亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        茯磚茶中冠突散囊菌的分離鑒定及其在液態(tài)發(fā)酵中的應(yīng)用

        2019-07-26 08:24:58張宇翔任婷婷趙倩囡岳田利袁亞宏
        食品科學(xué) 2019年14期
        關(guān)鍵詞:磚茶茶多酚發(fā)酵液

        王 昕,張宇翔,任婷婷,趙倩囡,岳田利*,袁亞宏*

        (西北農(nóng)林科技大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,陜西 楊凌 712100)

        茯磚茶屬于一種發(fā)酵黑茶,至今已有幾百年的歷史,產(chǎn)銷量一直占據(jù)黑茶市場的首位。冠突散囊菌(Eurotium cristatum)是茯磚茶在特定溫度、濕度條件下,通過“發(fā)花”工藝長成的自然益生菌體,俗稱“金花”,是茯磚茶發(fā)酵過程中的優(yōu)勢(shì)菌之一[1-3]。胡治遠(yuǎn)等[4]研究報(bào)道,“金花”菌是茯磚茶加工過程中發(fā)花階段的主導(dǎo)微生物,對(duì)茯磚茶醇香、濃厚的風(fēng)味及健康功效有重要貢獻(xiàn);胡謝馨等[5]研究表明“金花”菌對(duì)野葛、粉葛、葛渣固體發(fā)酵后總黃酮和葛根素含量的增加有很大貢獻(xiàn)。冠突散囊菌發(fā)酵[6]可使茶的成分發(fā)生很大變化[7-11],產(chǎn)生大量氧化產(chǎn)物和水解產(chǎn)物以及有機(jī)酸等活性物質(zhì),使發(fā)酵茶具有降脂[12-15]減肥、改善人體消化道功能[16]、治療心血管疾病[17-18]等保健功效[19-21]。有研究報(bào)道,一種從海藻中提取分離的內(nèi)生真菌冠突散囊菌可產(chǎn)生蒽醌類化合物,從而使其具有止血、抗菌、瀉下、利尿的作用[22];Salazar等[23]研究表明冠突散囊菌的次級(jí)代謝產(chǎn)物Compound 1具有抑制細(xì)胞生長的作用,在抗癌、抗腫瘤的應(yīng)用上有很重要的參考價(jià)值;李佳蓮等[24]研究發(fā)現(xiàn)冠突散囊菌發(fā)酵液對(duì)金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌等有較強(qiáng)的抑制作用。

        以往對(duì)冠突散囊菌的研究主要集中在茶葉固態(tài)發(fā)酵,發(fā)酵周期長、工藝難控制且原料要求高(多以黑毛茶為原料,一級(jí)鮮葉要求一芽二三葉,二級(jí)一芽三四葉,三級(jí)一芽四五葉,四級(jí)一芽五六葉或開面葉),而對(duì)冠突散囊菌的液態(tài)發(fā)酵研究較少且鮮見關(guān)于茶水浸提液滅菌處理影響主要理化指標(biāo)的研究,為進(jìn)一步縮短發(fā)酵周期[25],同時(shí)解決由于夏秋茶滋味苦澀品質(zhì)差不能被有效開發(fā)利用的問題[26],本實(shí)驗(yàn)著重研究冠突散囊菌的分離鑒定、生長特性,以夏秋茶(平利山茶)浸提液為原料,分離得到的冠突散囊菌作為發(fā)酵菌種,進(jìn)行液態(tài)發(fā)酵制備富含冠突散囊菌菌絲體的發(fā)酵黑茶產(chǎn)品。為進(jìn)一步揭示冠突散囊菌在液態(tài)發(fā)酵中的調(diào)控機(jī)制提供理論支持,為冠突散囊菌液態(tài)發(fā)酵工業(yè)化生產(chǎn)提供可行性途徑。

        1 材料與方法

        1.1 材料與試劑

        手筑茯磚茶1 000 g,購自湖南益陽捷飲茶業(yè)有限公司;平利山茶(夏秋茶),2017年10月采自陜西省安康市平利縣茶園。

        沒食子酸(分析純,純度98.5%)、谷氨酸(純度>99%) 上海源葉生物科技有限公司;一水合茚三酮(純度>97%) 北京奧科生物科技有限公司;福林-酚試劑(生化試劑,濃度1 mol/L) 上海荔達(dá)生物科技有限公司;Biospin真菌基因組DNA提取試劑盒 北京奧科生物科技有限公司。

