顏麗華，章婧文，王偉鎮(zhèn)，劉 志，劉 娟，王寶平，紀(jì)麗景，李 璇，馬煥容

南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院超聲醫(yī)學(xué)科，廣東 廣州 510515

乳腺癌是全球女性最常見的癌癥之一，在我國的發(fā)病率逐年上升，且發(fā)病年齡逐步年輕化，死亡率達(dá)38%[1-2]。浸潤性導(dǎo)管癌是最常見的乳腺癌病理類型，血管生成是腫瘤發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)移的關(guān)鍵因素，靶向血管生成的治療亦是乳腺浸潤性導(dǎo)管癌治療的重要方案[3]?？捎糜谌橄侔┲委煹目寡苌伤幬镉校喊邢蜓軆?nèi)皮生長因子A（VEGFA）的貝伐單抗、靶向血管內(nèi)皮生長因子受體（VEGFR）的雷莫盧單抗、靶向血小板源性生長因子受體（PDGFR）的舒尼替尼等。CD34是一種跨膜糖蛋白，被認(rèn)為是造血干細(xì)胞的標(biāo)志物，亦表達(dá)于血管內(nèi)皮祖細(xì)胞，可用于評(píng)估多種腫瘤的血管生成[4-7]。目前，乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的CD34與血管生成因子如VEGFA、VEGFR、PDGFR的關(guān)系尚不清楚，本研究擬利用腫瘤基因圖譜（TCGA）數(shù)據(jù)庫分析其關(guān)系以初步了解CD34的表達(dá)水平能否在一定程度上反映血管生成因子的表達(dá)。

超聲是篩查和診斷乳腺癌的重要影像學(xué)方法之一。已有研究報(bào)道乳腺癌的某些超聲征象如腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等與CD34表達(dá)有關(guān)[8-9]，但乳腺癌有多種病理類型，浸潤性導(dǎo)管癌作為最常見的類型，其超聲征象與CD34表達(dá)關(guān)系如何尚不完全清楚。本研究旨在了解乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的CD34與血管生成因子的關(guān)系，并進(jìn)一步探討其超聲征象與CD34表達(dá)的關(guān)系，為臨床醫(yī)師結(jié)合超聲征象與CD34進(jìn)行抗血管生成因子治療用藥的選擇提供基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。

1 資料與方法

1.1 研究對(duì)象

收集2018年12月～2019年2月在我院接受乳腺癌手術(shù)的患者的臨床資料（術(shù)前超聲診斷及術(shù)后病理學(xué)診斷資料）進(jìn)行回顧性分析。納入標(biāo)準(zhǔn)：女性；單側(cè)乳腺單發(fā)病灶，手術(shù)前均未接受過任何抗癌治療；病理確診為乳腺浸潤性導(dǎo)管癌。排除標(biāo)準(zhǔn)：雙側(cè)乳腺病灶或單側(cè)多發(fā)病灶；手術(shù)前接受過抗癌治療；病理確診為非乳腺浸潤性導(dǎo)管癌。最終共獲得100例研究對(duì)象，年齡49.6±9.8歲，其中28～50歲的患者有54名，51～69歲的患者有46名。本研究已獲得南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)及患者的知情同意。

1.2 檢查儀器與方法

使用PHILIPS-IU22彩色多普勒超聲診斷儀，12～5 MHz線陣高頻探頭。乳腺結(jié)節(jié)的超聲征象按照2013年乳腺影像報(bào)告和數(shù)據(jù)系統(tǒng)進(jìn)行描述，由2名資深超聲科醫(yī)師對(duì)乳腺超聲檢查結(jié)果進(jìn)行評(píng)估，并登記結(jié)節(jié)的征象。收集完整資料后進(jìn)行回顧性分析。

1.3 免疫組化檢測與評(píng)分

使用免疫組化方法檢測乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中CD34的表達(dá)。根據(jù)微血管計(jì)數(shù)法，細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞膜上帶有棕黃色染色的血管內(nèi)皮細(xì)胞被視為陽性。在100×低倍鏡下選擇3個(gè)最密集著色的視覺視野，并在400×高倍鏡下進(jìn)行微血管計(jì)數(shù)，并根據(jù)平均值表達(dá)水平將組織分成高表達(dá)組和低表達(dá)組[10]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 23.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，并使用GraphPad Prism 5.0和Photoshop CS5軟件進(jìn)行圖像繪制和處理。乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中CD34與血管生成相關(guān)因子表達(dá)的相關(guān)性采用Pearson相關(guān)性檢驗(yàn)。乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的超聲征象與CD34表達(dá)的關(guān)系采用卡方檢驗(yàn)。P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 腫瘤基因圖譜數(shù)據(jù)庫分析乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中CD34與血管生成相關(guān)因子表達(dá)的相關(guān)性

