謝 鳳，孫威江，鄧婷婷

1福建農(nóng)林大學(xué)園藝學(xué)院，福州 350002；2福建省安溪縣現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)園協(xié)同創(chuàng)新中心，泉州 362400；3福建農(nóng)林大學(xué)安溪茶學(xué)院，泉州 362400；4福建省茶產(chǎn)業(yè)工程技術(shù)研究中心，福州 350002

1982年，EGCG3"Me((-)-Epigallocatechin-3-O-(3-O-methyl) gallate)首次由日本科學(xué)家從綠茶中分離，EGCG3"Me在抗腫瘤、降血壓、增加腸道有益菌等保健功效均優(yōu)于表兒茶素沒(méi)食子酸酯(EGCG)，特別是EGCG3"Me是目前發(fā)現(xiàn)抗過(guò)敏作用最為顯著的物質(zhì)成分[1]。過(guò)敏性疾病具有遺傳傾向，一些過(guò)敏性疾病仍然“流行”。由花粉、塵螨、真菌和寵物等致敏因素引起的過(guò)敏性鼻炎和哮喘最常見(jiàn)，季節(jié)性過(guò)敏性鼻炎如果不治療，25%至38%會(huì)患哮喘，最終成為常年性哮喘，肺氣腫和肺心病。據(jù)世界衛(wèi)生組織估計(jì)，全球1.5億哮喘患者中，50%的成人及至少80%的兒童是由過(guò)敏因素引起的，并逐年上升，每年有超過(guò)18萬(wàn)人死于哮喘。該類疾病已列為“21世紀(jì)重點(diǎn)研究和預(yù)防的疾病”[2]。

EGCG3"Me具有比EGCG更好的抗過(guò)敏效果[3]，但目前已篩選出的高EGCG3"Me含量茶樹(shù)資源較少，天然資源非常有限。綠色、高效的體外合成技術(shù)方法目前仍未有突破，對(duì)EGCG3"Me合成的研究多停在體外研究實(shí)驗(yàn)。茶樹(shù)體內(nèi)EGCG3"Me含量的影響因素多，EGCG3"Me的體內(nèi)代謝途徑也尚未研究清楚。目前國(guó)外對(duì)EGCG3"Me的研究多以保健功效研究為主，國(guó)內(nèi)則集中在高EGCG3"Me種質(zhì)資源篩選、茶樹(shù)EGCG3"Me影響因素探究、EGCG3"Me分離合成方法的建立等方面。

1 EGCG3"Me理化性質(zhì)及制備方法

1.1 EGCG3"Me理化性質(zhì)

EGCG3"Me是茶樹(shù)體內(nèi)檢測(cè)到的甲基化EGCG之一，與其它甲基化EGCG相比更常見(jiàn)且含量更高。甲基化反應(yīng)廣泛存在于生物體中，也稱為醚化，EGCG苯環(huán)上的8個(gè)酚羥基部分或全部轉(zhuǎn)化為甲基形成的一系列衍生物為甲基化EGCG[4]。EGCG3"Me是甲基取代了EGCG的D環(huán)沒(méi)食子酰基3"的位置羥基，如圖1。

EGCG3"Me是易溶于水和有機(jī)溶劑的白色粉末狀物質(zhì)。甲基取代不同位置的酚羥基后其抗氧化性能也發(fā)生變化[5]，EGCG3"Me清除DPPH活性和總抗氧化活性明顯低于EGCG[6]。但相對(duì)于EGCG表現(xiàn)出穩(wěn)定性增加、脂溶性上升、更易吸收、生物活性更強(qiáng)等特征，口服吸收率比EGCG高9倍[6-9]。此外，EGCG3"Me還被證明口服后具有高藥時(shí)曲線下面積(AUC)，即高藥物的生物利用度，這與其高生物活性和分布體積小有關(guān)[10]。