        1.2 儀器與設(shè)備

        ZXSD-A1160恒溫培養(yǎng)箱、ZWY-240恒溫培養(yǎng)振蕩器上海智誠分析儀器制造有限公司;SHB-Ш循環(huán)水式多用真空泵 鄭州長城科工貿(mào)有限公司;HC-3018R高速冷凍離心機(jī) 安徽中科中佳科學(xué)儀器有限公司;CFX CONNCT聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(polymerase chain reaction,PCR)儀、Gel Doc XR+凝膠成像儀 美國Bio-Rad公司;JY600C電泳儀 北京市六一儀器廠;DGX-9143BC電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 上海?,攲?shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;YT-CJ-2ND超凈工作臺(tái) 北京亞泰科隆儀器技術(shù)有限公司;S-3400N掃描電子顯微鏡 日本日立公司;Ni-U光學(xué)顯微鏡 日本尼康公司。

        1.3 方法

        1.3.1 培養(yǎng)基制作與茶樣制備

        馬鈴薯葡萄糖瓊脂(potato dextrose agar,PDA)培養(yǎng)基:馬鈴薯200 g,葡萄糖20 g,瓊脂15~20 g,蒸餾水定容至1 000 mL。稱取去皮馬鈴薯200 g,切片加1 000 mL蒸餾水,煮沸10~20 min,用紗布過濾,補(bǔ)加蒸餾水至1 000 mL,121 ℃滅菌20 min。馬鈴薯葡萄糖肉湯(potato dextrose broth,PDB)培養(yǎng)基:馬鈴薯200 g,葡萄糖20 g,蒸餾水定容至1 000 mL,pH值自然[27]。

        茶葉制備:將鮮葉經(jīng)滾筒烘干制成干茶密封保存?zhèn)溆?,?GB/T 8302—2013《茶 取樣》[28]的規(guī)定取樣,并按GB/T 8303—2013《茶 磨碎試樣的制備及其干物質(zhì)含量測定》[29]的規(guī)定,制備試樣。

        1.3.2 冠突散囊菌的分離純化

        取樣器具用75%乙醇溶液消毒,將實(shí)驗(yàn)手筑茯磚茶于超凈工作臺(tái)操作。五點(diǎn)取樣法將每部分所取樣品混勻,然后稱取10 g茶樣于盛有250 mL 0.85%無菌生理鹽水的500 mL三角瓶中。28 ℃搖床洗脫2 h,洗脫茶樣中的霉菌孢子。將洗脫得到的茶樣原液梯度稀釋至10-1、10-2、10-3、10-4、10-5,取各梯度洗脫液100~200 μL均勻涂布于PDA培養(yǎng)基上,每個(gè)梯度3 個(gè)平行。28 ℃恒溫培養(yǎng)數(shù)天至長出菌落,挑取形態(tài)不同的單菌落于PDA培養(yǎng)基上劃線純化多次,直至得到單菌落,進(jìn)行形態(tài)觀察和斜面保存。

        1.3.3 分子生物學(xué)鑒定

        對(duì)PDA培養(yǎng)得到的單菌落,采用Biospin Fungus Genomic DNA Extraction Kit提取基因組DNA。采用真菌通用引物ITS1(5’-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3’)、ITS4(5’-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’)對(duì)所選菌株進(jìn)行PCR擴(kuò)增。PCR擴(kuò)增體系:20 μL的總反應(yīng)體系中包含上下游引物各1 μL(5.94 nmol,稀釋100 倍),2 μL模板DNA,10 μL premix Taq,加無菌水至20 μL。擴(kuò)增條件:95 ℃預(yù)變性5 min,95 ℃變性30 s,55 ℃退火30 s,72 ℃延伸1 min,34 次循環(huán),最后72 ℃延伸10 min。PCR產(chǎn)物經(jīng)1.5%的瓊脂糖凝膠電泳檢測,紫外成像系統(tǒng)拍照,將單一透亮條帶的PCR產(chǎn)物送生工生物工程(上海)股份有限公司測序。將測序得到的序列和GenBank中序列進(jìn)行比對(duì),確定相似度高的序列,得到目標(biāo)菌株冠突散囊菌。采用Cluxtal-X對(duì)基因序列進(jìn)行比對(duì),并用MEGA6.0對(duì)相似序列構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹,確定其系統(tǒng)發(fā)育學(xué)地位。

