郭 苗 李王麗

甲狀腺乳頭狀癌(papillary thyroid carcinoma，PTC)是甲狀腺癌最常見(jiàn)的組織學(xué)類(lèi)型，占比在70%以上[1-2]。甲狀腺微小乳頭狀癌(papillary microcarcinoma，PMC)為直徑≤1 cm的甲狀腺乳頭狀癌，在臨床上具有惡性程度低、預(yù)后良好等特點(diǎn)，可長(zhǎng)期處于亞臨床狀態(tài)，甚至終身無(wú)癥狀[3-4]，早期診斷可減少不必要的手術(shù)創(chuàng)傷及術(shù)后并發(fā)癥，改善患者的預(yù)后[5-6]。PMC的病理組織學(xué)多呈濾泡樣結(jié)構(gòu)，缺乏邊界，常無(wú)包膜；不過(guò)甲狀腺乳頭狀增生也常常會(huì)表現(xiàn)為有乳頭結(jié)構(gòu)，與PMC的病理特征有一定的相似，常規(guī)的影像學(xué)診斷可出現(xiàn)漏診情況[7]。長(zhǎng)鏈非編碼RNA(LncRNA)是一類(lèi)長(zhǎng)度超過(guò)200 nt，不具有編碼蛋白質(zhì)功能的基因片段，在腫瘤細(xì)胞的增殖、凋亡、侵襲、轉(zhuǎn)移、分化中發(fā)揮重要作用[8]。BARF基因激活的非編碼RNA(BARF activated long non-coding RNA，BANCR)是新發(fā)現(xiàn)的一種lncRNA，BRAF基因可通過(guò)Ras/ERK信號(hào)通路參與調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)、分裂、凋亡、分化等生物學(xué)事件，其異常表達(dá)可能導(dǎo)致腫瘤形成[9]。有研究表明BANCR在肺癌、胃癌、結(jié)腸直腸癌、非小細(xì)胞肺癌等惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中起重要的作用[10-11]，但是在PMC中的表達(dá)情況還無(wú)相關(guān)報(bào)道。本文具體探討了PMC的病理特征與BANCR表達(dá)的相關(guān)性，現(xiàn)總結(jié)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

研究時(shí)間為2015年2月到2018年1月，選擇在我院診治的83例PMC患者作為觀察組。納入標(biāo)準(zhǔn)：符合PMC的診斷標(biāo)準(zhǔn)，且在術(shù)中得到確認(rèn)；單側(cè)發(fā)病；均未接受放、化療；除外合并其它惡性腫瘤患者。同期選擇在我院診治的83例甲狀腺乳頭狀增生患者作為對(duì)照組，符合甲狀腺乳頭狀增生的診斷標(biāo)準(zhǔn)。2組患者的年齡、體重指數(shù)、發(fā)病位置、病灶直徑、性別等基線(xiàn)資料對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表1。2組患者的臨床與隨訪(fǎng)資料完整，研究得到了醫(yī)院倫理委員會(huì)的批準(zhǔn)，患者也在自愿條件下簽署了知情同意書(shū)。

表1 2組一般資料對(duì)比

1.2 試劑與儀器

RNA逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、qRT-PCR試劑盒由大連TaKaRa公司提供，RNA提取試劑TRIzol購(gòu)于美國(guó)Sigma公司。熒光實(shí)時(shí)定量PCR(real-timequantitative PCR， qRT-PCR)試劑盒購(gòu)自上海生工公司。BANCR引物、GAPDH引物用DNAMAN軟件設(shè)計(jì)并由大連TaKaRa公司合成。

引物序列：GAPDH正向引物：5'-AGAGGCAGGGATGATGTTCTG-3'，反向引物：5'-GACTCATGACCACAGTCCATGC-3'；BANCR正向引物：5'-ACAGGACTCCATGGCAAACG-3'，反向引物：5'-ATGAAGAAAGCCTGGTGCAGT-3'。