圖1 EGCG3"Me分子結(jié)構(gòu)式Fig.1 Molecular structural of EGCG3"Me

1.2 EGCG3"Me體外分離制備方法

甲基化EGCG分離方法包括制備型高效液相色譜(pHPLC)、Sephadex LH-20凝膠柱層析、高速逆流色譜(HSCCC)、Toyopearl HW-40S中壓柱層析等。孫業(yè)良等[11]用制備型高效液相色譜分離、收集，經(jīng)薄層色譜檢測(cè)(TLC)檢測(cè)和高效液相色譜(HPLC)分析，收集的組分釆用Sephadex LH-20進(jìn)一步去除色素得EGCG3"Me純品。龔正禮等[12]發(fā)明了利用茶葉制備甲基化兒茶素的方法。茶葉粉末提取萃取經(jīng)粗聚酰胺和細(xì)聚酰胺樹(shù)脂分離純化得到甲基化兒茶素組分，經(jīng)高速逆流色譜進(jìn)一步分離得到高純度的EGCG3"Me。周蓓等[13]以日本的茶葉為材料，處理后得到茶多酚粗品，粗品經(jīng)Toyopearl HW-40S柱層析分離得到2種純度較高的組分，一種為EGCG3"Me。

1.3 EGCG3"Me體外合成制備方法

目前，EGCG3"Me體外合成主要是用化學(xué)合成方法或生物合成方法修飾EGCG的甲基化結(jié)構(gòu)?；瘜W(xué)合成方法包括重氮甲烷合成法、碘甲烷合成法、硫酸二甲酯合成法、芐基保護(hù)基團(tuán)合成法、硝基苯磺?；Ｗo(hù)基團(tuán)合成法等，具有強(qiáng)目的性和高產(chǎn)率，但目前使用的大多數(shù)甲基化試劑是高毒性物質(zhì)，并且非常需要純化方法和藥理學(xué)方面的后期處理方法。化學(xué)反應(yīng)過(guò)程帶來(lái)許多副產(chǎn)物，使分離純化變得困難。生物學(xué)合成方法主要是酶法合成，酶是生物體內(nèi)的一種催化劑，它能綠色、高效、有選擇地在溫和的條件下催化各類反應(yīng)。但酶法合成中酶的提取技術(shù)尚不成熟，酶促反應(yīng)產(chǎn)物不確定，如費(fèi)冬梅[14]進(jìn)行酶促反應(yīng)實(shí)驗(yàn)一共生成了10種甲基化EGCG，其中包括4種一甲基化的EGCG、4種二甲基化的EGCG、2種三甲基化的EGCG，它們難以分離和純化，再加上酶的不穩(wěn)定性，酶法合成的成本高[15]。

2 EGCG3"Me保健功效

EGCG3"Me主要具有抗過(guò)敏、改善腸道、預(yù)防糖尿病、防肥胖、降血壓、保護(hù)肝臟等保健功效，在體外和體內(nèi)的臨床實(shí)驗(yàn)中已經(jīng)證實(shí)其在多方面表現(xiàn)出優(yōu)異的生物學(xué)功能，具有進(jìn)行深加工的潛力和價(jià)值，可開(kāi)發(fā)專一功效為藥用產(chǎn)品，也可開(kāi)發(fā)綜合功能為保健產(chǎn)品。

2.1 抗過(guò)敏

過(guò)敏性疾病，也稱變態(tài)反應(yīng)性疾病，是由患者過(guò)度敏感，在血液中產(chǎn)生特異性免疫球蛋白E抗體(IgE)導(dǎo)致過(guò)敏[2]。EGCG3"Me可有效控制花粉過(guò)敏反應(yīng)癥狀，一是，茶葉中的EGCG3"Me可以阻隔IgE受體與過(guò)敏原，進(jìn)而起到抗過(guò)敏的作用[16]；二是，EGCG3"Me可以抑制高親和力IgE Fc 受體(FcεRI)引發(fā)的神經(jīng)刺激及直接抑制PS/TK活性，阻隔外界刺激作用于嗜堿細(xì)胞，從而抑制組胺釋放達(dá)到抗過(guò)敏效果；三是，EGCG3"Me能抑制肥大細(xì)胞酪氨酸蛋白激酶(PTK)活性，可有效地阻斷肥大細(xì)胞釋放組胺[17,18]。還有研究表明[19]，EGCG3"Me抑制小鼠皮膚被動(dòng)反應(yīng)的效果是EGCG的兩倍。

2.2 改善腸道

EGCG3"Me對(duì)于改善人體腸道環(huán)境、維護(hù)人體腸道平衡具有重要作用[20]。EGCG3"Me能促進(jìn)腸道有益細(xì)菌(雙歧桿菌和乳酸菌)的增殖，并抑制有害細(xì)菌(梭狀菌和擬桿菌)的增殖，EGCG3"Me的純度越高，作用的效果越為明顯[21-23]，但對(duì)腸道總菌群數(shù)量無(wú)影響。張?chǎng)蔚萚21]進(jìn)行體外厭氧糞樣混合培養(yǎng)與熒光原位雜交技術(shù)實(shí)驗(yàn)，得出純度90%EGCG3"Me樣品的益生指數(shù)(PI)最高，為2.68，50%EGCG3"Me、30% EGCG3"Me和90% EGCG的樣品PI值依次為2.25、2.14和1.86，而對(duì)照組的PI值僅為0.12。