        1.3.4 生長特性分析

        將斜面保存的冠突散囊菌于PDA培養(yǎng)基上活化1~2 次,用接種環(huán)挑取適量黃色閉囊殼于無菌生理鹽水,振搖均勻,血球計(jì)數(shù)使得孢子懸浮液濃度為107CFU/mL。以2%接種量接種孢子懸浮液于PDB培養(yǎng)基中,28 ℃、120 r/min搖床培養(yǎng)8 d。每隔12 h取出三角瓶,將培養(yǎng)液過濾于濾紙上,100~105 ℃烘至質(zhì)量恒定。以時(shí)間為橫坐標(biāo),菌體干質(zhì)量為縱坐標(biāo),繪制生長曲線。

        1.3.5 形態(tài)學(xué)特征觀察

        取斜面保存的冠突散囊菌劃線接種于PDA培養(yǎng)基,于28 ℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng),并進(jìn)行菌落特征、顯微形態(tài)及掃描電鏡的形態(tài)學(xué)研究。

        1.3.6 山茶浸提液制備

        參考GB/T 8305—2013《茶 水浸出物測定》[30]和文獻(xiàn)[31],平利山茶與蒸餾水比例為1∶25(g/mL),沸水浴浸提45 min,待浸提液冷卻后離心取上清液,得到山茶浸提液。

        1.3.7 孢子懸浮液制備

        將斜面保存的HNYYWX.13冠突散囊菌于PDA培養(yǎng)基上活化1~2 次,用接種環(huán)挑取適量黃色閉囊殼于無菌生理鹽水,振搖均勻,血球計(jì)數(shù)使得孢子懸浮液濃度為107CFU/mL,即得液態(tài)發(fā)酵所用孢子懸浮液。

        1.3.8 冠突散囊菌的液態(tài)發(fā)酵

        以2%接種量將冠突散囊菌的孢子懸浮液分別接種到100 ℃、15 min滅菌的山茶浸提液、不滅菌的山茶浸提液(均不添加蔗糖)和添加4%蔗糖的山茶浸提液、不添加4%蔗糖的山茶浸提液(均不滅菌)中,28 ℃、120 r/min搖床發(fā)酵。分別于0、12、24、36、48、60、72、84、96、108、120、132、144、156、168、180 h測定發(fā)酵液的茶多酚總量、氨基酸總量,探究滅菌處理及碳源對(duì)冠突散囊菌液態(tài)發(fā)酵的影響。

        1.3.9 指標(biāo)測定

        參考GB/T 8313—2008《茶葉中茶多酚和兒茶素類含量的檢測方法》[32]和GB/T 8314—2013《茶 游離氨基酸總量的測定》[33]的方法分別測定發(fā)酵液中的茶多酚總量和氨基酸總量,得到標(biāo)準(zhǔn)曲線,茶多酚總量標(biāo)準(zhǔn)曲線為:Y=0.008 7+0.012 31X,R2=0.999 06;氨基酸總量標(biāo)準(zhǔn)曲線為:Y=0.875 78X-7.241 38×10-4,R2=0.998 17。

        1.4 數(shù)據(jù)分析

        通過OriginPro 9.0作圖,SPSS 20.0作統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 分子生物學(xué)鑒定

        2.1.1 瓊脂糖凝膠電泳

        圖1 茯磚茶部分優(yōu)勢(shì)菌種的PCR擴(kuò)增產(chǎn)物電泳分析圖Fig. 1 PCR amplification of fungal ITS from Fuzhuan tea

        茯磚茶中所分離出的部分菌種的ITS序列擴(kuò)增產(chǎn)物電泳分析見圖1。3~13號(hào)泳道的條帶分子質(zhì)量約處于500~750 bp,且均呈現(xiàn)單一、明亮,表明此11 株菌的DNA純度較高、無污染,可送去基因測序進(jìn)一步鑒定。

