王建萍，李公存，顧亮，沙玉芬，劉笑宏，蘇佳明

(煙臺市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究院，山東煙臺 265500)

徐香獼猴桃萌芽率、成枝率和坐果率高，豐產(chǎn)穩(wěn)產(chǎn)，適應(yīng)性強(qiáng)。果實圓柱形，果皮黃綠色，被黃褐色硬刺毛，果肉綠色、質(zhì)細(xì)多汁、酸甜可口，單果重75～110g，最大果重137g，具有極高的推廣價值[1]。獼猴桃的常規(guī)育苗方法主要是實生苗嫁接法和枝條扦插繁殖法。嫁接苗童期生長緩慢，育苗周期達(dá)2年以上，扦插苗成活率極低[2]。因此傳統(tǒng)的育苗方法已經(jīng)不能滿足日益增長的獼猴桃產(chǎn)業(yè)需求。組織培養(yǎng)具有繁殖速度快、繁殖系數(shù)大，而且具有繁殖后代整齊一致、能保持原有品種優(yōu)良性狀的優(yōu)點，本試驗對徐香獼猴桃的莖段快速繁殖技術(shù)進(jìn)行了研究，探討了不同培養(yǎng)階段不同培養(yǎng)基對培養(yǎng)效果的影響，旨在為生產(chǎn)上進(jìn)行徐香獼猴桃工廠化生產(chǎn)提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

以徐香獼猴桃當(dāng)年生健壯枝條的莖段為組織培育材料。

1.2 試驗設(shè)計

初代培養(yǎng)，采用MS培養(yǎng)基，添加3種激素ZT(玉米素)、6-BA(6-芐氨基腺嘌呤)、NAA(萘乙酸)，設(shè)置6個不同處理(表1)。增殖培養(yǎng)，采用MS培養(yǎng)基，添加3種激素，6-BA、IAA(吲哚乙酸)、GA3(赤霉素)，設(shè)置8個處理(表2)。生根培養(yǎng)，采用1/2MS培養(yǎng)基，添加2種激素，NAA、IBA(吲哚丁酸)，設(shè)置9個處理(表3)。煉苗及移栽，使用河沙、蛭石、草炭土3種基質(zhì)，設(shè)置5個處理(表4)。分別調(diào)查組培苗各階段的生長情況，移栽的成活率等。

1.3 試驗方法

剪掉徐香獼猴桃當(dāng)年生健壯枝條上的葉片，用自來水沖洗30～60分鐘，在超凈工作臺上嚴(yán)格消毒，過程為：先用75%酒精浸泡45秒，再用0.1%升汞浸泡10～12分鐘，最后用無菌水沖洗4～6次。將消毒好的枝條剪成2cm左右的帶芽莖段，縱剖成兩半，將剖面向下接種到預(yù)先配制好的初代培養(yǎng)基上，分化成苗后，轉(zhuǎn)到增殖培養(yǎng)基上，經(jīng)過繼代培養(yǎng)形成一定數(shù)量的試管苗后，選取高約2cm以上的健壯幼苗轉(zhuǎn)移到生根培養(yǎng)基上。生長至高約3cm、并生有3～4條1cm左右的新根時，即可煉苗移栽。在自然光下馴化煉苗4～6天，然后揭開瓶蓋進(jìn)行透氣鍛煉，每天噴清水2～3次，3天后小心取出幼苗，洗凈根部的培養(yǎng)基進(jìn)行移栽。

2 結(jié)果與分析

2.1 MS培養(yǎng)基加不同激素對徐香獼猴桃初代培養(yǎng)的影響

由表1可以看出，徐香獼猴桃莖段在不同初代培養(yǎng)基中的誘導(dǎo)分化植株情況不同，其中處理6的生長情況最好，成活率最高，為90.0%，生長50天后平均株高最高，為2.9cm，且生長健壯；處理4的生長健壯，生長50天后平均株高較高，為2.8cm，但是成活率較處理6低，為66.7%；處理1的生長情況最差，成活率僅有16.7%，平均株高1.7cm，且生長細(xì)弱。因此，徐香獼猴桃初代培養(yǎng)適合的培養(yǎng)基為MS+ZT 0.5mg/L+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.05mg/L。