2.3 預(yù)防糖尿病

糖尿病是一組代謝性疾病，其特征在于胰島素分泌缺陷(Ⅰ型)或胰島素作用障礙(Ⅱ型)引起的高血糖癥。EGCG3"Me可治療Ⅱ型糖尿病。研究表明[24]，粗多酚、EGCG和EGCG3"Me對(duì)α-葡萄糖苷酶有很強(qiáng)的抑制作用，半抑制濃度(IC50)依次為0.178、0.040、0.064 mg/mL，抑制類型是可逆抑制，但粗多酚和EGCG是非競(jìng)爭(zhēng)抑制，EGCG3"Me為競(jìng)爭(zhēng)性抑制，有更強(qiáng)的抑制效果。

2.4 防肥胖

EGCG3"Me對(duì)消化酶具有抑制和猝滅作用[25]，可防肥胖。研究表明[22,26]，EGCG3"Me抑制小鼠前脂肪細(xì)胞3T3-L1增殖和分化，影響氨基酸合成、雙組分體系、ABC轉(zhuǎn)錄器等代謝途徑從而減輕體重，比EGCG具有較高的減肥效果和較低的細(xì)胞毒性活性。Yang Y[26]等用不同濃度的EGCG3"Me(20、40、80 μg/mL)處理小鼠前脂肪細(xì)胞3T3-L1，脂質(zhì)累計(jì)量分別下降到89.42±2.66%、64.36±3.13%和39.37±2.79%。此外，EGCG3"Me納米復(fù)合物能提高EGCG3"Me的生物活性并預(yù)防肥胖相關(guān)的代謝紊亂[23]。

2.5 降血壓

血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)催化血管緊張素(十肽)水解成八肽的血管緊張素Ⅱ，導(dǎo)致血管收縮和血壓升高。臨床試驗(yàn)表明[7]，富含EGCG3"Me的Benifuuki茶比不含EGCG3"Me的茶有更好的降血壓作用，主要是EGCG3"Me能抑制ACE的活性，達(dá)到降血壓的作用，且EGCG3"Me在人體內(nèi)的具有良好的吸收率和穩(wěn)定性。

2.6 保護(hù)肝臟

EGCG3"Me可以有效減緩由酒精引起的濃度依賴性變化，每天服用一定量的EGCG3"Me，可以降低血清中天冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)的濃度，以及肝臟細(xì)胞中丙二醛(MAD)的含量，同時(shí)，可以恢復(fù)肝臟中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)濃度到一定水平，從而保護(hù)肝臟細(xì)胞[26]。EGCG3"Me還能有效預(yù)防肝細(xì)胞凍傷，具備抗細(xì)胞毒素作用并維持細(xì)胞活性[27]。

2.7 治哮喘

EGCG3"Me對(duì)哮喘病有一定的治療作用。與EGCG相比，EGCG3"Me對(duì)人體內(nèi)一氧化氮水平和一氧化氮合酶(i-NOS)的表達(dá)具有更強(qiáng)的抑制作用[17]，此外，由于高濃度的一氧化氮導(dǎo)致的DNA破壞、支氣管上皮細(xì)胞脫落和功能變性和微血管滲出增加的癥狀減少，達(dá)到減輕氣道炎癥的作用。

3 茶葉EGCG3"Me含量影響因素

目前已有研究表明，茶樹(shù)品種、生長(zhǎng)環(huán)境、成熟度、采摘時(shí)間和采摘季節(jié)、加工方式等因素均會(huì)影響茶樹(shù)體內(nèi)EGCG3"Me含量[28]。影響EGCG3"Me含量的因素復(fù)雜，通過(guò)大量的科研實(shí)驗(yàn)，其影響規(guī)律逐漸明晰，今后的實(shí)驗(yàn)將更加系統(tǒng)、全面和深入。