        2.1.2 基因測序

        表1 湖南益陽茯磚茶測序結(jié)果Table 1 Results of sequencing of 33 strains in Fuzhuan tea from Yiyang, Hunan province

        從表1可以看出,在湖南益陽茯磚茶中所分離的33 株菌中,編號(hào)分別為HNYYWX.1、HNYYWX.3、HNYYWX.5、HNYYWX.10、HNYYWX.17、HNYYWX.21、HNYYWX.22、HNYYWX.28的8 株菌經(jīng)過在GenBank中BLAST比對(duì)后,與數(shù)據(jù)庫中冠突散囊菌的模式菌株(JQ743649.1)相似度均達(dá)到99%,編號(hào)為HNYYWX.13的菌株相似度為100%,因此選擇HNYYWX.13菌株進(jìn)行冠突散囊菌的液態(tài)發(fā)酵研究。

        2.1.3 系統(tǒng)發(fā)育樹分析

        從GenBank下載冠突散囊菌模式菌株或公認(rèn)菌株的相應(yīng)基因序列,以JQ743649.1(模式菌株)為參比,用MEGA 6.0軟件采用Neighbor-Joining Tree法構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹。如圖2所示,編號(hào)為HNYYWX.1、HNYYWX.3等21 株菌與模式菌株JQ743649.1優(yōu)先聚集到一起,系統(tǒng)發(fā)育學(xué)分析表明其與模式菌株的親緣關(guān)系非常接近;在此親緣關(guān)系下,菌株HNYYWX.7和HNYYWX.27、HNYYWX.10和HNYYWX.18差異更小。系統(tǒng)發(fā)育學(xué)地位分析為研究相似菌株的差異性提供了很好的參考和指導(dǎo)。

        圖2 茯磚茶分離株ITS序列系統(tǒng)發(fā)育樹Fig. 2 NJ phylogenetic tree based on ITS sequences of fungi in Fuzhuan tea

        2.2 冠突散囊菌生長曲線

        如圖3所示,培養(yǎng)0~12 h時(shí),由于PDB培養(yǎng)基中營養(yǎng)豐富,冠突散囊菌很快適應(yīng)生長環(huán)境,大量吸收培養(yǎng)基中的碳源等營養(yǎng)物質(zhì),促使無性孢子迅速萌發(fā)生長,使得前12 h菌絲體干質(zhì)量增加近0.015 g/mL。隨后繼續(xù)培養(yǎng)12~132 h,期間菌體生長明顯趨于平穩(wěn),呈緩慢增加的趨勢(shì)。完全適應(yīng)PDB生長環(huán)境的冠突散囊菌,經(jīng)過前12 h菌體的大量繁殖,冠突散囊菌菌體干質(zhì)量大大增加,使得PDB培養(yǎng)體系內(nèi)菌體相對(duì)密度大大增加,菌體生長空間相對(duì)變小。培養(yǎng)到132~156 h時(shí)可見菌體生長速率大幅提升,并且156 h菌絲體干質(zhì)量達(dá)到最大為0.058 g/mL,可知此階段為冠突散囊菌活力最旺盛的時(shí)期。到168 h時(shí),菌絲體干質(zhì)量略微減少(0.002 g/mL),可能是由于菌絲體自溶造成[35]。

        圖3 HNYYWX.13冠突散囊菌培養(yǎng)過程中菌絲體干質(zhì)量變化Fig. 3 Change in dry biomass yield of E. cristatum HNYYWX.13 during incubation

        2.3 冠突散囊菌形態(tài)特征

        圖4 HNYYWX.13冠突散囊菌的形態(tài)特征Fig. 4 Morphological characteristics of E. cristatum HNYYWX.13