對(duì)TCGA數(shù)據(jù)庫中乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織的CD34與血管生成相關(guān)因子的編碼基因VEGFA、VEGFR、PDGFR的mRNA表達(dá)水平進(jìn)行分析，通過相關(guān)性檢驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，CD34與VEGFA在mRNA表達(dá)水平不存在明顯相關(guān)關(guān)系（r=-0.10，P=0.0014，圖1A），與VEGFR、PDGFR在mRNA表達(dá)水平顯著正相關(guān)（r=0.73，P＜0.0001；r=0.66，P＜0.0001，圖1B、C）。

圖1 TCGA數(shù)據(jù)庫分析乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織中CD34與VEGFA（A）、VEGFR（B）、PDGFR（C）表達(dá)的相關(guān)性（n=1105）

2.2 乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的超聲征象與CD34表達(dá)的關(guān)系

乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的超聲征象包括病灶的形態(tài)是否規(guī)則、邊緣是否光整、邊緣是否毛刺成角、內(nèi)部回聲、后方回聲改變、有無鈣化、Adler血流顯像分級(jí)及腋窩是否探及異常淋巴結(jié)。超聲征象與癌組織中CD34表達(dá)的相關(guān)性結(jié)果顯示，病灶的血流分級(jí)及腋窩淋巴結(jié)與CD34表達(dá)的相關(guān)性有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，表1），其余超聲征象與CD34表達(dá)不相關(guān)（P＞0.05）。病灶血流顯像分級(jí)為Ⅱ～Ⅲ級(jí)者，CD34高表達(dá)占53.4%，明顯高于血流顯像分級(jí)為0～Ⅰ級(jí)者（28.6%）；腋窩異常淋巴結(jié)陽性者，CD34高表達(dá)占59.2%，明顯高于腋窩異常淋巴結(jié)陰性者（27.5%，圖2）。

表1 乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的超聲征象與CD34表達(dá)的相關(guān)性[n（%）]

圖2 乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的超聲二維、彩色多普勒、腋窩淋巴結(jié)二維、癌組織CD34免疫組化（400×）的病例圖像

3 討論

乳腺癌與多種腫瘤具有相似的病理過程，導(dǎo)致治療效果欠佳和預(yù)后不良[11]。早期診斷、早期治療是改善乳腺癌患者預(yù)后的重要策略。血管生成是腫瘤生長所必需的現(xiàn)象，血管生成因子在腫瘤生長、侵襲、轉(zhuǎn)移中發(fā)揮著重要作用[12-13]。腫瘤組織的微血管密度被證明是一個(gè)重要的預(yù)后因素，一般而言，預(yù)后較差的惡性腫瘤的微血管密度高于預(yù)后較好的腫瘤[14-15]。CD34是高度糖基化的跨膜蛋白分子，在血管內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)具有特異性，可反映腫瘤組織的微血管密度，CD34的表達(dá)對(duì)乳腺浸潤性導(dǎo)管癌的預(yù)后具有重要預(yù)測價(jià)值[16]。研究表明，乳腺癌患者腫瘤組織中的微血管密度增加與轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)和/或生存率降低之間存顯著相關(guān)性[17-18]，靶向血管生成治療如VEGFR、PDGFR抑制劑是乳腺癌治療的重要方案之一。本研究通過分析TCGA數(shù)據(jù)庫發(fā)現(xiàn)，乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織的CD34與VEGFR、PDGFR在mRNA表達(dá)水平存在顯著正相關(guān)關(guān)系。目前尚未有相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道CD34與VEGFR、PDGFR之間的表達(dá)相關(guān)性，該結(jié)果提示乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織的微血管密度一定程度上可反映VEGFR、PDGFR的表達(dá)水平。

腫瘤的形態(tài)學(xué)改變可通過超聲征象反映出來，超聲征象與相關(guān)生物指標(biāo)之間可能存在一定聯(lián)系[19]。研究表明，血管生成以及血流模式的變化通常與乳腺性腫瘤的變化有關(guān)，超聲可提供獨(dú)立的信息以改善診斷[20-21]。本研究發(fā)現(xiàn)在乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中，超聲征象中血流分級(jí)及腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與組織微血管密度顯著相關(guān)，超聲成像下血流信號(hào)較豐富及腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽性者，其癌組織中CD34的表達(dá)水平較高。已有研究表明，乳腺癌的CD34表達(dá)水平與超聲征象中血流分級(jí)及腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)[8-9,22]。本研究在此基礎(chǔ)上，進(jìn)一步在最常見的病理類型乳腺浸潤性導(dǎo)管癌中驗(yàn)證了該結(jié)果。

綜上所述，本研究率先發(fā)現(xiàn)乳腺浸潤性導(dǎo)管癌組織的CD34表達(dá)與VEGFR、PDGFR表達(dá)正相關(guān)；超聲成像下其血流分級(jí)及腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與CD34表達(dá)呈顯著正相關(guān)。該研究為臨床醫(yī)師結(jié)合CD34與超聲征象進(jìn)行抗血管生成因子治療用藥的選擇提供基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。