1.3 檢測(cè)方法

采用TRLzol一步法提取2組病灶組織標(biāo)本的總RNA，紫外分光光度計(jì)檢測(cè)RNA濃度，反轉(zhuǎn)錄為cDNA后，進(jìn)行qRT-PCR操作(20 μl)：50×ROX mix 0.4 μl，SYBRqPCR Mix 10 μl，cDNA產(chǎn)物1 μl，上下游引物各1 μl(10 μmol/l)，加去RNase水補(bǔ)足至20 μl，反應(yīng)條件：95 ℃預(yù)變性1 min，95 ℃ 15 s、60 ℃ 1 min，35個(gè)循環(huán)。根據(jù)公式2-ΔΔCt可以計(jì)算BANCR在不同組織中的相對(duì)表達(dá)量，相對(duì)表達(dá)量≥1.5為高表達(dá)。

1.4 病理數(shù)據(jù)收集

記錄觀察組患者的臨床病理參數(shù)，包括臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、分化程度等。

1.5 統(tǒng)計(jì)方法

選擇SPSS 22.00軟件對(duì)本研究的計(jì)量數(shù)據(jù)與計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)分析，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差、率等進(jìn)行表示，采用卡方χ2檢驗(yàn)對(duì)計(jì)數(shù)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，采用t檢驗(yàn)對(duì)計(jì)量數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，多因素分析采用多因素逐步回歸方法，檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。

2 結(jié)果

2.1 BANCR表達(dá)情況對(duì)比

觀察組BANCR相對(duì)表達(dá)量為(2.05±0.17)，高表達(dá)率為48.2%；對(duì)照組分別為(0.45±0.07)和3.6%，觀察組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 2組BANCR表達(dá)情況對(duì)比

2.2 BANCR表達(dá)與PMC病理特征的相關(guān)性

在觀察組中，BANCR高表達(dá)與PMC的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、分化程度都有顯著相關(guān)性(P<0.05)，見(jiàn)表3。

2.3 影響因素分析

在觀察組中，以BANCR高表達(dá)作為因變量，以臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、分化程度作為自變量并給予賦值，多因素逐步回歸方法分析結(jié)果顯示臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、分化程度均為BANCR高表達(dá)主要的危險(xiǎn)因素(P<0.05)，見(jiàn)表4。

表3 PMC患者的BANCR表達(dá)與病理特征的相關(guān)性(例，%)

3 討論

PMC占甲狀腺癌總數(shù)的70.0%左右，女性發(fā)病率高于男性，當(dāng)前在我國(guó)的發(fā)病人數(shù)和死亡人數(shù)呈上升趨勢(shì)[12]。雖然惡性腫瘤具有異質(zhì)性，但是由于PMC與良性腫瘤的臨床特點(diǎn)比較類(lèi)似，導(dǎo)致診斷困難。雖然借助病理診斷可以減少漏診率，但是術(shù)中冰凍切片的局限性限制了診斷的準(zhǔn)確率[13]。常規(guī)影像學(xué)診斷的特異性也有待提高，且檢查費(fèi)用也相對(duì)比較高。為此建立可靠、可行的檢測(cè)手段，對(duì)于PMC患者的早期診斷和治療具有重要的臨床價(jià)值[14]。