        將分離得到的冠突散囊菌接種到PDA瓊脂培養(yǎng)基上28 ℃恒溫培養(yǎng),約48 h冠突散囊菌開始生長,首先長出白色菌絲體向外延伸,菌落中心逐漸由白色變?yōu)闇\黃色,圖4A為冠突散囊菌生長2 d的形態(tài)。圖4B中,黃色閉囊殼產(chǎn)生在整個(gè)菌落區(qū)域內(nèi),菌落直徑達(dá)到7~10 mm,呈淡黃色,第5天時(shí)菌落直徑18~20 mm,菌落邊緣呈淡黃色,中心凸起,越靠近菌落中心顏色依次變深呈黃色、深黃色,菌落中心顏色深至橄欖褐色或深褐色,并且菌落中心有少許黃色透明小液珠滲出。菌落生長7 d時(shí),直徑達(dá)到25~30 mm,菌落背部有大量色素滲出,擴(kuò)散進(jìn)入培養(yǎng)基,使培養(yǎng)基呈現(xiàn)深褐色。約12 d,能夠很明顯觀察到菌落中心有干澀、凸起褶皺,菌落直徑達(dá)40~45 mm。圖4C為冠突散囊菌生長19 d形態(tài),此時(shí)菌落直徑達(dá)50~55 mm,基本不再變化,顏色全部呈現(xiàn)褐色,分泌出的色素使整個(gè)培養(yǎng)基呈黑褐色。

        圖4D中孢子梗簇?fù)?,菌絲體交錯(cuò)(紅色橢圓)。圖4E觀察到單個(gè)子囊果為橢球狀(紅色方框)及向外發(fā)散的菌絲體(紅色橢圓)。

        通過電鏡觀察,冠突散囊菌能產(chǎn)生大量閉囊殼(圖4F),纏繞在菌絲中,呈球形或近球形,直徑為750~950 μm。子囊球形或近球形,由擬薄壁組織包裹子囊孢子,隨著子囊孢子的發(fā)育,擬薄壁組織逐漸溶解漏出球狀體的子囊孢子,直徑約26~32 μm,圖4G為大量散落的子囊孢子。隨著子囊孢子的進(jìn)一步發(fā)育,如圖4H、I所示,整個(gè)子囊孢子呈“雙花”狀,子囊孢子呈雙凸透鏡形,“赤道”(4I圖中紅色標(biāo)記)部分具有兩條明顯的縱向雞冠狀“脊”,較薄,反卷,赤道溝較深。

        2.4 冠突散囊菌的液態(tài)發(fā)酵

        2.4.1 滅菌處理對(duì)發(fā)酵過程中主要理化指標(biāo)的影響

        圖5 發(fā)酵過程中茶多酚總量的變化Fig. 5 Changes in tea polyphenol content during liquid-state fermentation

        茶多酚是茶葉發(fā)酵過程中菌體生長的主要碳源,通過冠突散囊菌的代謝調(diào)控,可將茶葉中的茶多酚轉(zhuǎn)化為小分子的功能性成分[11,34],如兒茶素、表兒茶素、表兒茶素沒食子酸酯、茶黃素[35-36]、茯茶素等,使茶多酚總量減少,由圖5可知,接種冠突散囊菌的發(fā)酵液中,茶多酚總量隨著發(fā)酵時(shí)間的延長逐漸減少,對(duì)于浸提液直接發(fā)酵過程,茶多酚總量由15.09%減少到10.32%;浸提液滅菌后發(fā)酵,茶多酚總量由14.32%減少到11.64%。前者發(fā)酵過程,冠突散囊菌利用了更多的茶多酚,大大促進(jìn)了新的代謝產(chǎn)物的生成。正如文獻(xiàn)[37]通過冠突散囊菌調(diào)控,經(jīng)過氧化、縮合等作用生成了更多種類的功能產(chǎn)物,如:茯茶素A和茯茶素B[38]、異戊二烯衍生物[39]、三萜烯類化合物[40]、7 種B環(huán)裂解兒茶素(黃烷-3-醇)衍生物[8]以及其他未解析清楚的未知化合物[41];許杰等[42]研究表明冠突散囊菌發(fā)酵過程中,表兒茶素、表兒茶素沒食子酸酯、表沒食子兒茶素沒食子酸酯氧化縮合形成茶黃素,茶黃素進(jìn)一步氧化、與氨基酸、蛋白質(zhì)等縮合成形成茶紅素等功能性成分。配對(duì)t檢驗(yàn)分析表明,滅菌后發(fā)酵與直接發(fā)酵,茶多酚總量存在極顯著差異(P=0.002<0.01)。此外,滅菌處理前,發(fā)酵液中茶多酚總量為15.09%,而滅菌處理后茶多酚總量減少為14.32%,說明滅菌處理會(huì)破壞大量的茶多酚,對(duì)茶葉自身營養(yǎng)有很大損失;發(fā)酵過程中,浸提液直接發(fā)酵轉(zhuǎn)化近5%的茶多酚,而滅菌處理后發(fā)酵僅轉(zhuǎn)化約3%的茶多酚,表明浸提液直接接種冠突散囊菌發(fā)酵,可產(chǎn)生更多具有生物活性的小分子物質(zhì),更有利于豐富發(fā)酵茶湯的品質(zhì)。

