(guān)節(jié)損害的生物學(xué)指標(biāo)。張瓊等〔13〕研究認(rèn)為，RF表達(dá)水平與RA病情進(jìn)展相關(guān)，RF表達(dá)水平越高提示患者的預(yù)后越差。另有研究顯示，RF及抗CCP抗體陽性是RA患者發(fā)生骨破壞的可能危險(xiǎn)因素，RF及抗CCP抗體水平越高及其與RA密切相關(guān)的共同表位越多，關(guān)節(jié)損害就越嚴(yán)重〔14〕。DAS28評(píng)分是評(píng)估RA患者疾病活動(dòng)度的有效指標(biāo)〔15〕。本研究結(jié)果說明CXCL-9、CXCL-10與RF、抗CCP抗體共同參與了老年RA的病理過程，CXCL-9、CXCL-10水平升高可能導(dǎo)致病情活動(dòng)，促進(jìn)疾病發(fā)展，從而加重關(guān)節(jié)滑膜局部微環(huán)境炎癥作用。安樂美等〔16〕研究也顯示，趨化因子與RA患者的DAS28評(píng)分呈正相關(guān)，可作為評(píng)價(jià)RA疾病活動(dòng)度的指標(biāo)。四項(xiàng)聯(lián)合診斷RA的AUC明顯高于單項(xiàng)，其敏感度和特異度最好。李傳利等〔17〕研究表明，趨化因子可作為RA診斷、病情判斷及疾病活動(dòng)的生物學(xué)指標(biāo)，與RF及抗CCP抗體聯(lián)合檢測(cè)更有助于老年RA的診斷。張園等〔18〕研究證實(shí)，單一的自身抗體檢測(cè)容易造成臨床上對(duì)RA的誤診或者是漏診，故一般需要結(jié)合多項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)以確診老年RA。本研究發(fā)現(xiàn)，單獨(dú)檢測(cè)其中一項(xiàng)對(duì)RA的診斷均有一定的局限，四項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)有助于提高老年RA診斷的準(zhǔn)確性。

綜上所述，血清CXCL-9及CXCL-10在老年RA患者中異常高表達(dá)，且與老年RA活動(dòng)度和骨侵蝕程度相關(guān)，其與RF及抗CCP抗體四項(xiàng)聯(lián)合檢測(cè)有助于提高老年RA診斷的敏感度和特異度。將CXCL-9及CXCL-10作為治療靶點(diǎn)進(jìn)行阻斷，可能會(huì)減輕老年RA的炎性反應(yīng)及減緩病情進(jìn)展，但老年RA具體的發(fā)病機(jī)制尚未明確，未來還需要更多實(shí)驗(yàn)研究來證實(shí)CXCL-9及CXCL-10在老年RA發(fā)病中具體的作用。