表1 MS培養(yǎng)基加不同激素對徐香獼猴桃初代培養(yǎng)的影響

2.2 MS培養(yǎng)基加不同激素對徐香獼猴桃增殖培養(yǎng)的影響

由表2可以看出，徐香獼猴桃莖段在不同激素的MS培養(yǎng)基上繼代增殖情況不同，隨著繼代次數(shù)的增多，增殖系數(shù)基本呈上升的趨勢。其中處理6的增殖及生長情況最好，第5代時增殖系數(shù)達(dá)6.8，叢生芽多且生長健壯；處理2和處理5的增殖和生長情況較好，第5代時，增殖系數(shù)分別達(dá)6.0和5.6，叢生芽均較多，生長較健壯；處理1、4、7和8的增殖情況均一般，且處理4、7和8出現(xiàn)了不同程度的玻璃化現(xiàn)象。因此，徐香獼猴桃繼代培養(yǎng)適合的培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.5mg/L+IAA 0.2mg/L+GA30.1mg/L。

表2 MS培養(yǎng)基加不同激素對徐香獼猴桃繼代增殖的影響

2.3 1/2培養(yǎng)基加不同激素對徐香獼猴桃生根培養(yǎng)的影響

由表3可以看出，徐香獼猴桃莖段在不同激素的1/2培養(yǎng)基上生根情況不同，處理5生根最好，生根率100%，單株生根5.8條，平均根長2.5cm，生長粗壯；處理2、6生根情況較好，生根率均為100%，生根分別為5.2和5.0條，平均根長較長，分別為2.2cm和2.3cm，根系均粗壯；處理3、8生根率較高，均為83.3%，單株生根分別為4.2和3.3條，平均根長較短，分別為2.0cm和1.9cm；處理1、4生根情況較差，生根率分別僅有16.6%和33.0%，單株生根分別為0.83和1.0條，平均根長0.5cm和0.9cm。因此，徐香獼猴桃適合的生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA 0.15mg/L+IBA 0.1mg/L。

2.4 煉苗與移栽

由表4可看出，當(dāng)基質(zhì)為蛭石+草炭土?xí)r，徐香獼猴桃試管苗移栽成活率最高，為90%；當(dāng)基質(zhì)為河沙+草炭土?xí)r，移栽成活率也較高，為87%；當(dāng)基質(zhì)分別為河沙和蛭石時，移栽成活率較低，分別僅為27%和22%，這可能是由于單用河沙和蛭石保水性差；當(dāng)基質(zhì)為草炭土?xí)r，移栽成活率也不高，為47%，這可能是因為草炭土透氣性差。因此，煉苗后將徐香獼猴桃移栽到蛭石+草炭土基質(zhì)中，確保成活率。

表3 1/2MS培養(yǎng)基加不同激素對徐香獼猴桃生根的影響

表4 不同基質(zhì)對徐香獼猴桃試管苗移栽的影響

3 小結(jié)與討論

在培養(yǎng)基中加入適當(dāng)?shù)闹参锷L調(diào)節(jié)劑(人工合成的植物激素)后，才能誘導(dǎo)細(xì)胞的分裂，愈傷組織的形成和生長以及根、芽的分化等變化[3]。朱學(xué)棟等[4]認(rèn)為MS+ZT 0.8mg/L+NAA 0.1mg/L能很好地誘導(dǎo)紅陽獼猴桃莖段分化。本研究采用較低濃度的ZT、6-BA與低濃度的NAA搭配，對徐香獼猴桃誘導(dǎo)效果較好，最佳誘導(dǎo)培養(yǎng)基為MS+ZT 0.5mg/L+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.05mg/L，成活率達(dá)90%。

本研究結(jié)果表明，徐香獼猴桃最佳增殖培養(yǎng)基為MS+6-BA 0.5mg/L+IAA 0.2mg/L+GA30.1mg/L，第5代增殖系數(shù)達(dá)6.8。這與文國琴[5]使用較高的激素濃度MS+6-BA 2.0mg/L+NAA 0.4mg/L+GA30.1mg/L組合相比有些差異。但GA3濃度太低不利于增殖培養(yǎng)，6-BA濃度太高容易出現(xiàn)植株玻璃化。本研究發(fā)現(xiàn)繼代培養(yǎng)次數(shù)影響增殖效果，第5代時的增殖系數(shù)明顯高于第1代和第3代，這與Standardi[6]研究的獼猴桃繼代次數(shù)越多，芽增殖率越高的結(jié)果一致。

馬歡[7]認(rèn)為在1/2MS+IBA 1.0mg/L培養(yǎng)基上獼猴桃生根效果較好，低濃度的IBA不適宜獼猴桃生根。本研究結(jié)果表明在1/2MS+NAA 0.1mg/L+IBA 0.1mg/L培養(yǎng)基上，徐香獼猴桃生根效果很好，生根率達(dá)100%，低濃度的NAA和IBA搭配也能有效的促進(jìn)獼猴桃生根。

移栽時采用蛭石+草炭土作為基質(zhì)成活率最高，由此可見獼猴桃移栽對基質(zhì)的保水性及透水性要求均較高，透氣性差容易爛根，保水性差小苗容易萎蔫。