        圖6 發(fā)酵過程中氨基酸總量的變化Fig. 6 Changes in amino acid content during liquid-state fermentation

        由圖6可知,接種冠突散囊菌發(fā)酵后,發(fā)酵液中氨基酸總量呈上升趨勢(shì),說明冠突散囊菌的代謝產(chǎn)生了大量氨基酸。研究[25]報(bào)道,接種冠突散囊菌發(fā)酵后,發(fā)酵液中會(huì)產(chǎn)生多種豐富的氨基酸,如人體必需氨基酸:賴氨酸、色氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、纈氨酸、蘇氨酸、亮氨酸和異亮氨酸等。發(fā)酵前約48 h,冠突散囊菌逐漸適應(yīng)生長環(huán)境。隨后,菌體生長比較穩(wěn)定,開始代謝產(chǎn)生各種氨基酸。顯然,浸提液直接發(fā)酵所得發(fā)酵液中氨基酸總量較滅菌處理更高。配對(duì)t檢驗(yàn)分析表明,滅菌后發(fā)酵與直接發(fā)酵,氨基酸總量存在極顯著差異(P=0.000<0.01)。因此不滅菌處理比傳統(tǒng)滅菌處理發(fā)酵效果更好。

        2.4.2 碳源對(duì)發(fā)酵過程中主要理化指標(biāo)的影響

        由圖7、8可知,兩種處理方式下,發(fā)酵液中茶多酚總量降低,氨基酸總量升高,其中發(fā)酵前期氨基酸總量升高可能是由于冠突散囊菌的調(diào)控代謝生成,發(fā)酵后期可能由于冠突散囊菌菌絲體自溶釋放氨基酸到發(fā)酵液中[16]。添加碳源后發(fā)酵,48~108 h茶多酚減少速率明顯快于不添加碳源,正如文獻(xiàn)報(bào)道,蔗糖誘導(dǎo)冠突散囊菌“發(fā)花”[14],其生長繁殖速度大大加快,利用發(fā)酵液中大量的茶多酚,將其轉(zhuǎn)化為小分子功能性成分,大大發(fā)揮冠突散囊菌代謝產(chǎn)物的生物活性功能(圖7),所以添加碳源有利于茶多酚轉(zhuǎn)化;如圖8所示,兩種處理方式下,發(fā)酵過程中氨基酸總量均呈上升趨勢(shì)且氨基酸生成量基本一樣,所以碳源對(duì)冠突散囊菌發(fā)酵過程中氨基酸總量影響不大。配對(duì)t檢驗(yàn)分析表明,添加碳源與未添加碳源發(fā)酵過程中,茶多酚總量和氨基酸總量均存在極顯著差異(P=0.000<0.01)。綜合兩種指標(biāo),添加碳源更有利于冠突散囊菌的液態(tài)發(fā)酵。

        圖7 碳源作用下發(fā)酵過程中茶多酚總量的變化Fig. 7 Changes in tea polyphenol content during fermentation with and without addition of carbon source

        圖8 碳源作用下發(fā)酵液中氨基酸總量的變化Fig. 8 Changes in amino acids during fermentation with and without addition of carbon source