3.1 茶樹(shù)品種

茶葉中EGCG3"Me的含量根據(jù)茶樹(shù)種質(zhì)的不同而差異很大，中葉種含量高，小葉種含量次之，而大葉種中含量甚微[29]。綠茶和烏龍茶種質(zhì)中普遍含有。高EGCG3"Me茶樹(shù)種質(zhì)資源的分布具有一定的區(qū)域特征，南方茶區(qū)含EGCG3"Me的茶樹(shù)種質(zhì)較多[30]，如廣東、福建，四川、重慶種質(zhì)資源中也較多含有EGCG3"Me。

李建華等[31,32]采用高效液相色譜法(HPLC)對(duì)四川70份茶樹(shù)品種資源一芽二葉秋梢中EGCG3"Me含量進(jìn)行分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，蜀茶5號(hào)、金觀音、城西11號(hào)、鳳凰單樅、崇枇71-1富含EGCG3"Me(含量>10 mg/g)。此外，只有3份種質(zhì)在8～10 mg/g之間，分別是肉桂、川農(nóng)2號(hào)、蒙山11號(hào)；含量在6～8 mg/g種資源有1份，為鐵觀音；5份茶樹(shù)種質(zhì)含量在4～6 mg/g，分別為浙農(nóng)117、蒙山29號(hào)、錫茶5號(hào)、黃葉早、霞浦元宵茶；18份茶樹(shù)種質(zhì)含量在0～4 mg/g，分別為英紅1號(hào)、金萱、黃金桂等。呂海鵬等[33]采用HPLC法對(duì)國(guó)內(nèi)200份高多酚茶樹(shù)種質(zhì)的一芽二葉新梢的EGCG3"Me含量及其變化規(guī)律進(jìn)行了研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，6份茶樹(shù)種質(zhì)的EGCG3"Me的含量大于1%，含量最高的為T(mén)RI-1，為1.431%，此外，研究認(rèn)為“紫娟”是富含EGCG3"Me的特異茶樹(shù)種質(zhì)，EGCG3"Me在其鮮葉中含量為1.05%[34]。唐娜等[35]對(duì)湖南的117個(gè)茶樣進(jìn)行種質(zhì)篩選，含量最高的是C48，含量為1.7%。

3.2 生長(zhǎng)環(huán)境

同一時(shí)期，不同地區(qū)的生態(tài)環(huán)境對(duì)茶樹(shù)EGCG3"Me含量變化有顯著影響。汪毅等[29]研究發(fā)現(xiàn)，分別生長(zhǎng)不同地區(qū)的同一品種，其EGCG3"Me含量相差6%左右，由此認(rèn)為低海拔和高光照條件對(duì)EGCG3"Me的形成非常重要。JI等[36]用黑色聚乙烯膜對(duì)鮮葉進(jìn)行不同程度(90%、95%、98%和100%)、不同時(shí)間(10、20天)的遮陰處理，研究結(jié)果表明遮陰能抑制EGCG3"Me的形成，遮陰程度對(duì)EGCG3"Me含量的影響不大。陳榛淯[37]等研究發(fā)現(xiàn)小綠葉蟬吸食后的茶葉EGCG3"Me含量增加。

3.3 生長(zhǎng)部位和成熟度

普遍研究發(fā)現(xiàn)，隨著葉片成熟度的增加，茶葉中EGCG3"Me的含量有增加趨勢(shì)，一般來(lái)說(shuō)，茶樹(shù)新梢的第三葉或者第四葉含量達(dá)到最高水平[38]，少數(shù)研究發(fā)現(xiàn)第二葉含量最高，莖中含量很少甚至無(wú)檢出。唐娜[39]發(fā)現(xiàn)EGCG3"Me在一芽四葉和一芽三葉中的含量最高，其次是一芽五葉，茶梗中含量極低。呂海鵬等[34]對(duì)一芽五葉新梢不同嫩度的鮮葉進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)第三葉的EGCG3"Me含量最高。李銀花[1]研究金牡丹茶樹(shù)品種不同成熟度葉片中EGCG3"Me含量的變化，發(fā)現(xiàn)茶樹(shù)中EGCG3"Me含量隨成熟度的增加而增加，第四葉中達(dá)最高，第五葉略有下降。而杜鴻標(biāo)[40]、李建華等[32]發(fā)現(xiàn)金牡丹、蜀茶5號(hào)中EGCG3"Me含量隨葉片成熟度先增加，第二葉含量最高。結(jié)果不一致可能由于樣品來(lái)源不一致或取樣方式造成了誤差。