研究表明PMC的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移是一個(gè)涉及多分子和多基因相互作用的復(fù)雜過(guò)程，其中腫瘤抑制基因的突變、原癌基因的異常表達(dá)等均與PMC發(fā)生發(fā)展相關(guān)[15]。LncRNAs可以調(diào)控蛋白編碼基因的表達(dá)，其是通過(guò)影響鄰近基因順式調(diào)節(jié)編碼蛋白質(zhì)的基因進(jìn)行反式調(diào)節(jié)，并可參與調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、遷移、侵襲、凋亡和重新編程等過(guò)程[16]。相關(guān)研究證據(jù)顯示LncRNAs常常在多種不同腫瘤類(lèi)型中呈現(xiàn)異常表達(dá)情況，與相關(guān)腫瘤的診斷和預(yù)后有一定的相關(guān)性[17]。BRAF基因位于7號(hào)染色體長(zhǎng)臂，是鼠類(lèi)肉瘤濾過(guò)性毒菌致癌同源體，為一種原癌基因。BRAF在細(xì)胞外環(huán)境和細(xì)胞核之間起著連接作用，可使2個(gè)酪氨酸激酶受體發(fā)生二聚化，可被多種生長(zhǎng)因子及激素激活，進(jìn)而活化下游蛋白，與腫瘤的生成、增殖、分化有很好的相關(guān)性。本研究顯示觀察組BANCR相對(duì)表達(dá)量為(2.05±0.17)，高表達(dá)率為48.2%；對(duì)照組分別為(0.45±0.07)和3.6%，觀察組顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，表明BANCR在PMC中呈現(xiàn)高表達(dá)狀況。相關(guān)研究也發(fā)現(xiàn)BANCR可以通過(guò)自噬機(jī)制促進(jìn)PMC的增殖，通過(guò)抑制細(xì)胞周期蛋白來(lái)影響甲狀腺癌細(xì)胞株TSHR的表達(dá)，影響甲狀腺癌細(xì)胞的增殖和生長(zhǎng)[18]。

表4 PMC患者BANCR表達(dá)的影響因素分析(n=83)

PMC生長(zhǎng)緩慢，可在甲狀腺內(nèi)局限數(shù)年至數(shù)十年，預(yù)后相對(duì)比較好，但其中也有大約15.0%的患者存在侵襲表型[19]。在病理診斷過(guò)程中，由于部分PMC的形態(tài)特征不明顯，特別是呈濾泡狀排列的病例，需要與某些增生性病變進(jìn)行合理鑒別診斷。BANCR是一類(lèi)位于人9號(hào)染色體上長(zhǎng)度為693 bp的LncRNA，可在腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移過(guò)程中發(fā)揮重要作用。BANCR能提高M(jìn)EK/ERK通路的活性，降低E鈣黏素表達(dá)，改變整合素的表達(dá)，從而促進(jìn)癌細(xì)胞侵襲和轉(zhuǎn)移[20]。相關(guān)研究也表明BANCR高表達(dá)組的生存時(shí)間較BANCR低表達(dá)組顯著縮短，提示BANCR的高表達(dá)可能與PMC的預(yù)后不良有關(guān)[21]。本研究顯示在觀察組中，BANCR高表達(dá)與腫瘤的臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、分化程度都有顯著相關(guān)性(P<0.05)。相關(guān)研究表明BANCR可通過(guò)調(diào)節(jié)E-cadherin表達(dá)，在腫瘤細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化中發(fā)揮重要作用，是腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的關(guān)鍵因子[22]。

當(dāng)前手術(shù)與放療治療PTC的效果比較好，但是依然有部分患者可出現(xiàn)復(fù)發(fā)與轉(zhuǎn)移情況。有研究顯示在甲狀腺癌組織及細(xì)胞中BANCR表達(dá)量較正常甲狀腺組織顯著升高，過(guò)表達(dá)BANCR能夠激活細(xì)胞自噬，抑制細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞的自我更新，從而促進(jìn)甲狀腺癌細(xì)胞增殖[23]。本研究多因素逐步回歸方法分析結(jié)果顯示臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、分化程度為BANCR高表達(dá)主要的危險(xiǎn)因素(P<0.05)。相關(guān)研究也發(fā)現(xiàn)BANCR表達(dá)下調(diào)可促進(jìn)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化從而增強(qiáng)了肺癌侵襲性，增加了患者的不良預(yù)后風(fēng)險(xiǎn)[24]。不過(guò)本研究也有一定的局限性，樣本量還不夠大，沒(méi)有對(duì)患者預(yù)后進(jìn)行隨訪(fǎng)，可能存在一定的研究偏差，將在下一步研究中進(jìn)行深入分析。

總之，BANCR在PMC中呈現(xiàn)高表達(dá)狀況，與臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、分化程度等病理特征有顯著相關(guān)性，有利于輔助鑒別診斷PMC。