陳鵬強(qiáng) 福建南星動(dòng)物保健品有限公司 福建南平 353000

偽狂犬病（Pseudorabies）是由偽狂犬病病毒引起家畜和野生動(dòng)物共患的一種急性傳染病，可感染豬的神經(jīng)系統(tǒng)、繁殖系統(tǒng)及呼吸系統(tǒng)，導(dǎo)致妊娠母豬流產(chǎn)或死胎、公豬不育、新生仔豬大量死亡、育肥豬呼吸困難、生長(zhǎng)停滯等[1]。

2013年以來(lái)，該病開(kāi)始了新一輪的流行暴發(fā)，且傳播速度快、發(fā)病急。臨床一般先發(fā)生在后期育肥豬，出現(xiàn)類似流感癥狀，按照流感方案治療無(wú)效，反復(fù)出現(xiàn)呼吸道癥狀，后續(xù)在母豬和哺乳仔豬中傳播[2-3]。其中母豬出現(xiàn)高燒、流產(chǎn)、木乃伊胎增多、返情率升高；哺乳仔豬出現(xiàn)急性死亡、神經(jīng)癥狀[4]。

種公豬若攜帶偽狂犬病病毒，可通過(guò)精液迅速在豬群中傳播。因此，進(jìn)行種公豬精液的篩查是對(duì)疫病凈化的先決條件。農(nóng)業(yè)部規(guī)定偽狂犬病病毒的篩查及檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)是通過(guò)檢測(cè)血清PRV-gE抗體，若種豬檢測(cè)為陽(yáng)性應(yīng)嚴(yán)格淘汰，但機(jī)體需要一定的時(shí)間來(lái)對(duì)感染形成免疫反應(yīng)（需要10～15 d），因此，在感染前期是無(wú)法通過(guò)抗體檢測(cè)進(jìn)行診斷[5-6]，需要再結(jié)合精液PCR檢測(cè)。本文通過(guò)將ELSIA檢測(cè)與PCR診斷相結(jié)合，優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)，精確實(shí)現(xiàn)種公豬偽狂犬病的帶毒篩查。

1 材料與方法

1.1 樣品來(lái)源 前腔靜脈采集公豬血液，精液收集至輸精瓶。

1.2 試劑與儀器 偽狂犬病gE抗體檢測(cè)試劑盒（PRV-gE-Ab），購(gòu)自愛(ài)德士；偽狂犬病病毒熒光定性PCR檢測(cè)試劑，購(gòu)自POCKIT；美國(guó)寶特酶標(biāo)儀，POCKIT便攜式熒光定性PCR儀。

1.3 試驗(yàn)方法 公豬血液偽狂犬病gE抗體檢測(cè)按照愛(ài)德士操作說(shuō)明進(jìn)行，樣本S/N值≥0.7判定為陰性，樣本S/N值＜0.6判定為陽(yáng)性；精液偽狂犬病病毒檢測(cè)按照POCKIT檢測(cè)說(shuō)明書(shū)操作，樣本A520/B520值≥1.4判定為陽(yáng)性，樣本A520/B520值＜1.2判定為陰性。

表1 公豬血清抗體檢測(cè)及精液病原檢測(cè)結(jié)果

2 結(jié)果與分析

本試驗(yàn)采集全場(chǎng)公豬14頭，其中杜洛克公豬12 頭（D1～D12）、長(zhǎng)白公豬 2 頭（L13～L14）的血液及精液，進(jìn)行血清抗體檢測(cè)和偽狂犬病病原學(xué)診斷。該規(guī)模場(chǎng)在2018年10～11月返情率達(dá)到25%以上，經(jīng)系列排查，由于使用偽狂犬病帶毒公豬的精液配種，導(dǎo)致母豬群返情率升高。

通過(guò)公豬血清抗體、精液病原檢測(cè)結(jié)果顯示：（1）D10、L13雖然偽狂犬病gE抗體為陰性，但是病原學(xué)檢測(cè)其精液為陽(yáng)性，說(shuō)明這2頭公豬目前正處于感染的前期且正在排毒，公豬的精液不能作配種使用；（2）公豬 D2、D3、D7、D8、D9 偽狂犬病 gE 抗體為陽(yáng)性，且精液病原學(xué)檢測(cè)偽狂犬病病毒為陽(yáng)性，說(shuō)明這5頭公豬歷史上曾感染過(guò)偽狂犬病野毒且正在排毒；（3）公豬 D1、D5、D6、D12、L14 偽狂犬病 gE 抗體及精液病原學(xué)檢測(cè)均為陰性，說(shuō)明使用其精液不存在感染風(fēng)險(xiǎn)；（4）公豬D4、D11雖然偽狂犬病gE抗體為陽(yáng)性，但精液病原學(xué)檢測(cè)偽狂犬病病毒為陰性，說(shuō)明其歷史上曾感染過(guò)偽狂犬病病毒但目前沒(méi)有排毒，該精液暫時(shí)可以使用但有風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)定期進(jìn)行精液病原學(xué)檢測(cè)。

由于該場(chǎng)歷史上為偽狂犬病陽(yáng)性場(chǎng)，新引進(jìn)的部分后備公豬也隨之轉(zhuǎn)陽(yáng)，結(jié)合本次系統(tǒng)檢測(cè)結(jié)果，建議全場(chǎng)公豬一年免疫4次偽狂犬病弱毒疫苗，同時(shí)結(jié)合滅活疫苗免疫；公豬精液偽狂犬病病毒檢測(cè)陽(yáng)性的公豬暫不作生產(chǎn)使用 （原則上建議偽狂犬病陽(yáng)性豬應(yīng)淘汰），另外購(gòu)偽狂犬病雙陰精液（血清gE抗體及精液病原）補(bǔ)充本場(chǎng)使用。半個(gè)月后返情率下降至15%以下。

3 討 論

偽狂犬病病毒為DNA病毒，基因組相對(duì)保守，變異率低[7]。目前國(guó)內(nèi)流行的新毒株與2011年前分離的老毒株之間，序列差異并不大，個(gè)別存在的基因標(biāo)記與毒力間的關(guān)系尚未得到驗(yàn)證[8]。

ELISA法是目前最為實(shí)用的血清學(xué)檢測(cè)方法，能夠快速鑒定出感染過(guò)偽狂犬病病毒的種公豬，但機(jī)體需要一定的時(shí)間來(lái)對(duì)感染形成免疫反應(yīng)，因此，血清學(xué)檢測(cè)在感染早期發(fā)揮的作用十分有限[9]。PCR診斷檢測(cè)能夠直接檢測(cè)出偽狂犬病病毒，因此，可以在感染初期，還未產(chǎn)生抗體時(shí)檢測(cè)到感染[10]。在實(shí)際應(yīng)用中，關(guān)鍵在于了解每一種方法各自的優(yōu)勢(shì)和劣勢(shì)，在不同情況下選擇最適合的技術(shù)。通常，2種檢測(cè)方法結(jié)合應(yīng)用是最為準(zhǔn)確而且經(jīng)濟(jì)的方案，保護(hù)和提升畜群的健康水平。

本文通過(guò)熒光定性PCR方法檢測(cè)公豬精液的偽狂犬病排毒情況，優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)了血清學(xué)檢測(cè)的遺漏，實(shí)現(xiàn)精確高效的公豬精液篩查，快速有效地減少疫病傳播風(fēng)險(xiǎn)，提高生產(chǎn)成績(jī)。