3.4 采摘時(shí)間和季節(jié)

采摘時(shí)間影響茶葉中EGCG"Me的含量。一些研究得出結(jié)論[41]，在一天內(nèi)，上午9點(diǎn)EGCG3"Me含量開(kāi)始下降，到下午6點(diǎn)升至最高值。也有研究表明[38]，在中午12點(diǎn)采摘的茶鮮葉中EGCG 3"Me含量明顯高于早上8點(diǎn)和10點(diǎn)。因此，中午、下午或傍晚時(shí)采摘的茶葉EGCG"Me的含量較高，具體時(shí)間有待進(jìn)一步研究。

已有研究普遍表明，茶葉中EGCG3"Me含量秋季>夏季>春季。李建華等[32]比較蜀茶5號(hào)同等葉位春、夏、秋三季EGCG3"Me含量，結(jié)果顯示增加的趨勢(shì)，汪毅等[29]發(fā)現(xiàn)同一品種，秋茶的EGCG3"Me含量比春茶、夏茶高出20%左右，夏茶次之、春茶最低。李銀花等[1]研究?jī)蓚€(gè)富含EGCG3"Me茶樹(shù)種質(zhì)(金牡丹和水仙)春、夏、秋三個(gè)季節(jié)茶樹(shù)中EGCG3"Me含量的變化，發(fā)現(xiàn)秋季含量最高，其次是夏季、春季。呂海鵬等[33]研究發(fā)現(xiàn)秋季新梢中EGCG3"Me的含量高于夏季新梢。孫業(yè)良等[38]研究發(fā)現(xiàn)，秋冬季茶鮮葉中的EGCG3"Me的含量高于春夏季。但也有研究結(jié)果不一致的情況，如唐娜等[39]的研究認(rèn)為夏季含量相對(duì)最高，秋季次之，春季最低，結(jié)果不一致可能與其樣品來(lái)源不一致或取樣方式等有關(guān)。

3.5 生產(chǎn)工藝

加工工藝對(duì)茶葉EGCG3"Me含量有顯著影響，在不同加工工藝下，EGCG3"Me含量從高到低為白茶、綠茶、黃茶、青茶、紅茶。郭子豪等[42]以五種臺(tái)灣特色茶樹(shù)種質(zhì)(青心烏龍、臺(tái)茶12號(hào)、大葉烏龍、香椽種、及永康山野生茶)進(jìn)行四種不同加工(綠茶、包種茶、紅茶、佳葉龍茶)，研究發(fā)現(xiàn)不同加工方式的確會(huì)造成EGCG3"Me與主要兒茶素含量的不同。羅正飛等[43]發(fā)現(xiàn)采用相同原料加工成綠茶、白茶以及青茶，其EGCG3"Me的含量差異不大，在加工過(guò)程中可保持相對(duì)穩(wěn)定，而加工成的紅茶和普洱茶中則不含有EGCG3"Me。汪毅等[29]也用同一品種制成不同茶類，發(fā)現(xiàn)綠茶中EGCG3"Me含量最高，其次是青茶，僅為綠茶中EGCG3"Me含量的一半左右，在紅茶中很難發(fā)現(xiàn)EGCG3"Me。李建華等[44]用高效液相色譜-二極管陣列法檢測(cè)四川綠茶、黃茶、黑茶、紅茶和青茶成品茶，發(fā)現(xiàn)青茶EGCG3"Me含量最高，在3.14～6.08 mg/g之間，平均值為4.40 mg/g；黑茶EGCG3"Me含量在0～1.72 mg/g，平均值為0.35 mg/g；綠茶和黃茶中EGCG3"Me含量較低；綠茶中含量在0～0.39 mg/g之間，平均值為0.10 mg/g；黃茶中含量在0～0.09 mg/g之間，平均值為0.05 mg/g，紅茶中未檢出，造成與前人結(jié)果差異大的原因極可能是成品茶原料不一致。隨后，其又以蜀茶5號(hào)秋梢加工成4種茶類，發(fā)現(xiàn)EGCG3"Me在綠茶、黃茶中含量最高，與鮮葉相當(dāng)，其次為青茶，而紅茶中未檢出[32]。