        3 結(jié) 論

        以湖南益陽手筑茯磚茶為研究對(duì)象,通過分離純化、PCR、基因測序的手段鑒定得到8 株序列相似度為99%的冠突散囊菌,1 株編號(hào)為HNYYWX.13序列相似度為100%的冠突散囊菌;對(duì)菌株HNYYWX.13進(jìn)行菌落形態(tài)、顯微形態(tài)及掃描電子顯微鏡形態(tài)觀察,并探究得到其生長曲線,培養(yǎng)到132~156 h時(shí)菌體生長速率大幅提升,156 h菌絲體干質(zhì)量達(dá)到最大為0.058 g/mL,此階段為冠突散囊菌活力最旺盛的時(shí)期;選取菌株HNYYWX.13制備孢子懸浮液接種于平利山茶(夏秋茶)浸提液中液態(tài)發(fā)酵,研究了滅菌處理、添加碳源對(duì)冠突散囊菌發(fā)酵下茶多酚總量及氨基酸總量的影響,得出結(jié)論:添加碳源、不進(jìn)行滅菌處理更有利于冠突散囊菌的液態(tài)發(fā)酵。

        本研究探索了冠突散囊菌在平利山茶液態(tài)發(fā)酵中的應(yīng)用潛力,避免其固態(tài)發(fā)酵過程中條件不易控制、不宜規(guī)?;a(chǎn)的缺陷,利用我國浪費(fèi)最嚴(yán)重的夏秋茶,大大提高了茶資源利用率,并且提出傳統(tǒng)茶水浸提液滅菌后發(fā)酵的誤區(qū),指出不進(jìn)行滅菌處理更有利于冠突散囊菌的液態(tài)發(fā)酵,為其工業(yè)化生產(chǎn)及茶產(chǎn)品的深加工技術(shù)提供了可行性路徑。但是關(guān)于冠突散囊菌在液態(tài)發(fā)酵中代謝機(jī)制還需進(jìn)一步研究,這對(duì)于深入揭示冠突散囊菌多種保健功效具有重要意義。

        猜你喜歡
        磚茶茶多酚發(fā)酵液
        茶多酚的抗氧化性及其在畜牧生產(chǎn)中的應(yīng)用
        湖南飼料(2021年3期)2021-07-28 07:06:06
        腸道微生物與茶及茶多酚的相互作用在調(diào)節(jié)肥胖及并發(fā)癥中的作用
        連翹內(nèi)生真菌的分離鑒定及其發(fā)酵液抑菌活性和HPLC測定
        桑黃纖孔菌發(fā)酵液化學(xué)成分的研究
        中成藥(2018年1期)2018-02-02 07:20:03
        涇陽茯磚茶
        磚茶型氟鋁聯(lián)合應(yīng)用對(duì)大鼠牙齒和骨代謝生化指標(biāo)的影響
        茶多酚的提取
        茯磚茶中優(yōu)勢(shì)微生物在不同培養(yǎng)基的差異性比較
        中國釀造(2014年9期)2014-03-11 20:21:07
        陳年茯磚茶品質(zhì)分析
        茶葉通訊(2014年4期)2014-02-27 07:55:52
        HPLC與LC-MS/MS測定蛹蟲草發(fā)酵液中蟲草素的方法比較
        亚洲大胆视频在线观看| 国产综合久久久久| 亚洲不卡av不卡一区二区| 91网红福利精品区一区二| 国产精品视频白浆免费看| 妃光莉中文字幕一区二区| 无码福利写真片视频在线播放| av中文字幕综合在线| 日韩精品国产一区在线| 日本久久精品中文字幕| 韩日午夜在线资源一区二区| 日本一区不卡在线| 亚洲av伊人久久综合性色| 人妻少妇猛烈井进入中文字幕 | 久久久久99精品成人片试看| 亚洲精品美女久久久久99| 亚洲三级中文字幕乱码| 国产亚洲成性色av人片在线观| 精品无码人妻一区二区三区不卡| 久久青草免费视频| 国产自拍伦理在线观看| 开心五月骚婷婷综合网| 精品国产免费一区二区三区 | 精品一区二区三区不老少妇| 娇小女人被黑人插免费视频| 亚洲欧美日韩中文字幕一区二区三区| 亚洲av有码在线天堂| 亚洲一区二区免费日韩| 亚洲精品一区二区高清| 粗大猛烈进出高潮视频| 任你躁国产自任一区二区三区| 国产精品亚洲av一区二区三区| 丰满少妇高潮惨叫久久久| 久久精品一区二区三区av| 人妻少妇精品无码系列| 91九色中文视频在线观看| 久久精品国产视频在热| 国产欧美日韩综合一区二区三区| 亚洲97成人精品久久久| 成人免费无遮挡在线播放| 亚洲一区欧美二区|