不同的加工工序影響茶葉中EGCG3"Me含量。研究認(rèn)為[39]，不同加工工序?qū)G茶加工過(guò)程中茶葉EGCG3"Me的含量影響極顯著，攤放葉時(shí)EGCG3"Me含量最高，殺青葉時(shí)有所下降，揉捻葉時(shí)基本不變，干燥葉時(shí)又小幅下降。萎凋工序中茶葉中EGCG3"Me含量有明顯增加[32,33]，且日光萎凋的效果比室內(nèi)萎凋的效果要好[30]。自然萎調(diào)情況下，隨著萎凋時(shí)間的增加，EGCG3"Me的含量增加，當(dāng)萎凋時(shí)間達(dá)8小時(shí)，EGCG3"Me的含量達(dá)到最大值，此后萎凋時(shí)間越長(zhǎng)，EGCG3"Me的含量越低，當(dāng)?shù)竭_(dá)18小時(shí)，其含量已低于萎凋前一半[43]。搖青過(guò)程會(huì)使烏龍茶EGCG3"Me含量降低[30]。殺青工序使茶葉中EGCG3"Me含量降低。呂海鵬等[33]研究發(fā)現(xiàn)采用不同的殺青方式加工綠茶，EGCG3"Me含量由高到低分別為蒸青綠茶、曬青綠茶、炒青綠茶、烘青綠茶，蒸青、曬青能有效保留EGCG3"Me。綠茶、黃茶、青茶揉捻工序可顯著提高EGCG3"Me含量，這是由于加工過(guò)程中茶葉細(xì)胞膜被破壞，細(xì)胞內(nèi)的甲基化EGCG更易被提取出來(lái)[17]，而紅茶揉捻工序EGCG3"Me含量顯著下降，其原因一是以酶促氧化的發(fā)酵工序促使了EGCG3"Me甲基被取代或降解[43]，二是紅茶揉捻時(shí)發(fā)酵就已開(kāi)始，研究表明[30]，發(fā)酵可以減少相比于鮮葉一半的EGCG3"Me量，此時(shí)發(fā)酵破壞的EGCG3"Me量遠(yuǎn)大于揉捻增加的量[32]。干燥對(duì)茶葉中EGCG3"Me含量也有很大影響。鮮葉在不同溫度(60、90、120 ℃)直接烘干，90 ℃和120 ℃干燥的茶樣都明顯高于60 ℃干燥的茶樣[38]。呂海鵬等[34]研究發(fā)現(xiàn)，90 ℃的烘干溫度最有利于保持茶鮮葉中的EGCG 3"Me含量。

4 EGCG3"Me合成路徑探索

4.1 前體物質(zhì)

根據(jù)相關(guān)體外合成實(shí)驗(yàn)猜測(cè)，EGCG3"Me是EGCG合成后3"位甲基化或者是合成前沒(méi)食子?；谆蚱渌绑w甲基化。研究表明，茶葉中EGCG3"Me可以通過(guò)EGCG在某種甲基化酶的催化作用下轉(zhuǎn)化。伍妍俊[45]實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在人工模擬胃液中，EGCG3"Me的同分異構(gòu)體EGCG4"Me脫去甲基，形成EGCG。苑建[46]通過(guò)合成中間體甲基化EGC，從而再合成甲基化EGCG。

4.2 酶調(diào)控

甲基轉(zhuǎn)移酶調(diào)控生物體許多重要生理環(huán)節(jié)，如抑制或關(guān)閉基因表達(dá)，修復(fù)DNA損傷等，其通常以S-腺苷-甲硫氨酸(SAM)作為甲基供體催化甲基化反應(yīng)，并且根據(jù)底物的作用位點(diǎn)分為不同類型的酶，其中，O-甲基轉(zhuǎn)移酶是植物中非常重要的酶，影響植物的生長(zhǎng)發(fā)育并調(diào)節(jié)植物與環(huán)境的相互作用，其作用底物主要是酚類物質(zhì)，將SAM的甲基轉(zhuǎn)移到底物的酚羥基上形成甲基化產(chǎn)物[47]。

呂海鵬等[33]認(rèn)為，綠茶和青茶中的EGCG3"Me含量高可能與茶葉鮮葉中的甲基化酶的活性有關(guān)，而紅茶和普洱茶的EGCG3"Me含量低可能與茶葉發(fā)酵(或后發(fā)酵)過(guò)程EGCG3"Me發(fā)生氧化聚合或者產(chǎn)生了某些去甲基化酶使EGCG3"Me向EGCG轉(zhuǎn)化有關(guān)。有研究認(rèn)為[48]，茶樹(shù)咖啡酰輔酶A氧甲基轉(zhuǎn)移酶(CsCCoAOMT)催化甲基化EGCG合成。李銀花[1]研究發(fā)現(xiàn)基因CsCOMT的表達(dá)水平與茶樹(shù)中EGCG3"Me的含量呈正相關(guān)，通過(guò)SMART RACE技術(shù)成功克隆了甲基化EGCG合成酶的全長(zhǎng)cDNA序列，構(gòu)建了該基因的原核表達(dá)載體。費(fèi)冬梅[14]首次對(duì)產(chǎn)EGCG-O-甲基轉(zhuǎn)移酶的重組大腸桿菌的培養(yǎng)條件研究，得到了最佳培養(yǎng)條件。

4.3 受熱變化

高溫等因素引起的差向異構(gòu)化也可能是茶葉加工過(guò)程中EGCG3"Me含量降低的原因之一。長(zhǎng)時(shí)間高溫處理以及提取和滅菌中的熱處理等過(guò)程中，EGCG3"Me差向異構(gòu)化為GCG3"Me，目前在溶液中已經(jīng)證實(shí)了這種轉(zhuǎn)化的存在。當(dāng)茶葉發(fā)酵時(shí)可能導(dǎo)致EGCG3"Me被進(jìn)一步氧化聚合，部分生成甲基化的茶黃素[33,34,49]。

4.4 關(guān)聯(lián)代謝途徑

茶葉EGCG3"Me代謝合成途徑的研究多集中在兒茶素代謝途徑。杜鴻標(biāo)等[40]研究了金觀音、金牡丹、黃玫瑰三個(gè)品種不同季節(jié)、不同發(fā)育階段中兒茶素合成代謝途徑的相關(guān)基因CHS、CHI、PAL、C4H、ANS等與EGCG3"Me的表達(dá)趨勢(shì)符合情況，不同品種基因表達(dá)量變化趨勢(shì)不一，相關(guān)性不強(qiáng)。這可能因?yàn)楦缓珽GCG3"Me的品種中個(gè)別兒茶素化合物的代謝不同于其他茶樹(shù)品種[36,50]。Luo Y等[51]鑒定到了一個(gè)bHLH轉(zhuǎn)錄因子差異表達(dá)基因CsbHLH62，其能夠抑制與EGCG3"Me的積累呈正相關(guān)的CCoAOMT、CsLAR和CsDFR的表達(dá)進(jìn)而負(fù)向調(diào)控EGCG3"Me的合成。也有研究表明[52]，EGCG3"Me的含量和咖啡堿代謝無(wú)相關(guān)關(guān)系。

5 展望

EGCG3"Me具有不可替代的抗過(guò)敏等保健功效，具有進(jìn)行深加工、開(kāi)發(fā)為保健產(chǎn)品的潛力和價(jià)值，但茶樹(shù)體內(nèi)天然EGCG3"Me含量低，化學(xué)合成多用危害、劇毒的試劑難于處理副產(chǎn)物，酶法合成綠色、健康但效率低且不可控，今后對(duì)EGCG3"Me分離、合成的研究將集中在綠色、高效、專一產(chǎn)物方法的開(kāi)發(fā)。高EGCG3"Me含量茶樹(shù)資源調(diào)查較少，急需挖掘高EGCG3"Me的茶樹(shù)種質(zhì)資源為EGCG3"Me實(shí)驗(yàn)和深加工提供材料，為種質(zhì)資源的開(kāi)發(fā)提供借鑒依據(jù)。EGCG3"Me含量的影響因素有很多，但具體的影響機(jī)理尚不清楚，甲基化EGCG代謝機(jī)理的研究主要集中在甲基轉(zhuǎn)移酶，大多為體外合成實(shí)驗(yàn)，針對(duì)甲基化EGCG的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)較少，茶樹(shù)體內(nèi)EGCG3"Me代謝合成機(jī)理尚不清楚，同位素標(biāo)記示蹤實(shí)驗(yàn)、茶樹(shù)體外分解實(shí)驗(yàn)也將展開(kāi)，隨著組學(xué)研究熱潮的升溫，組學(xué)也將應(yīng)用于EGCG3"Me的研究。隨后EGCG3"Me深加工保健產(chǎn)品也將逐漸被開(kāi)發(fā)，廣泛推向市場(chǎng)，解決困擾人們的過(guò)敏問(wèn)題。